P63／α-SMA鸡尾酒法标记肌上皮细胞在诊断乳腺导管原位癌和浸润性癌中的应用

P63／α-SMA鸡尾酒法标记肌上皮细胞在诊断乳腺导管原位癌和浸润性癌中的应用 P63,α-SMA鸡尾酒法标记肌上皮细胞在诊断乳腺导管原位癌和浸润性癌中的应用 实用医院临床杂志2004年l0月第l卷第4期87 论着 P63/a—SMA鸡尾酒法标记肌上皮细胞在诊断乳腺 导管原位癌和浸润性癌中的应用 董丹丹,杨红,李科,徐钢 (四川省人民医院病理科,成都610072) 【摘要】目的用P63,平滑肌肌动蛋白(a.SMA)和鸡尾酒(P63+a.SMA)法标记乳腺肌上皮细胞,探讨 其在辅助诊断乳腺导管原位癌与浸润性癌中的意义.方法对6例导管原位癌和84例浸润性乳腺癌进行 肌上皮细胞染色,其中浸润性癌制作成组织芯片,样本直径0,6mm,采用免疫组织化学方法分别标记P63,a— SMA和鸡尾酒(P63+a.SMA),用统计学方法分析它们之间的关系.结果鸥尾酒(P63+a.SMA),a—SMA和 P63标记导管原位癌肌上皮细胞平均染色强度值分别是6.80,6.38,5.97,鸡尾酒对a—SMA,P63的P值分别 为0.023,0.000.l3.5%的浸润性癌肿瘤细胞对P63,鸡尾酒(P63+a.SMA)呈阳性达.结论鸡尾酒(P63 +a.SMA)法标记肌上皮细胞在三者中最敏感,特异性强,部分浸润性癌的肿瘤细胞对鸡尾酒有不典型表达, 但不影响对肌上皮细胞的判断,肌上皮细胞鸡尾酒染色可作为诊断导管原位癌与浸润癌的有效辅助手段. 【关键词】乳腺癌;免疫组织化学;P63;平滑肌肌动蛋白(a.SMA);肌上皮细胞鸡尾酒 【中图分类号】R737.9;R392,3【文献标识码】A【文章编号】1672.6170(2004)04.0087 —03 Myoepitheliumcellcocktail(P63+一SMA)Diagonseductalcarcinomainsituor invasivebreastcarcinomaDONGDan-dan,YANGHong,L1Ke,etal(PathologyDepartmentof SichuanProvincialPeople'sHospital,Chengdu610072,China) 【Abstract】 ObjectiveTouseP63,Smoothmuscleactin(a-SMA)andcocktail(P63+a-SMA)antibodies detectingbreastmyoepitheliumcellandinvestigatetheirrolesindiagonsisingductMcarcinomainsitu(DCIS)or invasivebreastcarcinoma.MethodImmunohistochemistrywasusedtodetecttheexpressionofP63.Smoothmuscle actinandcocktail(P63+a.SMA)inDCIScasesandinvasivebreastcarcinomatissuemicroarrays.Apairedttestand F— testwasusedtoevaluatewhethertheDCISmyoepitheliumcellstainingWassignificantlydifferentResultsThe cocktailstainsmyoepitheliumcelllayersmoreintenselythaneitherP63orSMAalone.themeanstainingintensities were6.80,6.38,5.97forthecocktail,SMAandP63(P=0.023and0.ooOforcocktailVSSMAandcocktailVS P63,respectively).Atoofl3.5%invasivebreastcarcinomahadpositiveP63andcocktailstainings.Conclusions Myoepitheliumcellcocktailincreasesthestainingsensitivityandspecificity,itcouldbemakenaimportantwayto diagnosistheDCISorinvasivebreastcarcinoma. 