瑞舒伐他汀钙非对映异构体的检测

药物杂志 Chin J Pharm Anal 2006，26(11) 一 1551一 瑞舒伐他汀钙非对映异构体的检测 李桂芹 ，米长江 ，赵丽云2，倪广才 ，杨基础 (1．清华大学化工系，北京 100084；2．北京福瑞康正医药技术研究所，北京100039) 摘要 目的：用 HPI C法将样品与非对映异构体分离并检测，采用酸破坏方法制备出非对映异构体，利用高效液相色谱 一质谱 联用的方法对非对映异构体的结构进行确证。方法：建立了高效液相色谱法检测异构体。色谱柱：Kromasil C 柱(4．6 mm× 250 mm，5 m)，以水一甲醇一乙腈(6o：lO：3O，用冰醋酸调pH至3．5)为流动相，流速 1．0 mL·min～，检测波长242 nm，柱温 3O℃。结果：采用的条件能将样品与其非对映异构体分离，通过液质联用确证了制备的异构体为非对映异构体。结论：本法 可方便地实现样品中非对映异构体的检测。 关键词：瑞舒伐他汀钙；非对映异构体；HPLC；MS 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2006)11—1551—04 Analysis of rosuvastatin calcium’S diastereomer LI Gui—qin 一，MI Chang—jiang ，ZHAO Li—yun ，NI Guang—cai ，YANG Ji—chu (1．Department of Chemistry Engineering，Tsinghua University，Beijing 100084，China； 2．Pharmaceutical Research Institute of Beijing Furui Kangzheng，Beijing 100039，China) Abstract Objective：The HPLC method had been applied to separate，analyze rosuvastatin calcium and diaste- reomer．The diastereomer of rosuvastatin calcium was prepared by acid dissolved method，and its structure was con- firmed byr LC—MS method．M ethods：T0 establish the HPLC method for analyze rosuvastatin calcium and diaste— reomer．The chromatographic column of Kromasil C l8(4．6 mm×250 mm，5 txm)was used．The mobile phase con— sisted of water—methanol—acetonitrile(60：10：30，adjusted to pH 3．5 by glacial acetic acid)．The flow rate was 1．0 mL ·min～ ．The detection wavelength was 242 nm．The temperature of column was controlled at 30 oC．Re- suits：This method can separate rosuvastatin calcium and diastereomer，and it was confirmed that the isomer was di- astereomer by LC —MS method．Conclusion：Th e method has been successfully applied to analyze rosuvastatin cal- cium and diastereomer． Key words ：rosuvastatin calcium ；diastereomer；HPLC；MS 瑞舒伐他汀钙(rosuvastatin calcium)的化学名 为双 一[(E)一7一[4一(4一氟基苯基)一6一异丙 基一2一[甲基(甲磺酰基)氨基]一嘧啶 一5一基] (3尺，55)一3，5一二羟基庚一6一烯酸]钙盐(2：1)， 属于他汀类化合物。这类化合物是一种 HMG— CoA还原酶抑制剂，可以抑制胆固醇的合成速度，是 新型的降血脂药。瑞舒伐他汀钙分子结构中含2个 手性碳原子，在合成过程中可能有对映异构体{双 一 [(E)一7一[4一(4一氟基苯基)一6一异丙基 一2 一 [甲基(甲磺酰基)氨基]一嘧啶 一5一基](3s， 5R)一3，5一二羟基庚 一6一烯酸]钙盐(2：1)}和非 第一作者 Tel：(01o)88248646；E—mail；guiqinli2004@sina．