肾小管周围毛细血管减少与肾小管间质损伤的关系

肾小管周围毛细血管减少与肾小管间质损伤的关系 肾小管周围毛细血管减少与肾小管间质损 伤的关系 中国微循环2004年l0月第8卷第5期 文章编号:1007—8568(2004)05—0279—04 肾小管周围毛细血管减少 与肾小管问质损伤的关系 章斌,王伟铭,周同,吴开胤,陈楠 ? 279? ? 微血管专辑? 【摘要】目的观察肾小管周围毛细血管减少与肾小管间质损伤的关系.方法以sD大鼠5/6肾 切除建立肾衰动物模型,设正常组(n:6),假手术组(n=6),手术组(n:7).术后定时测定血压及24h 尿蛋白量,12周后取血,尿标本及肾组织.常规病理检查判断肾小管间质损伤程度(TI);应用免疫组化方 法检测肾脏毛细血管以及?型胶原,Fibronectin(FN)表达.结果与正常组和假手术组相比,手术组肾间 质纤维化明显,肾小管周围毛细血管(PIE)密度明显减少(P<0.01).此外,大鼠PIE密度与,I1,内生肌 酐清除率以及?型胶原,FN在小管间质表达密切相关(P<0.01).结论肾小管周围毛细血管减少是 肾小管间质损伤的特征性病理改变,并在肾小管间质损伤及肾功能减退中可能起重要作用. 【关键词】5/6肾切除;肾小管周围毛细血管;肾小管间质损伤 中图分类号:R692.6文献标识码:A TheRelationshipBetweenIIldPeritubularMicrocirculationandtheTubulointerstitialInjuryAf- ter5/6SubtotalNephrectomyofRats ZHANGBin,WANGWei-ming,ZHOUTong,eta1.DepartmentofNephrology,RuinHospital,Shanghai SecondMedicalUniversity,Shanghai200025,China 【Abstract】 ObjectiveToinvestigatetheeffectofthepefitubularmicroeire~afionontherenaltubulointer- sfitialinjuryafter5/6subtotalnephrectomy(STN-X)ofrats.MethodsTherenalsubtotalablationmodelwasestab fishedbysurgically5/6renalresectionofthemaleSprague— Dawleyrats.Threegroupswereincludedinourexper- imentalprotocol,suchasNormal(n=6),Sham(n=6)andSTNX(n=7).24hunaryproteinexcretionratesand systolicarterialBPweremeasuredperiodically.AnimalsweresacrificedattheendofNo.12weekafteroperation. Tubulointerstitialinjuryandrenalcapillarieswerescoredsemiquantitativelybymorphologicalandimmunohisto- chemicalanalysis.ResultsSignificanttubulointerstitialinjuryWasnotedintheSTNXgroupwithnremarkedly decreasedperitubularcapillary(PI?)densi~,comparedwithNormalgroupandShamgroup (P<0.01).Itwas showedthatPTCdensitywascorrelatedwithendogenouscreafinineclearance,tubtdointersfifialinjury.collagen1TI andFibronectin(P<0.01).ConclusionsThepefitubularmicrovascularckmge,or.eofpathologicalalterations characterizedinrenaltubulointerstitialinjury,isinvolvedinthepathogenesisofprogressivetubulointersfifialinjury andimpairmentofrenalfunction. 【Keywords】5/6nephrectomy;Pefitubularcapillary;Tubulointerstifialinjury 有研究表明,人类多种进展性肾病存在肾小管 周围毛细血管(PeritubularcapiUaries,PrC)丢失"】, 而且证据表明,缺氧可作为一种独立因素直接参与 肾小管间质损伤的进程12_4】.肾小管间质损伤是慢 性进展性肾脏疾病的特征,肾小管间质损伤的严重 程度与肾功能的减退相一致.因此,可以推测,肾 小管周围毛细血管减少及缺氧参与肾小管间质损伤 基金项目:上海市卫生局医学领先专业学科基金(983009) 作者单位:200025上海,上海第二医科大学附属瑞金医院肾脏科 第一作者简介:章斌(1970一)男,汉族,硕士,主治医师.主要 从事肾脏病临床及肾间质损伤的基础研究.