【Keywords】 Breastcancer;Immunohistochemistry;P63;Smoothmuscleactin;Myoepitheliumcellcocktail 乳腺导管原位癌(DCIS)与早期浸润癌的诊断与鉴别诊 断一直是一个棘手的问题,肌上皮细胞(Myoepiethelialceils, MEC)是否完整是判断早期浸润性癌的重要指标.过去常用 a—SMA标记肌上皮细胞,虽然敏感性强,但特异性差.P63蛋 白是最近被发现标记肌上皮细胞的核蛋白,它具有特异性 强,不标记血管平滑肌细胞,间质肌纤维母细胞等特点_】. 采用免疫组化鸡尾酒法,将a—SMA和P63二者结合使用,其 目的是对比鸡尾酒法是否较单独使用a.SMA或P63对肌上 皮细胞有更佳的染色效果,探讨P63和a—SMA标记肌上皮细 胞在浸润性和非浸润性乳腺肿瘤中的应用价值及意义. 作者简介:董丹丹,女,本科,技师,主要从事免疫病理学临床与研究. 1材料与方法 1.1标本来源收集20012003年本院乳腺手术标本90 例,其中乳腺导管原位癌6例,浸润性导管癌84例,按2003 年版WHO乳腺肿瘤组织学分类进行分类_2]. 1.2方法 1.2.1抗体来源抗P63单克隆抗体为美国Maxin公司产 品,稀释度l:100,购于福州迈新公司;抗a—SMA单克隆抗 体,稀释度l:100;EnvisionTM试剂盒(K4001)为丹麦Dako 公司产品.均购于成都基因公司. 1.2.2染色方法免疫组织化学均用LDP法_3].?鸡尾酒 法将P63和a—SMA混合,P63/a—SMA抗体的最终工作浓度为 88 1:100,-再进行免痉组织化学LDP法反应:?用已知阳性的 乳腺癌组织切片作为阳-性对照,相同切片以PBS代替一抗, 作为阴性对照.,?采用组织微阵列(TMA)免痤组织化学的 方法研究9o倒乳腺癌对P63,SMA及鸡尾酒P63/~一SMA的 表达情况每一例标本先在HE染色切片上定位,选取癌的 位专钻取组织,取样针直径为06一.制作成2个6x8矩阵 的TMA蜡块,以4can厚度琏续切片.贴于1%多聚耐氨酸处 理的载玻片.各取1张进行HE染色供形态学观察,再进行免 疫组织化学染色取正常的乳腺组织作为对照. 1.2.3结果判断?抗体表达部位:P63蛋白阳性细胞胞校 呈棕黄色SMA阳性细胞胞浆呈棕黄色;鸡尾酒阳性细胞 胞核,胞浆同时呈棕黄色;?乳腺导瞥原位癌肌上皮细胞的 P63,0一SMA,鸡尾酒P63/a—SMA抗体标记结果报据染色强度 舟为强阳性c+++),中度阳性(++).弱阳性(+)和阴性(一), 腺体周围?75%的部分被着色.视为肌上皮细胞完全染色, <25%部丹被着色,规为肌上皮细胞部分色.=6例导管原 位癌每一例标本计数150个腺体,共计数900个腺体:乳腺 导营.,l,zt-L皮系统通过肌上皮细胞的染色被显示出来后. 完全强阳性着色7分.部分强阳性6丹完全的中度阳性5 分,部分中度阳性4丹完全的弱阳性3分部分弱阳性2 分,_5月性1分.=馒润性乳腺癌对P63,q—SMA,鸡尾植P63/o SM^的表达,将染色的强度明显高于阴性埘照的视为阳性: 1.2.4统计学处理计算每僦标本标记P63SMA和鸡尾 谭染色强度值及其均值.作配对检验,采用SPSS10.0版统 汁软件包进行处理. 2结果 2.16倒乳腺导管原位癌P63,a—SMA,鸡尾酒(P63+.. SMA)的标记结果见表1&一SMA在乳腺肌上皮细胞的胞浆 呈阳性表达.舒泌上皮呈明性,间质肌纤维母细胞和血管平 滑肌细胞胞浆染色呈阳性(图I)P63对乳腺肌上皮细胞的 胞核呈阳性表选,丹泌上皮,问质肌纤维母细胞和血管平滑 肌细胞胞浆染色均里阴性(图2).鸡尾酒染色法使肌上皮细 胞的胞浆和胞核同时着色.染色结果驯显强于单独使用 】=,63SMA的效果(圈3).分泌上皮无表达.问质肌纤维母细 胞和血管平滑肌细胞胞浆里阳性而胞棱呈阴性=6例乳腺导 管原位癌P63,n—SMA和鸡尾酒(P64+a—SMA)对肌上皮细 胞的平均染色强度值及P值见表2 图】导管原位癌肌上皮细胞标记0一SMA胞泉呈阳性反应.同时血 管平滑肌,^日]质的肌井雄母蛔胞咆裳呈阳性豆应LDP击x200 0月第1卷第4 表I6倒导管原位癌用P6j,SMA和鸡尾酒标记肌上皮细胞的阳性率 P63 . SMA Clx-kil 597 639 680 0l573 0】4帖 0l832 579 6l0l】 6648J 6282l 66589 69619 l|_誊.?...?. l':.'