corn 对映异构体{双一[(E)一7一[4一(4一氟基苯基) 一 6一异丙基 一2一[甲基(甲磺酰基)氨基]一嘧啶 一 5一基](3R，5R)一3，5一二羟基庚一6一烯酸]钙 盐(2：1)}或 {双 一[(E)一7一[4一(4一氟基苯 基)一6一异丙基一2一[甲基(甲磺酰基)氨基]一嘧 啶一5一基](3s，5．s)一3，5一二羟基庚 一6一烯酸] 钙盐(2：1)}产生，因此应检测异构体在样品中的 量。对映异构体采用拆分的方法制备，采用手性柱 检测，本文不作讨论。参照2005年版中国药典二部 附录⋯及有关文献[2—5]对非对映异构体的制备、 分离与检测进行研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com ． - — — 1552--—— 药物分析杂志Chin J Pharm Anal 2006，26(1 1) 本文用 HPLC法实现了样品与非对映异构体的 检测，其分离效果和峰形都较好，并参考合成工艺通 过酸破坏的方法制备出非对映异构体杂质，用液质 瑞舒伐他汀钙 (rosuvastatin calcium) (3R,5s) + 删 ∞ N ㈣ 。 联用的方法对非对映异构体的结构进行了确证，以 方便在检测中进行峰定位。瑞舒伐他汀钙及其非对 映异构体的结构式和部分合成工艺如下： 瑞舒伐他汀钙非对映异构体 (diastereomer of rOsuvastatin calcium) f3R,5励 CH CIhCN — — — — — — — — — — 1 仪器与试药 日本岛津 LC一10AT高效液相色谱仪(含 SPD—MIOAVp DAD检测器)，Kromasil C18柱 (4．6 mm X250 mm，5 m)，API3000液相色谱 一质谱联 用仪(美国ABI公司)。 瑞舒伐他汀钙由北京福瑞康正医药技术研究所 提供，甲醇、乙腈为色谱纯，冰醋酸为分析纯。 2 色谱条件 Kromasil Cl8柱(4．6 mm X250 mm，5 m)，流动 相为水 一甲醇一乙腈(60：10：30，用冰醋酸调pH至 3．5)，流速为 1．0 mL·min ，检测波长为242 rim， 柱温 30℃，进样体积20 L。 3 非对映异构体的产生与检测 避光操作(因瑞舒伐他汀钙对光不稳定，本试 验过程避光操作)。取瑞舒伐他汀钙样品 l2。06 mg，精密称定，置50 mL量瓶中(则含瑞舒伐他汀钙 的浓度为241．2 g·mL且1)，加 1％三氟醋酸的乙 腈溶液 l0 mL超声使溶解，密塞，于60℃水浴中加 热 60 min，放冷，加水 20 mL，用 0．1 mol·L。。的氢 氧化钠溶液调pH至6～8，用流动相稀释至刻度，摇 匀，精密量取20 L注入液相色谱仪，记录色谱图 瑞舒伐他汀钙非对映异构体 (diastere0mer of rosuvastatin calcium) (3S,5z) 2 CH~CN cH ＼ SO2CH3 (c}I3)z CH3 、 SO2CH3 (图 1)，对应的 UV光谱图也见图 l。 200 100 20 A 300 曰 cll2 2 图 1 HPLC法分离检测瑞舒伐他汀钙与其非对映异构体色谱图 (A)及光谱图(B) Fig 1 HPLC chromatogram(A)and UV spectrum(B)of rosuvastatin cal— cium and diastereomer 1．瑞舒伐他汀钙 (msuvastatln calcium) 2．非对映异构体 (diaste． reomer) 2 ]● ● ●●__] 2 B C 2 ]● 划j●__] ． 伽 2 ]● ● ●●__] C 维普资讯 http://www.cqvip.com 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2006，26(1 1) 一 1553一 由图 1可知，主峰(t =19．52 min)后出现一杂 质(t =21．22 min)，紫外光谱图显示其与主峰一 致，说明酸破坏杂质可能与主峰结构相似，由后文试 验证明其为非对映异构体。并由图知非对映异构体 与主峰能够有效分离，分离度为 2．16，非对映异构 体与主峰的相对保留时间约为 1．1，两者含量比例 为43：57，则破坏后溶液中含非对映异构体浓度为 103．7 Ixg·mL。。。 4 非对映异构体最低检测限试验 避光操作。在选定的色谱条件下，将上述溶液 482．3 504．4 I． 100 500 A 逐级稀释，按信噪比为3对最低检测限进行测定，结 果表明：浓度为0．3 Ixg·mL一，进样 20 时，非对 映异构体峰信号约为噪音的3倍，即最低检测限为 6 ng。 5 液质联用对非对映异构体的结构确证 测试仪器：美国ABI公司API3000液相色谱一 质谱联用仪 ；测试条件 ：ESI—MS，LC—MS，LC— MS／MS；测试样品：瑞舒伐他汀钙酸破坏产物。结 果见图2、图3。 12．42 l： 72 V 19·54＼29．