高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量 高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草 皂苷?b的含量 LISHIZHENMEDICINEANDMATER1AMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.4 时珍国医国药2007年第18卷第4期 党参等中药,加以土茯苓等解毒药共用起到抗癌扶正的作用,化 积颗粒是在益气,活血,解毒治则下选药组方,协同化疗体现明确 的抑瘤作用达42.3%.以往的研究结果提示,化积颗粒明确具 有抑瘤作用,并影响Slso小鼠1'53和PCNA达,为了进一步说明 益气活血解毒治则的正确性,本研究就原复方中分别体现益气, 活血,解毒的药味进行分组,即形成拆方1(益气组),拆方2(益 气解毒组),拆方3(益气活血解毒组),通过抑瘤率比较说明,无 论单纯中药还是中药合用化疗药物CTX,均显示原方和益气活血 解毒组的抑瘤效果优于益气和益气解毒组;本实验研究结果证明 化积颗粒的抑瘤作用,通过拆方研究表明:益气组和解毒组的抑 瘤作用均小于益气解毒组和原处方组;化积颗粒合并化疗药结果 也显示同样的作用结果,由此亦说明中医治则指导下的化积颗粒 临床疗效明确. 中药各组与化疗药物合用,均有提高NK细胞活性的作用, 而在NK活性方面未能显示与抑瘤率类同结果和趋势,这也是今 后需详细研究的内容.由此提示,一方面益气活血解毒治则的正 确性及其指导下复方治疗肿瘤的明确疗效;另一方面在复方中体 现某一类功效的有效部位群和有效成分研究是目前亟待解决的 问题. 参考文献: [1]孙燕,余桂清.中西医结合防治肿瘤[M].北京:北京医科大学中 国协和医科大学联合出版社,1995:56. 高效液相色谱法测定断血流 胶囊中醉鱼草皂苷1Vb的含量 陈燕祥 (湖北省武汉市第七医院430022) 摘要:目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷?b的含量. 采用反相高效液相色谱法, 色谱柱为HypersilBDS?CI8(4.6mm×200mm,5),流动相为甲醇一水(80:20),检测波 长为250nm,流速为1n1l? min,.结果醉鱼草皂苷1Vb在3.17,31.7g/范围内峰面积与其浓度呈良好的线性 关系,平均回收率为99.4% (RSD=1.2%).结论此法简便,准确,可作为断血流胶囊含量测定的方法. 关键词:断血流胶囊;醉鱼草皂苷Ivb;高效液相色谱法 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2007)04-0867-02 HPLCDeterminationofBuddlejasaponinsIVbinDuanXueliuCapsules CHENYan?xiang (SeventhHospitaZofWuhan,Wuhan430022.China) Abstract:ObjectiveToestablishamethodofHPLCfordeterminationofBuddlejasaponins1 VbinDuanXueliUCapsules.Meth. ods,nleRP?HPLCmethodwasused.TheSim?packwasHypersilBDS?Cl8(4.6mln× 200mln,5tun).,nlemobilephaseWasmetha— nol— water(80:20)andthedetectionwavelengthWas250nln.TheflowrateWas1.0ml?min,.Res ultsThecalibrationcurves werelinearintherangeof3.17, 31.7rnlforBuddlejasaponinsIvb.,nleaveragerecoveryofBuddlejasaponinsIVbWas99.4% (RSD=1.2%).CondusionThemethodissimple,accurateandcallbeusedfordeterminationof DuanXueliuCapsuleS. Keywords:DuanXueLiuCapsules;Buddlejasaponins1Vb;HPLC 醉鱼草皂苷Ivb又名断血流皂苷A,断血流胶囊原质量标准 中采用薄层扫描法测定其在制剂中含量-l,此法由于杂质干扰, 薄层色带颜色深,结果重现性差J.本文作者尝试采用文献方 法测定断血流胶囊中的醉鱼皂苷IVb的含量,并进行方法学 验证. 1仪器与试药 高效液相色谱仪(岛津LC一10AT,检测器SPD.10A,浙大N一 2000软件),数控超声波清洗器(KQ.300DE型,昆山市超声仪器 有限公司),天平(德国塞多利斯GENIUS210型);断血流胶 囊(江苏晨牌药业有限公司生产,规格:0.35g/粒,批号050529, 050610;自制,规格:0.35g/粒,批号050901,050902,050903),醉 鱼草皂苷Ivb.(断血流皂苷A)对照品(中国药品生物制品检定 所提供,含量测定用,批号110782-200301),甲醇(色谱纯),其他 试剂均为分析纯.水为重蒸水. 收稿日期:2006-09-07;修订日期:2006.12-20 作者简介:陈燕祥(1962?),男(汉族),湖北武汉人,现任武汉市第七医院 副主任中药师,学士学位,主要从事中药制剂开发及质量标准研究工作. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为C,8(大连依利特HypersilBDSC4.6 mm×200mm,5);流动相为甲醇一水(80:20);检测波长为 250nm;流速1ml/min;柱温为室温;灵敏度0.04AUFS. 2.2系统适用性实验在上述色谱条件下,精密吸取醉鱼草皂苷 Ivb对照品溶液及供试品溶液各20,分别注入液相色谱仪,记 录色谱图(见图1,2).在该色谱条件下,供试品色谱中在与醉 鱼草皂苷IVb对照品色谱相应的保留时间位置上有相应的色谱 峰,理论板数按醉鱼草皂苷Ivb峰计算,对照品为2619,供试品为 4737,主峰和杂峰之间的分离度均大于1.5,符合《中国药典》要 求,规定理论板数按醉鱼草皂苷Ivb峰计算不得低于2000. 在上述色谱条件下,精密吸取线性验证中序号为4的对照品 溶液20,注入液相色谱仪,连续进样操作5次,醉鱼草皂苷IVb 峰面积RSD值1.9%,对照品进样重复性符合《中国药典》要求. 2.3专属性验证按照工艺,制成不含断血流的阴性样品,同供 试品溶液制备法制备得阴性样溶液.在上述色谱条件下,精密吸 取阴性样品溶液20,注入液相色谱仪,记录色谱图(见图3). 在该色谱条件下,在与醉鱼草皂苷Ivb保留时间相同的位置未出 ? 867? 时珍国医国药2007年第18卷第4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATEPdAMEDICAREsEARcHooVOL'8NO?4 现色谱峰,表明其它成分对醉鱼草皂苷?b的测定无干扰,方法 的专属性符合要求. 48 44 40 36 32 鼍28 正)24 20 l6 l2 8 4 0 图1醉鱼草皂苷1Vb对照品液相色谱图 2.4线性验证精密称取醉鱼草皂苷?b对照品3.17mg,置50 IIll量瓶中,加甲醇至刻度,使溶解,摇匀,精密量取0.5,1,2,4,5 IIll,分置10IIll量瓶中,用甲醇定容,摇匀.吸取上述5种浓度的 溶液各20注入液相色谱仪,以醉鱼草皂苷?b峰面积为纵坐 标,浓度为横坐标,得线性方程为:Y=7621.5X,2317.2,r= 0.9998.表明醉鱼草皂苷IVb浓度在3.17,31.7IIll范围内 峰面积线性关系良好. 2.5重复性实验取同一批号的供试品(050901),按供试品含 量测定项下方法测定6次,结果醉鱼草皂苷?b平均含量为2.2 me,/粒,RSD值为1.4%. 随人,一 48 44 40 36 >32 ?28 24 20 16 12 8 4 0 图2供试品液相色谱图 ... m ..... 图3缺断血流阴性样品液相色谱图 2.6稳定性实验精密吸取断血流胶囊供试品(050901)溶液20 ,分别在0,4,8,24,28h测定,结果醉鱼草皂苷IVb峰面积平均 值为117154.4,RSD值为1.0%.供试品溶液28h内稳定性良 好,可满足测定时间的要求. 2.7加样回收率实验精密称取已知含量的样品(050901)6份, ? 868? 分别精密加入不同浓度醉鱼草皂苷IVb对照品溶液10IIll,按供 试品含量测定项下的方法进行操作,测定并计算样品中醉鱼草皂 IVb的回收率.结果见表1. 表1醉鱼草皂苷IVb加样回收率实验结果 2.8供试品的含量测定 2.8.1对照品溶液的制备精密称取醉鱼草皂苷IVb对照品适 量,用甲醇制成每毫升含15g的溶液,作为对照品溶液. 2.8.2供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物,混 匀,研细,取0.3g,用75%乙醇50IIl1分别超声提取(300W,40 kHz)2次,15Tnin/次,滤过,滤液置100ml量瓶中,加75%乙醇至 刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45)滤过,取续滤液,即得. 2.8.3测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20,在 上述色谱条件下注入液相色谱仪,测定,即得. 2.8.45批样品含量测定结果见表2. 表2样品含?测定结果 3讨论 用高效液相色谱法测定断血流中醉鱼草皂苷IVb含量,经线 性,精密度(重复性实验,稳定性实验),准确度(加样回收率实 验),专属性等方法学验证,证明其符合定量分析的要求,且简 便,快速,适于作为断血流胶囊的含量测定方法.故将已有标准 中含量测定的方法由薄层扫描法修改为高效液相色谱法是可 行的. 3.1检测波长的选择取醉鱼草皂苷IVb对照品适量,加甲醇溶 解制成每毫升含0.01mg的溶液,结果在250nln处有较强的吸 收,与文献"记载一致,故选择250nm处作为检测波长. 3.2供试品溶液制备方法的选择将用3种方法制备的同一批 号的供试品溶液注入色谱仪,测定.结果醉鱼草皂苷IVb含量, 方法1(按断血流片标准中的方法)为1.48me,/粒,方法2(按 文献方法)为2.04me,/粒,方法3(溶剂改为甲醇,余同方法2) 为1.92me,/粒.3种制备方法测得的醉鱼草皂苷IVb含量以方 法1最低,方法2最高,且方法2操作的简便性,环保性也较好, 故供试品制备方法选择方法2为宜. 参考文献: [1]卫生部药品标准?新药转正标准,第27册[S].2000:53. [2]徐国兵,方晓明,樊和平.高效液相色谱测定断血流颗粒中断血流 皂苷的含量[J].中国药学杂志,2005,40(2):3l7. [3]杨絮,余世春,王有胜,等.HPLC法测定断血流片中断血流皂苷 A的含量[J].中国药学杂志,2002,16(4):l5. [4]国家药典委员会,中国药典,I部.[s].北京:化学工业出版社, 2oo5:608. ?如驰卸 ^叫\-{I拿