急性有机磷中毒动物机能指标的动态观察与测定

null急性有机磷中毒动物机能指标的动态观察与测定 急性有机磷中毒动物机能指标的动态观察与测定 指导老师：林明栋 余剑平 组员：陈春宇 陈达标 黄利军 李庆志 一 课题背景知识回顾一 课题背景知识回顾近年来，急性有机磷农药中毒（AOPP）患者逐年增多，对AOPP的防治成了国内外研究的一个热点课题。 有机磷酸酯类进入机体后，与血浆胆碱酯酶（AChE）生成难以水解的磷酰化胆碱酯酶，使 AChE 失去水解ACh的能力，导致不同程度的中毒表现。一 课题背景知识回顾一 课题背景知识回顾有机磷中毒时对AChE的抑制作用已阐明，但中毒过程中逐步出现的M样，M N样和中枢神经系统（CNS）的轻、中、重度中毒表现。通常只是以测定的AChE值为判定AOPP的中毒程度及指导抢救用药的常规方法。目前临床上的传统抢救方法是抗胆碱药阿托品和胆碱酯酶复能剂氯磷定配伍。一 课题背景知识回顾一 课题背景知识回顾临床上在急性有机磷中毒抢救方面工作都比较单一地依赖于血浆ChE值作为诊断依据，且在抢救过程中对该项指标进行动态监测也鲜见报道。 探索急性有机磷中毒及给予药物解救后多个指标的动态变化进行监测记录，能够帮助我们进一步了解中毒及解救药物作用机理，指导临床治疗。二 探索性研究成果阶段性汇报二 探索性研究成果阶段性汇报 （一）实验方案 ① 材料及方法① 材料及方法（一）试剂 0.1%硫酸阿托品、5%敌百虫、1%肝素、2.5%解磷定、75%酒精、胆碱酯酶试剂盒（南京建成生物研究所）、血糖试纸 ① 材料及方法① 材料及方法（二）仪器 血糖仪（Sure Step）、恒温水浴、分光光度计、离心机、微量移液管（50-200μL、200-1000μL）、试管架、一次性小试管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、烧杯（150ml）、玻璃棒、保温瓶、试剂瓶、测瞳尺（可用游标卡尺代替）、刀片、棉球① 材料及方法① 材料及方法（三）实验动物及分组 实验动物：家兔，体重2~2.5kg 动物分组：分阿托品急救组和解磷定急救 组，每组4个动物① 材料及方法① 材料及方法（四）动物模型建立 预实验： a. 取家兔2只，编号，称重。观察呼吸等各项指标； b. 将其中一个兔固定于兔箱内，以醮有酒精的棉球擦拭兔耳缘静脉，使血管扩张，充血明显时，用刀片横断耳缘静脉，取一小滴滴到血糖试纸上测定正常情况下血糖，然后让血液自然滴入试管（管中预先滴入2滴肝素，自然干燥后备用）中，供测正常胆碱酯酶活性用（测定胆碱酯酶活性备用血取出来后马上放进冰水中冷冻，保持酶活性，待整个实验全部血样取完后统一测定酶活性）。nullc. 按照2.0ml/kg的标准从耳缘静脉处注射5%敌百虫，观察记录表所示各项指标，中毒症状明显时按照b步骤中的方法取血测定血糖和备血测定胆碱酯酶； d. 出现重度中毒现象时，立即给家兔注射0.1%硫酸阿托品1ml/kg、当症状出现明显缓解时取血测定血糖、备血测定胆碱酯酶活性； e. 换用另外一只家兔，按照同样的方法步骤（d步骤注射2.5%解磷定）进行预实验。 f. 测定胆碱酯酶活性（步骤参考试剂盒使用说明书）；null 通过预实验过程主要摸索清楚出现中毒的大概时间、中毒的症状，以便适当地确定取血测定点，并熟悉操作； g. 按照前面的步骤和预实验摸索出来的取血点，分成阿托品急救组和解磷定急救组（每组4个家兔，雌雄各半）进行正式实验。null（二）实验结果中毒及解救体征变化趋势中毒及解救体征变化趋势给敌百虫后 家兔呼吸变得急促，瞳孔变小，唾液分泌增多，排便增多。几分钟后，家兔四肢开始瘫软，行动不便并出现肌颤。随着中毒时间延长，以上观察指标变化更为明显。瞳孔继续变小，并有发散现象；唾液大量增多，部分家兔泪腺分泌增多；排便频繁且逐渐呈稀糊状；呼吸更为急促，部分家兔可闻及湿罗音。肌颤明显加剧，四肢瘫软。其精神状况逐渐变差，目光涣散，最后意识模糊，甚至完全丧失。null阿托品解救 瞳孔迅速变大；唾液和泪腺分泌较前明显减少，排便减少，呈稀糊状；以上指标逐渐恢复到正常水平。其呼吸急促，可闻及明显湿罗音。肌颤较前减缓，但没有消失，四肢仍然完全瘫软无力，不能站立；精神状况逐渐恢复，意识清醒。 解磷定解救 呼吸较前平缓，未闻及湿罗音；唾液和泪腺分泌减少，排便减少；以上指标逐渐恢复到正常水平。其瞳孔大小基本不变，但发散现象消失；精神状况有所改善，但总体情况比第一组的差。注射足量解磷定后，肌颤马上消失，部分家兔后期再次出现轻微肌颤。其行动能力有所恢复 CHE活力变化CHE活力变化SPSS结果SPSS结果血糖变化血糖变化SPSS结果SPSS结果结果分析结果分析症状部分 急性有机磷中毒症状复杂多样，轻度者以M样症状为主，中度者可同时出现M样和N样症状。严重者除M样和N样症状外，还有显著的CNS症状。模型的建立是给大剂量的敌百虫使得家兔经历由M到CNS样症状的变化然后解救。