47 23．9f 482．3 504．3 I52o·％12．3 图2 瑞舒伐他汀钙(A)及其非对映异构体(B)液相色谱／质谱联用测试图 Fig 2 LC—MS of msuvastatin calcium and diastereomer l2．37 500 B ＼ 1： ．62 ^ ， I ＼ ＼ ＼ 一 一 258．2 189．4 ＼ 217 ,．3 1 ．482．。 I．1I．． 258．3 270．5 189·4＼217．2 04．15 482．z 、1．1．．． 50 250 450 50 250 A B 罔3 瑞舒伐他汀钙(A)及其非对映异构体(B)液相色谱／质谱／质谱联用测试图 Fig 3 LC—MS／MS of rosuvastatin calcium and diastereomer 维普资讯 http://www.cqvip.com 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2006，26(11) 质谱解析如下： C、N ／ SO2CI-I3 HsC、N I SO2CH3 ll／z 482．2 H3C、 m／z=404．5 t F HsC 、N ．Iz=300．4 + f 0 、 H3c、N N ＼ 一 + ＼ 衄 ]_ ‘ c0o_ CH2 。 104．1 由以上液相色谱／质谱和液相色谱／质 质谱 联机检测及结果分析，证明瑞舒伐他汀钙经过酸破 坏得杂质产物为瑞舒伐他汀钙的非对映异构体。 6 结果与讨论 6．1 综合上述液相色谱研究以及液相色谱／质谱和 液相色谱／质谱／质谱联机检测及结果分析，证明瑞 舒伐他汀钙经过酸破坏得杂质产物为瑞舒伐他汀钙 的非对映异构体，且所建立的液相色谱检测方法灵 敏，重复性好，分离度佳。 6．2 在对瑞舒伐他汀钙进行常规酸破坏试验时，采 用了0．1 mol·L 盐酸进行破坏，结果发现产生的 杂质光谱图与主峰一致，因瑞舒伐他汀钙含手性中 心，考虑其可能为非对映异构体。因此改变酸的种 类和强度(1％三氟醋酸的乙腈溶液)对瑞舒伐他汀 钙进行破坏，仍得到同样结果，且杂质与主峰的比例 接近 1：l。同时在试验过程中考察了酸破坏强度改 变(水浴温度和时间)时，其杂质与主峰的比例变化 情况，结果其杂质与主峰的比例不再变化。为更好 地证明此杂质为瑞舒伐他汀钙的非对映异构体，本 文采用第2种酸，并利用液质联用的方式对杂质的 结构进行了确证。 6．3 在试验中考察了柱温对分离度的影响，结果柱 温对瑞舒伐他汀钙及其非对映异构体的分离度影响 不大。 7 结论 通过酸破坏的方法制备出了瑞舒伐他汀钙的非 对映异构体，并经 HPLC、LC／MS、LC／MS／MS的方 法对这2个异构体进行检测与分析，证明经过对瑞 舒伐他汀钙进行酸破坏得到的杂质产物为瑞舒伐他 汀钙的非对映异构体，用本文建立的方法可有效地 对瑞舒伐他汀钙样品中可能含有的非对映异构体进 行检测。 参考文献 1 ChP(中国药典)．2005．Vol II(二部)：Appendix(附录)28 2 LIU Ning(刘宁)，YANG La—hu(杨腊虎)，ZHANG Zheng—xing (张正行)，et a1．Studies on the conversion of epimers of dihydroarte． misinin(双氢青蒿素差向异构体转化的研究)．Chin J P^om Anal (药物分析杂志)，2002，22(4)：303 3 WANG Zhi—guo(王治国)，ZHAO Hong—WU(赵宏武)，SONG Ai — hua(宋爱华)，et a1．Isolation of the diastereoisomers of the deriva． tires of^y—DDB with L—isoleucine(^y一联苯双酯单酰化 一异亮 氨酸甲酯非对映异构体的分离)．J ShenyangPharm Un／v(沈阳药 科大学学报)，2004，21(5)：349 4 ZOU Kun(邹坤)，WANG Bin(王邻)，ZHAO Yu一 ng(赵玉英 )， et a1．Isolation and identification of diastereoisomeric sponins with nine sugar moieties from albizia julibrissin(合欢中一对非对映异构体九 糖苷的分离鉴定)．Acta Chim Sin(化学学报)，2004，62(6)：625 5 LIU Ning(刘宁)，YANG La—hu(杨腊虎)，Yu Ru—ying(俞如 英)，et a1．Some studies on epimers of dihydroartemisinin(对双氢青 蒿素异构体的一些研究和分析)．Mod Sci lnstr(现代科学仪器)， 2002。2：52 (本文于2005年 9月 10日收到) 维普资讯 http://www.cqvip.com