稚?,j. 一图2旱管厚住墙肌上皮细胞标记P63呈酏跃性胞棱阳性反应 血管平滑肌,间质的肌纤维母细胞均无阳性表进LDP洼x2oo 实用医院临床杂志2004年l0月第1卷第4期 围3导管原位癌肌上盘细胞标记鸡足植(P63+SMA)胞装, 胜谊均呈阳l生反应.血管平滑肌,问席的肌纤蛙母细胞胞裴呈阳 性但胞牺呈阴性反应LDP法x200 圈4凌l润性导管墙肿瘤蛔胞靠记P63抱柱呈弱阳性反应 LDP法x200 蔺5浸湘性导营癌细胞蛔抱标记鸣尾湎IP63+o-sMA1胞棱呈 弱阳性反应1|l】P击x200 本组实验结果发现,单独使用SMA和P63标f己腺体肌 上度细胞时完全阳性着色率舟别为?%,68%,平均色强 度值分别是639.597,差异具有显着性意义(P=0023), 说朋n—SMA比P63敏感.鸡尾酒染色时完全阳性率为 93哂.平均染色强度值为6,8O,日月显高于单撞使用P63和a— SMA.差异具有显着性意义(尸=0000,0026).可见鸡尾酒 染色强度最强由于F63和SMA是针对同一靶细胞(肌上 皮细胞)的不同靶抗原(胞浆和胞核)的两种抗体.使用鸡尾 酒法明显提高了对靶细胞的识别能力,提高了免痉反直的强 度和敏感性 实验中导管原位癌6侧.100%的腺体周围肌上皮细胞 P63里阳胜染色肌纤维母细胞和血管平滑肌细胞P63染色 呈阴性,说明P63对乳腺肌上皮细胞具有很强特异性.与文 献报道的结累相一致.用鸡尾酒法进行标记.对于问质的 肌纤维母细胞和血管平滑肌细胞SMA染色里胞浆阳性着 色,细胞胞核P63染色却呈阴性,结合形态学的特征,肌上度 细胞包绕在导管腺上皮周围,肌纤维母细胞往往位于导管之 间的间质,而血管平滑肌细胞的出现往往伴有肿瘤性新生小 血管的腔睹c,很容易排昧这些交叉反应的假阳性结果采用 鸡尾酒法,提高了肌上皮细胞染色的特异性 实验中还发现.31%的导管原位癌腺体肌上皮细胞P63 呈不完全阳眭表达(少于25%的肌上皮细胞着色).而69- 完全阳性表达的病例(多于75%的肌上皮细胞着色)大多也 呈跳跃性的胞核着色.这可能是由于导管原位癌增生的肿增 细胞将肌上皮细胞拉扯成墒平状,每个肌上皮细胞占据了较 大的面积,当孢浆之间完整相连时,胞核的距离却显得较远 造成的.影响了观察者对肌上皮细咆层完整性的判断.当采 用鸡尾酒珐标记后,94%的腺件肌上皮细胞呈完全阳性表 达.P63胞核阳性染色时出现断裂和跳跃的部位SMA有鞍 连续的胞浆染色显示了较完整?句肌上皮细胞层围绕DClS, 利于结果的观察 RWWerling等报道.P63对乳腺肌上皮细胞有很强的 特异性,在所有正常乳腺组织,良胜增生性病变,非典型增生 和导管原债癌的肌上皮细胞中均呈阳性表达.在少部分浸润 性痈的肿瘤细魄胞核中也有表达,这可能是肿瘤细胞有 P63的基因存在引起的本文的实验结果也证实,135话的 浸润性乳腺癌肿瘤细胞对P63呈阳性表达.n—SMA标记无阳 性.鸡尾酒莹阳性表达率仍为13.5%.强度没有增加可见 这种非她型表达主要是由P63引起的.与?.SMA无关=阳性 细胞里分散,跳跃性胞核着色强度明显比肌上皮纲胞着色 弱,根据常规HE切片的形态学观察和IHC的染色结果很容 易排除选种不型着色,不影响对乳腺肌上皮细胞的判断 综上所述.P63标记乳腺肌上皮细胞特异性强SMA则很敏 感.运用|'63,.一SMA鸡尾酒法.同时增强了反应的特异性和 敏感眭,对判断乳腺导管原位癌有无浸润是有效的辅助手 段,可作为判断提润性与非浸润性乳腺癌的常规方法. 参考文献 _l.DiComoCJ.Uri呦.BabayanI.P63exp~ionpr,,ffik~in humtmnodalandtuiiicirrissu~【J『ClinCanc~R,2002.8c3): 4q4—501 .2】l'avassoliEFDevi[eeWHO:Pathalo~,,&genetics.Tumoursoflhe bre~'-tand~nalegenitzdorgans[J.LrI:IARCPr衄s.2003,lO. f3]霉婪兜症蛆妲L学LDP法在莳理谤中的直用[J]幸华柄 理生皋志.I999.28:60. 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