酶联免疫竞争抑制法在临床血小板交叉配型时应用价值

酶联免疫竞争抑制法在临床血小板交叉配型时应用价值 酶联免疫竞争抑制法在临床血小板交叉配 型时应用价值 酶联免疫竞争抑制法在临床血小板交叉配型时应用价值 桂峰 465200河南固始县人民医院 摘要目的:探讨酶联免疫竞争的临床 应用效果及血小板交叉配型对血小板输 注效果的影响.方法:采用ELISA法对 II盏床确认的特发性血小板减少(ITP)104 例,系统性红斑狼疮(SLE)27例,甲亢43 例,非免疫性血小板减少症(NATP)23例 及正常对照80例进行检测,同时检测 104例ITP和80例正常对照的网织血小 板(RP);采用简易致敏红细胞血小板血 清学技术(sEPsA)对部分血小板相关抗 体阳性病例进行血小板交叉配型.结果: 各种免疫性血小板减少症患者PALg阳 性率较高,与正常对照相比差异有显着性 (P<0.05),非免疫性血小板减少组与免 疫性血小板减少组相少症相比,前者阳性 率及各项指标增高不明显,104例ITP患 者和正常对照组的RP分别为13.6? 5.2%,3.8?1.1%,差异有显着性(P< n05).对30例血小板相关抗体阳性且输 注无效的患者进行血小板配型输注,其中 25例相合,有效率83%.结论:血小板相关 抗体检测具有一定的临床诊断价值,血小板 配型可有效提高临床输注效果. 关键词血小板相关抗体网织血小板 简易致敏红细胞血小板血清学技术 doi:10.3969/j.issn.1007—614x.2011. 3】.204 血小板输注是治疗各种血小板减少 引起的出血性疾病的有效措施,尤其是严 重出血危及生命时,血小板输注显得特别 重要.但是,随着血小板输注量及输注次 数的增加,患者体内免疫相关性血小板抗 体的产生随之增加.采用酶联免疫竞争 抑制法检测血小板相关抗体,比较网织血 小板(RP)在ITP中的变化;并对血小板 相关抗体阳性且血小板输注无效的患者, 采用SEPSA法进行血小板交叉配型,探 讨血小板相关抗体对血小板输注效果的 影响,报告如下. 资料与方法 2005年5—12月住院患者,均经过 临床及实验室确诊.包括:?ITP104例, 男40例,女64例,年龄16,68岁;?系 统性红斑狼疮(SLE)27例,男2例,女25 例,年龄28—45岁;?甲状腺功能亢进症 (简称甲亢)43例,男15例,女28例,年 龄16,62岁;?非免疫性血小板减少症 (NATP)23例,其中再生障碍性贫血8 例,骨髓纤维化(MF)15例;?正常对照 为无偿献血8O例. 实验室检测:?酶联免疫竞争抑制 法:试剂盒由上海捷门生物技术公司提 供,可检测血清中血小板相关抗体 PAIgG,PAIgA,PAIgM,参考值分别为< 108ng/107PLT,<12ng/107PLT,<40ng/ 107PLT.?RP的检测:主要试剂噻唑橙 (TO)购自BD公司,测定按RichcardsEM 提供的方法….对104例INP和5O例正 常对照进行检测.~SEPSA法:试剂由上 海市输血研究所提供,选择部分PAIgG 阳性病例进行血小板交叉配型试验. 血小板输注:(1)血小板输注指征:? 患者有皮肤,黏膜,牙龈出血,瘀斑,鼻出 血,消化道,阴道出血;?血小板计数<20 X10/L.(2)血小板输注效果判定:采用 SEPSA交叉配型的方法从随机同型献血 者中选配合的血小板输注,每次输注量为 lU单采血小板.输注效果判定及输注后 临床根据血小板计数,计算输注后1小时 及24小时血小板增值(CCL),1小时CCL >9×10/L或24,J,时CCL>4.5×10/L 为输注有效,否则为无效,同时观察输 注后有无发热,荨麻疹等非溶血性输血 反应. 统计学处理:采用检验,样本均数 比较采用t检验.P<0.05为差异有统 计学意义. 