伊曲康唑分散片人体生物等效性研究

伊曲康唑分散片人体生物等效性研究 ?12? 中国现代药物应用2010年1月第4卷第2期ChinJModDrugAppl，Jan2010，Vol.4，No.2 张晓红 林琳 【摘要】目的研究伊曲康唑分散片在健康人体内的生物等效性。方法对20个健康受试者采 分别口服伊曲康唑分散片(受试制剂T)和伊曲康唑胶囊(参比制剂R)200mg后应用用对照试验， 以其药动学参数评价生物等效性。结果伊曲康唑与内标高效液相色谱法测定血浆中伊曲康唑浓度， 在4.97,496.50μg/L范围内线性良好，相对回收率大于96.48%，日内和日间及血浆杂质分离良好， RSD<7.09%，伊曲康唑受试制剂(T)和参比制剂(R)的主要药动学参数:tmax分别为(2.83?0.71)和(3.56?0.78)h，Cmax分别为(105.519?14.806)和(106.504?18.081)μg/L;t1/2分别为(19.91?3.48)和(19.83?4.67)h;AUC0?t分别为(1695.499?381.040)和(1803.281?372.540)μg/(h?L)，用面积法(AUC0?t)估算的伊曲康唑分散片相对生物利用度为(94.1+8.9)%。结论物等效性。 ——————————————————————————————————————————————— 【关键词】伊曲康唑分散片;高效液相色谱;生物等效性 TheBioequivalenceResearchofItraconazoleDisperserPieceinHealthyVolunteerLINLin.DaLianUniversityAffiliatedXinhuaHospital，Dalian116021， China 【Abstract】Objectivevolunteer.Methods TostudythebioequivalenceofItraconazoledisperserpieceinyounghealthy Twentyvolunteersweregiventhecomparisontestdesigninrandomizeditselfcrossover. ZHANGXiao-hong， 2种制剂在人体内具有生 Afteraseparatelyoraldose(200mg)ofItraconazoledisperserpiece (thetestformulation)andItraconazolecap-sule (thereferenceformulation)， theconcentrationsofItraconazoleinplasmaweredeterminedbyHPLC.Withit， thepharmacokineticparameterswerecalculatedandthebioequivalencewereevaluated.Results Itracon-azole， theinternalstandardandtheimpurityofhumanplasmawerewellseparated.AndthelinearrelationshipwasgoodwhenthecontentofItraconazolewas4.97——————————————————————————————————————————————— ,496.50μg/L.Therelativerecoverywasbiggerthan96.48%， theRSDinthedateandduringthedaywassmallerthan7.09%.Themainpharma cokineticparame-tersoftwoformulations， referenceandtestpreparationwereasfollow:tmaxwere(2.83?0.71)and(3.56?0.78)h，Cmaxwere(105.519?14.806)and(106.504?18.081)μg/L;t1/2were(19.91?3.48)and(19.83?4.67)h;AUC0?twere(1695.499?381.040)and(1803.281?372.540)μg/(h?L);therela-tivebioavailabilityofItraconazoledisperserpiecewas(94.1?8.9)%，whichwasestimatedbytheareameth-od.Conclusion Thetwopreparations(thereferenceandthetest) arebioequivalenceinthehumanbody. 