[doc] 巨细胞病毒冻干保存

[doc] 巨细胞病毒冻干保存 巨细胞病毒冻干保存 该病毒 在培养过程中繁殖缓慢而且不易保存,一般都沿 甩液氮为主要保存手段,由于该保存法不能为各 地供应毒种提供方便,有关冻二:保存目前国内尚 未见报遭.鉴于以上情况,作者探索了巨细胞病 毒冻干保存的可行性,经过一年多的反复试验及 两年多的观察和直甩,巨细胞旃毒冷冻干燥保存 已在国内首次获得成功. 和方浩 (一)病毒 ADI69株由本室提供;David标准株由 裹1舍25%脱脂奶,5%明胶的cMV囊毒冻千儡冀一年詹在不同细瞻 系传代结暴 接种后埔变观察时间(d) 病毒株接种细胞 13456789 Hep-2 Vego ADl?,BHK HEK HEL Hep-2 Vero DavidBHK HEK HEL Hep?2一 Vm一 CMVt~s_BHK一 HEK一 HEL士 首都儿科研究所病毒室提供;奶标本3B株系本室 从正常乳标本中分离得到. (二)保护剂 1?无菌脱睛奶. 2?用生理盐水配成的2o%明胶,经高压灭菌 启置4~C备用. (三)细胞 HEL:为水囊引产人胚肺制备的半传代细 胞,HE—HE一为已知敏感鲤?胞.HEK,Veto, BHK,Flop-2为不敏感细胞o (四)具体方法 先将巨细胞病毒标准株和奶标本分离株分别 接种在HEL细胞中37?平放培养,当出现+++ 典型病变时平放4?3—7d.台并病毒悬液分成 车文于I9B9年3月25日收到 „68话生物29卷 衰z古5O%a慧磨姘CMV崭毒庸千保鼙一年后在不同细毫綦传代 结果 接种后确变观察时间(d) 病毒株接种细咆 l345lII Hep一2 Ver0 ADl.,BHK HEK HEL Hep一2一 Vcr0一 DATidBHK一 HEK一 HELH 寰3吉S0%脱瞻奶CMV森千保存冀果 效果观察 (TCID/0.1m1) 4.5lg 2?0lg 2-0lg 失传 j.0lg t?518 t?5lg 失传 3个组,两个组分别加不同保护剂,另一个组不 加保护剂.按组分别分装在无菌干爆管内啪,每管 0-佃l,置一60?速冻装机,机室韫度必额在 -- 3000以下a真空度保持在I3.3一I.33Pro,抽 真空24h,开机封管放一20?保存”o 实验结果(表l一3)表明,采用5o%脱脂扔 或5%明胶加25瞄脱脂奶均能保护巨细胞病毒 耐受冻干保存.经冻干保存一年,4--t0d仍出现 十十一十+十+典型病变,而且经传三代已用于 制备EL[SALgG抗原,为全国各地提供了大量试 剂盒.不加保护剂者失传,冻干保存的最长存话 时间有待继续观察. 参考文献 ?】R+nd.K.Heta1.:N.#fJM+d一凹B: 951.1987. f2]Preece.P.Meta1.:4rch.DCllild..碍} lI2O.,9B4. 【3]王淑凤等;病毒,4:73+19+$o 【4】赵紊兰等:病毒,2;14~L9+5. 6期赵素兰等:巨细胞病毒冻千保存~69 PRESERVATIONOFCYTOMEGALOVIRUSBY LYoPHILIZATl0N ZhaeS~lanJiangHong “t*totVirology,CM,ese.4eadcmy.IPreve,;iv~Mcdin,Bei~i.z Thepreservationofcytomegalovirus (CMV)bylyophilizationwasfirstdeveloped inCh;lla.1n4to10daysthetypicalCPE wasupto++++IntheHELcellline whichwasinoculatedonly0.2mlsuspension oflyophilizedstrainADmorCMVisolated frommilkbreast.Aherpreservedforlyear thelyophilhedcytomegalovirusstrainstill comained1.5—_2.0IgTCID/0lmliDther ofviralinfection.Thely~;philizedstrains havebeenusedinthepreparationofdiagnos— ticantigenofcytomegaloviru,?~inourdepar- tment,alsothestrainswerempplledtothe wholecountry Keywords Cytomegalovirus;LyopMfization