结果 各种免疫性血小板减少症患者(ITP, SLE,甲亢)PAIg(主要是PAIgG)的阳性 率较高,与正常对照组相比,差异有显着 性(P<0.05).但非免疫性血小板减少 组与免疫性血小板减少组相比,前者 PAIg阳性率增高不显着.酶联免疫竞争 抑制法检测不同疾病患者PAIgG,PAIgA, PAIgM结果,见1. 104例ITP患者血小板与PAIg各项 指标的关系,见表2. 104例I137患者和正常对照组的RP 分别为13.6?5.2%和3.8?1.1%,两者 比较差异有统计学意义(P<0.05). 86例PAIgG阳性的ITP患者输注血 小板后1小时CCI和24小时CCI明显低 于阴性组,差异均有统计学意义(P< 0.05).PAIgG阳性且输注无效有66例, 随机选择30例,采用SEPSA技术进行血 小板配型输注,结果25例相合,输注有 效,1小时CCI和24小时CC1分别为 (15.5?5.3)×10/L和(8.2?3.3)X 10/L 讨论 血小板相关抗体是诊断免疫性血小 板减少症,特别是特发性血小板减少性紫 癜的主要实验指标,其阳性率较高,但在 某些非免疫性血小板减少症患者中亦可 出现PAIgG增高现象.随着对血小板免 疫学研究的不断深入,人们逐渐认识到 PAIgG可能代表着多种免疫成分.酶联免疫竞争抑制法检测各种免疫性血小 板减少症的阳性率不同可能与导致血小 板相关抗体产生的原因较多有关,如输 血,妊娠,细菌或病毒感染,自身免疫异常 等.在G一杆菌同时伴随血小板减少的 患者中,有46%患者的PAIgG增高,在新 生儿感染中PAIgG阳性率70%[4j.鉴于 PAIgG升高可在多种疾病中发现,因此, 对ITP的诊断尚需结合血小板在体内的 生存状态.郭晓瑁等用流式细胞仪测定 了58例ITP患者外周血lipJ,明显高于 对照组,因此,RP可作为ITP快速而有价 值的诊断指标,结合PAIgG和RP可提高 实验室诊断ITP的可靠性.43例甲亢患 者PAIgG阳性37例,在这些阳性患者中 无1例有输血史,揭示甲亢患者PAIgG阳 性是由自身免疫造成的. 分析酶联免疫竞争抑制法检测结果 与血小板浓度的关系,在澳0定不同浓度的 血小板时,同一份标本的检测结果应相 同,但当血小板计数<50X10/L时,定 量法检测同一份标本,结果随血小板计数 的改变波动性较大.随血小板计数逐渐 下降,定量法检测PAIgM水平逐渐升高. 血小板计数22×10.几时,定量法检测 PAIgM易出现假阳性.而流式细胞仪 (FCM)检测PAIgM一般不受血小板计数 影响,可检测血小板计数10×10/L的标 本J.文献报道IgM具有较高的结合价 和凝集能力,只需一个分子IgM抗体即足 以激活补体,在决定血小板寿命中很重 要,PAIgA对诊断ITP的特异性较高,本 文似不能证实这一观点.本组资料也表 明,并不是所有输注血小板治疗的血液病 中国社区医师?医学专业2011年第31期(第13卷总第292期)213 论着?临床辅勋检查 CHINESEC0MMUNI丁YDOCT0RS 于天良杨帆 733000甘肃武威市人民医院 PCR扩增过程中污染的预防与对策 格按操作规程操作,防止假阳性,假阴性 结果的产生. 污染的原因调查 关键词PCR污染对策标本问的污染;采集标本的容器被污 doi:10.3969/j.issn.1007—614x.2011.染;提取过程中加样枪污染;试剂的污染; 31.205提取过程中气溶胶的污染等. PCR技术是聚合酶链反应,该技术可 将极微量的靶DNA特异的扩增上百万 倍,从而大大提高对DNA分子的分析和 检测能力.PCR反应的最大特点是具有 较大扩增能力与极高的灵敏性,操作复 杂,所以在其操作过程中常有污染发生, 即使极少量的污染也会造成假阳性,稍有 差错就会出现假阴性. 本文讨论PCR扩增过程中污染的预 防与对策.