【Keywords】Itraconazoledisperserpiece;HPLC;Bioequivalence 伊曲康唑系三唑类抗真菌药，具有抗菌活性强，抗菌谱 不良反应少等特点，尤其是对深部真菌感染疗效较好。广， 本试验采用高效液相色谱法通过测定人血浆中伊曲康唑的浓度，并以市售伊曲康唑胶囊(斯皮仁诺)作对照，比较伊曲康唑在2种制剂中的药物代谢动力学特性，并对伊曲康唑分 ,1, 散片进行生物等效性评价，为该药的临床应用和药物注册提供必要的参考依据。1材料和方法1.1 受试制剂伊曲康唑分散片(浙江大德药 业集团有限公司提供。批号:050201，含伊曲康唑0.1g/片; ——————————————————————————————————————————————— 药品和试剂 1.3 受试对象20名男性健康受试者，年龄19,24岁，身 体质量52,86kg，体重指数19,23，经体检高155,189cm， 证明肝，肾功能正常，心电图正常。均符合受试者人选要求， 实验前两周及实验期间未服用其他任何药物，试验期间统一饮食，受试者实验前均签署知情同意，该试验经大连大学附属新华医院药事伦理委员会批准。1.4 给药方案与血样采集采用双周期交叉试验设计，将20名受试者随机分成甲、乙两组。第一周期试验甲组服用伊曲康唑分散片(T)0.2g，乙组服用伊曲康唑胶囊(斯皮仁 R)0.2g;第二周期试验甲乙组给药顺序颠倒，诺，两周期试服药方法:禁食10h后清晨按规定的剂量和验间隔为14d， 方法单次口服试验药品，服药后4h和10h进食统一的清淡饮食，服药后受试者在室内休息，采血期间禁烟酒和含咖啡类饮料，避免剧烈运动。 1，2，3，4，5，6，8，12，24，48，血样自给药前(0h)和0.5，和72h由前臂静脉采血5ml并立即移入经肝素处理的试管 70?冰箱中冷冻离心(3500r.p.m)10min，分离血浆，于-中， 保存待测。 1.5血药浓度测定1.5.1 Discovery-C18柱，5um粒径，250×4.6 ——————————————————————————————————————————————— mm;流动相为乙腈-磷酸二氢钾缓冲液(Ph7.0)(取磷酸二氢 色谱条件 参比制剂伊曲康唑胶囊(斯皮仁诺，西安杨森制药有限公司生产，批号:060315986，含伊曲康唑0.1g/粒)。伊曲康唑对200401，批号:100631-中国药品生物制品照片(纯度99.3%，检定所)，内标洛伐他丁对照品(含量97.2%，批号:10060-200502，中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)，甲醇为色谱纯(天津市大茂化学制剂厂);其他试剂为分析纯，空白人血浆由大连大学附属新华医院提供;水为纯净水。1.2仪器LC-10AVP高效液相色谱仪，SPD-10AVP型紫外检测器(日本岛津公司)。 作者单位:116021大连大学附属新华医院 加0.1mol/L氢氧化钠溶液291ml、加水稀释至钾6.8g， 中国现代药物应用2010年1月第4卷第2期ChinJModDrugAppl，Jan2010，Vol.4，No.2 ?13? 1000ml)(65:35，V/V)，流速为1.0ml/min，柱温为室温23?，检测波长为263nm，进样量20ul。1.5.2 样品处理精密量取500μl血浆置5ml离心管中， 加乙腈-水(70:30)混合溶液50μl，加内标溶液(132mg/L甲 醇洛伐他汀溶液)50μl，再加1mol/L磷酸氢二鉀溶液100μl，涡旋30s，加甲基叔丁醚3ml，振荡混合5min，离心5min(1000r.p.m)，取上清液于5ml离心管中，在40?的氮气流下挥干，残留物用150——————————————————————————————————————————————— μl流动相复溶，涡旋混合60s，离心5min(15000r.p.m)，取上清液20μl供HPLC分析。1.5.3 检测方法专属性分别取6名受试者的空白血浆500μl，“样品处理”按依法操作，得色谱图A;将一定浓度的标准溶液和内标溶液加入空白血浆中，依同法操作，得色谱 内标物洛伐他图B;其中伊曲康唑保留时间约为9min左右， “样品处理”同法操作，得汀的保留时间约为10min左右;按 色谱图C。结果明，空白血浆中内源性物质不干扰伊曲康唑及洛伐他汀(内标)的测定 。 伊曲康唑血浆样品处理后室温24h，反复冻融3次和长期冷 冻17d稳定。1.6 将各受试者服药后各时间点血浆中伊曲康 唑的浓度数据通过计算机，采用梯形法计算AUC0-t和AUC0-? 数据分析 Tmax和Cmax值，以半对数作图法，由消除相的浓度点计算t1/2，采用实测值，按下式计算受试制剂伊曲康唑的相对生物利用度(F) F=AUC0-t(受试制剂)/AUC0-t(参比制剂)×100%采用上海中医药大学孙瑞元、郑青山等主编的生物统计DAS2.0对主要药动学参数对数转换后进行方差分析，软件， 2a)置信区间和双单侧t检验法评价制剂的生进一步采用(1-物等效性;Tmax采用非参数统计方法。