nullM样症状 M受体存在于大多数副交感神经节后纤维和少数交感神经节后纤维所支配的效应器细胞膜上。当M受体被乙酰胆碱激活时，将产生一系列副交感神经兴奋的效应，表现为平滑肌痉挛和腺体分泌增加，故引起唾液和泪腺分泌增多，排便频繁且逐渐呈稀糊状以及瞳孔缩小等体征改变。分布于支气管和肺的M受体兴奋时，一方面使呼吸道的分泌物大量增多部分积聚于肺泡；另一方面使肺小血管通透性增加，加重肺泡液量，二者相加造成肺部湿锣音、肺通气和换气障碍。nullN样症状 随着中毒程度加深，乙酰胆碱将激活机体中的N受体，产生N样症状。N受体有N1和N2两种亚型，前者存在于自主神经节神经元，后者存在于骨骼肌运动终板。骨骼肌运动终板N1受体被激动时表现为肌束颤动，常先从眼睑、颜面等处小肌肉开始，逐渐波及全身，最后又转为肌无力，并可导致肌肉麻痹，严重时可因呼吸肌麻痹而死。交感神经节受乙酰胆碱刺激时，其节后交感神经纤维末梢释放儿茶酚胺使血管收缩，引起血压增高、心跳加快和心律失常。 null CNS作用 一般有机磷酸酯易挥发、脂溶性高，可通过血脑屏障而产生CNS作用。常呈双相反应，通常中毒早期以CNS兴奋为主，表现为躁动不安、幻觉、谵妄甚至抽搐、惊厥。后期转为抑制，出现意识模糊、共济失调、反射消失、昏迷等症状。严重中毒晚期，则出现呼吸中枢麻痹所致的呼吸抑制，甚至呼吸停止和血管运动中枢抑制引起的血压下降甚或循环衰竭，危及生命。CHE活力部分CHE活力部分中毒：静脉注射，有机磷与血液中的酶结合迅速，所以很快便到达重度中毒水平（30%） 阿托品解救：CHE活性降低到10%左右 ，猜想是M受体被阻断，乙酰胆碱的蓄积量进一步升高，机体应激性地从血液中转运一定量的CHE到神经接头处，以分解突然增多的乙酰胆碱，故测得血液中CHE活性下降。而后，血液中CHE含量降低将促进其在机体内的合成，从而使得酶活性恢复到注射阿托品前的水平。 解磷定解救：恢复胆碱酯酶活力，直接上升。血糖部分血糖部分中毒升高机理： 有机磷农药进人体内，作为强烈的应激原刺激机体发生应激反应，继而表现出一系列神经内分泌反应引起的机体各种机能代谢方面的变化。 N样作用时，交感神经兴奋，通过β受体刺激胰岛α细胞，使胰高血糖素分泌增加。而交感神经兴奋还可使儿茶酚胺释放增多，从而通过α受体抑制胰岛素分泌，结果表现为血中胰岛素减少和胰高血糖素增加，造成急性有机磷农药中毒患者血糖浓度升高。 机体应激时，通过下丘脑--垂体--肾上腺皮质轴的兴奋而使糖皮质激素分泌增加，糖皮质激素促进蛋白质分解，使氨基酸转移至肝，糖异生过程加强，从而使血糖升高。null阿托品解救：M受体被阻断，使得N样受体激活而没有与之拮抗的M样作用。血糖持续升高。症状缓解之后，机体功能的紊乱缓解，血糖降回正常水平。 解磷定解救：胆碱酯酶活性恢复很大程度，迅速分解最先到达的M样受体接头处的ACHE，使得血糖急剧上升。后逐步扩散到神经接头处，乙酰胆碱的堆积状况得到改善，机体功能恢复，血糖回落。结论结论血糖作为动态检测指标是可行的。null（三）实验小结null 1. 实验前应做足充分准备，包括试剂的准 备和仪器的调节； 　2. 由于给药方式的不妥，使得血糖与经典的胆碱酯酶的活性在中毒阶段无法体现出相关性，这是实验需要改进的地方。 3. 阿托品的作用使得CHE的活力出现短暂的降低，原因只是推测，并没有依据可循。其有关机理的探讨还有待进一步的实验。 4.血糖的变化趋势十分明显，但是并没有统计学差异，建议加大样本量。主要参考文献主要参考文献 陈克敏 主编. 实验生理科学教程. 北京：科学出版社. 2001 林明栋 主编. 比较机能实验学. 中山大学医学教务处. 2008 陈凯. 60例有机磷农药中毒的心电图分析与临床观察. Journal of Practical Electrocardiology JS（2006)Vol.15,No.1 　 何军山 卢新华 曹慧芳 李军 周志雄. 有机磷农药中毒对小鼠糖代谢影响的实验研究. 实用预防医学. 2003年2月第lO卷第l期 徐华. 浅谈3种不同方法测定血糖效果的分析. 内蒙古中医药. 2006年第2期 相其雁 王明山. 急性有机磷农药中毒患者血清淀粉酶及血糖检测的临床意义.中国煤炭工业医学杂志. 2007年9月第10卷第9期 王玉萍 王绪玲 李慧 张巡森 何风生. 三种血液胆碱酯酶测定方法的比较. 卫生研究. 2002年2月第31卷第1期 杨杰. 急性有机磷农药中毒患者24h动态心电图分析. Chinese Journal of Clinical Practical Medicine. January,2006,Vol.7,No.1 曹义战 晋兴 罗荣高 王伯良 仲月霞 顾炳权 陆将 何保健 傅国强. 血糖、白细胞和C-反应蛋白水平在急性有机磷中毒患者静脉血中的变化. 第二军医大学学报. 2002 Nov；23（11）