操作者必须熟练掌握技术,严 患者,都能检测出血小板相关抗体,表明 血小板相关抗体的产生与否是一个复杂 的问题,亦可能与检测手段有关.抗体检 测对于血小板减少症发病机制的研究也 是一项必不可少的指标. 血小板输注患者采用血小板抗体检 测及配型输注是提高疗效被人们逐步认 识,临床对血小板的使用需求也日益增 加,血液病,尤其是白血病和免疫性血小 板减少患者,使用j缸小板越来越多,但长 期反复输注血小板的患者易产生血小板 抗体,引起血小板破坏加速,导致血小板 输注无效(RPT).尤其是大量反复输注 血小板的患者产生血小板抗体的概率可 高达50%以上,因此,血小板抗体的检 测,对于选择配合的血小板输注,提高治 防止污染的预防与对策 实验人员要熟练掌握PCR操作技 术,严格规范操作程序,操作过程中加样 枪的使用,手套,枪头,离心管应一次性使 用.严格按试剂生产厂家提供的程序进 行操作. 严把质量关,在操作当中总结,马上 到期的试剂或刚过期试剂对PCR结果影 响很大. 设立阴性质控和阳性质控:阴性质控 以监测试剂是否污染,阳性质控以监测 PCR反应是否成功,产物大小是否合本理 论要求. 实验室设置及设备的规范化 实验室划分为4区:试剂准备区,,标 本准备区,PCR循环扩增区,检测区.扩 增仪的设置要符合要求,取样器刻度准 确,减少PCR循环次数,只要PCR产物过 剩检测水. 近年来PCR技术已普及到各基层医 院,广泛地用于感染性病原体,如HBV HCV的临床检测,由于缺乏对核酸扩增 检验技术完整的了解以及缺乏质量保证 措施,导致部分实验室结果出现假阳性, 假阴性的出现,所以操作者必须熟练掌握 技术,严格按操作规程操作,防止假阳性, 假阴性结果的产生. 疗效果尤为重要.同时也可选择最理论与临床[M].上海:上海科学技术出版 不配合的血小板输注以应用于特殊治疗.社,1996:227? 本文中的患者因多次输注血小板,致血小汪全中-现代血栓病学[M]?北京:北京医 板抗体阳性,出现血小板输注无效,经血科大学,中国协和医科大学联合出版社, 竺苎曼兰不高般医院5:平阳,朱培林,等.网织血小板测7- 9-- 均可进行,值得推广使用.:i 中华内科杂志,2003,42(1):41—43. 参考文献6宋一芳,谢毅,陈彤.全血法流式细胞术检 1RichardsEM,BaglinTP?Quantitaionofreticu.测血小板抗体[J]. 复旦(医学版), latedplatelets:methodologyandclinicalappli一2004 .31(3):313—315. cation[J]?BrJhaematol,1995,91(2):445—7江明华,陈慧,张信良.特发性血小板减少 451?性紫癜患儿免疫功能的变化[J]. 中国现代 2袁莹,黎敏?血小板交叉配型对改善血小样医学杂志, 2002,12(20):39—41. 板输注疗效的观察[J]?中国输血杂志,8刘竞. 血液病血小板MPV,PCT,PDW的检 2002,15(1):35?测意义[J]. 中国现代医学杂志,2001,11 3王振义,李家增,阮长耿.血栓与止血基础(11):48—49. j表i不鼹疾病豢蘩霸酶联免瘴黧争期婚缝果 SLE8~987 rrPlo4:?毫l05073鍪95(91)i162印(58) j?i249) 甲亢43;11,1o82"(86)l6l2(28)2368 NATP一23奠一一?l8~225-薯5(22)l27l(4)鬻2947iJ(4) _..竺.1___.__一.....一.一.竖_一.一:..一一一一一__旦一.._ 一薯叠.警i表2;酶联免I芟竟啪制o4例患者血,J,板数_弼『}旨橱洪荼{io7PLT' ?j鬻誊 .一一.尘墨苎一,..-_一一.ii一兰一?一一囊.一一一一一? 《5x1o??ijii一"31囊 一一一一釜- 214中国社区医师?医学专业2011年第31期(第13卷总第292期