22.1 ——————————————————————————————————————————————— 结果 血药浓度-时间曲线及主要药代动力学参数20名受试者口服受试制剂和参比制剂0.2g后伊曲康唑的平均血药浓度-时间曲线及主要药代动力学参数，见图2、表1 。 图2药-时曲线 18名受试者口服受试剂和参比制剂后伊曲康唑的平均 表1 参数Cmax/μg/LTmax/hT1/2/hAUC0?t/μg/LAUC0??/μg/L F/% 20名受试者口服伊曲康唑分散片(剂量:0.2g)后的药动学参数 受试试剂105.519?14.8262.83?0.7119.91?3.481695.499?381.0401880.656?434.251 94.1?8.9 参比制剂106.504?18.0813.56?0.7819.83?4.671803.281?372.5401975.993?448.720 图1测定血浆中伊曲康唑和内标洛伐他汀色谱图 (A)空白血浆;(B)空白血浆中加入50μL伊曲康唑(100μg/L)和50μL内标洛伐他汀(132μg/L);(C)受试者1服用参比制剂伊曲10min左右康唑胶囊6h后的血浆样品(9min左右峰为伊曲康唑，峰为洛伐他汀) 1.5.4 ——————————————————————————————————————————————— 标准曲线取空白血浆500μl，加伊曲康唑标准系列 9.93，溶液50μl，配制成相当于伊曲康唑血浆浓度为4.97， 2.2 生物等效性评价将伊曲康唑分散片的主要药动学参 AUC0?t进行自然对数转换，先用双交叉实验设计的数Cmax、 49.65，99.30，198.60，297.90，496.50μg/L的标准溶液，按 “样品处理”依法操作，每一浓度进行双样本分析，进样20μl，色谱图;以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求0.00187+0.00414x，r=0.9996，得的直线回归方程:Y=-线性范围为4.97,49650μg/L。1.5.5 提取回收率和精密度按标准曲线配制方法制备含 99.30，297.90μg/中、高三个浓度分别为9.93，伊曲康唑低、 L的含药血浆0.5ml，“样每一质量浓度进行6样本分析，按 品处理”项下操作，计算相对回收率，低、中、高3种质量浓度96.48%，102.4%，n=6。的伊曲康唑相对回收率为97.58%，按标准曲线配制方法制备伊曲康唑低、中、高三个浓度分别99.30、297.90μg/L的含药血浆0.5ml，为9.93、每一质量浓 “样本处理”度进行6样本分析，按项下操作，求得日内和日低、中、高3种质量浓度的伊曲康唑日内RSD分别间精密度， 2.12%、3.10%。N=6，为6.35%、日间RSD分别为7.09%，2.42%，4.18%，n=6。1.5.6 取空白血浆500μl，按“标准曲线的制备” ——————————————————————————————————————————————— 项下的方法配制伊曲康唑低、中、高三个浓度分别为9.93， 稳定性 方差分析，双向单侧t检验以及90%可信区间统计分析，结 果表明:均拒绝伊曲康唑分散片生物不等效假设。受试制剂伊曲康唑AUC0-t的90%置信区间为参比制剂的90.0,中，97.5%，AUC0-?的90%置信区间为参比制剂的91.9,98.1%，Cmax的90%置信区间为参比制剂的95.1,104.1%。3 讨论 本研究采用的高效液相内标法测定伊曲康唑血浆浓度，经方法验证，定量限为4.965μg/L，结果较为理想，甲基叔丁 ,2，3，4, ，醚干扰少，与主药内标分离良好所以选用甲基叔丁醚 作为提取溶剂处理血浆样品。所以，在生物等效的基础上， 使用分散片可以使起效时间更快。 参考文献 ,1,孙黎，2002，21(2):等.伊曲康唑制剂的临床应用.医学导报， 99-101. ,2,魏敏吉，等.国产伊曲康唑胶囊相对生物利用度研究.中国临 2000，16(6):415-418.床药理学杂志， ,3,白林，等.高效液相色谱法测定人血清中伊曲康唑浓度.中国 1999，19(1):7-9.医院药学杂志， ——————————————————————————————————————————————— ,4,宋一，等.HPLC法测定伊曲康唑片的含量及有关物质的检查. 2006，20(3):165-166.中国药事， 99.30，297.90μg/L，每一浓度进行三样本分析。结果表明 ———————————————————————————————————————————————