现在广东省人民医院肾 脏科工作. 及纤维化的进程,并在肾小管间质损伤与肾功能减 退间起关键的桥梁作用.为此,我们以大鼠5/6肾切 除建立慢性肾衰模型,探讨肾小管周围毛细血管和 肾小管间质损伤的关系. 材料和方法 15/6肾切除大鼠模型建立及分组:雄性sD大 鼠(清洁级)19只,体质量200,250g,购自中国科学 院上海实验动物中心.随机分组后,手术组(/1,=7) 大鼠在乙醚吸人麻醉下固定,常规消毒,铺巾,取腹 正中切El,逐层打开腹腔,充分暴露左侧肾脏,剥离 肾包膜;从肾门2,3lnnl处结扎,切除左侧肾脏后, 关闭腹腔.一周后,重新打开腹腔,暴露右侧肾脏, 切除肾脏上下极各1/3.其中1/3切除量的估计,以 单侧.肾脏重量的1/3为准.假手术组(,l=6)大鼠在 同样麻醉条件下,暴露并剥离肾包膜,不做肾切除. 正常对照组(,t=6)不作任何手术.所有大鼠术后在 同一饲养舍中喂养,各笼每2周随机换位喂养.术后 定时测尾部动脉收缩压以及代谢笼留取24h尿液; 术后12周处死大鼠.处死前称重,测血压(UP),在 代谢笼留取24h尿液后,立即采血,并剥离肾包膜 取出新鲜肾脏组织,置10%中性福尔马林固定.此 外分离血清及尿量测定后,分装一7O?保存. 2生化检测:采用BECK^N自动生化仪测定 血清肌酐(scr),尿总蛋白(TP),尿肌酐(Ucr).内生 肌酐清除率(Ccr,ml/min/kg)根据血,尿肌酐浓度,24 h尿量,体质量,由公式计算而得. 3肾脏病理检查:肾脏组织经固定,脱水,石蜡 包埋,切片2/-tm厚度,常规HE和Masson染色,光镜 观察.肾小管间质损伤(TubulointerstitiMinjury,]rI)判 断:?皮质区肾间质纤维化,?炎症细胞浸润,?.肾 小管扩张和或萎缩.采用盲法半定量评估肾小管间 质损伤程度,每张切片至少观察40个皮质区视野 (×100),根据上述判断将.肾小管间质损伤程度分为 6个级[61:0级:正常;1级:病变范围<10%;2级:病 变范围1O%,25%;3级:病变范围26%,5o%;4 级:病变范围51%,75%;5级:病变范围>75%. 4免疫组化检测:3m组织厚度石蜡切片,常 规二甲苯脱腊,梯度酒精水化后,微波加热抗原修复 15rain.一抗为小鼠抗大鼠CD141(th嗍b伽Dduljn)单 克隆抗体(克隆号:141C01,NeoMarkers公司),浓度 为1:50,4'E过夜;含0.3%过氧化氢甲醇室温避光 下孵育20min;二抗为辣根过氧化物酶标记的抗小 鼠EnVision聚合物;DAB显色.其中,采用TBS缓冲 液替代一抗或二抗作为阴性对照.对每份标本盲法 J.ofChineseMicrocimulationOct.2OO4.Vo1.8.No.5 随机观察40个皮质视野(×4O0,0.065mm-"),计数 CD141阳性的毛细血管腔个数,得出trrc密度 (CD141毛细血管腔个数/n)…;此外每份标本同 样观察25,3O个肾小球横切面,计数CD141阳性的 毛细血管腔个数,并取平均值,得肾小球毛细血管 (glomemlarcapillary,GC)密度(CD141毛细血管腔个 数/.肾小球横切面). 另外,III型胶原,Fibroneetin(FN)免疫组化染色 条件:一抗分别为m型胶原兔源多克隆抗体,FN兔 源多克隆抗体,浓度均为1:100,加一抗前予复合 消化液室温孵育0.5min,及正常山羊血清封闭1h, 二抗为EnVision抗体聚合物.其中,I?型胶原,FN 表达的半定量法:根据光镜下染色在肾小管间质的 分布分为0,3分,即0分:无染色;1分:局灶染色;2 分:轻度,中度弥漫染色;3分:重度弥漫染色.三人 盲法同时进行,取平均值. 5统计学分析:所有数据以均数?标准差 ?s)表示.各组间指标比较均用ANOVA检验,非 参数相关分析用Spearman等级相关检验,P<0.05 为差异有统计学意义. 结果 1大鼠血压,24h尿蛋白定量及.肾功能改变 与正常组和假手术组相比,手术组大鼠表现血 压升高,蛋白尿增多,血肌酐升高,内生肌酐清除率 下降(均尸<0.01).此外,蛋白尿随时间增加而逐渐 升高,第12周有所下降(表1). 2肾小管周围毛细血管及小管间质病理改变 正常组和假手术组.肾小管及间质无明显改变, .肾小管周围毛细血管排列分布及形态均正常.手术 组大鼠肾小管扩张或萎缩,.肾间质增宽(图A,B,见 插页2).与正常组和假手术组相比,手术组大鼠]rI 明显(P<0.01);PTC病变呈局灶性分布,排列紊 乱,毛细血管腔缩小和变形,P1?密度明显减少(P <0.01);而且FIE丢失主要集中于肾小管间质损 表l各组大鼠不同时间点24hUP及BP的改变?s) 注:与正常组和假手术组比较:?P<O.01. 表2l2周各组大鼠FIE密度,GC密度,.11程度,Scr,Ccr改变?s) 注:-q正常组和假手术组比较:?P<O,01. 中国微循环20O4年1O月第8卷第5期 伤,炎症细胞浸润及肾间质纤维化部位(表2). 3肾小管问质I?型胶原,Fibronectin的表达 在正常组和假手术组,I?型胶原和FN仅少量 表达于肾间质基质中,I?型胶原在肾小球不表达, 而FN在部分肾小球有少量表达.在手术组,III型胶 原和FN表达主要集中于肾小管间质病变区域,两 者表达量明显增加.与正常组和假手术组比较,手 术组小管问质?I型胶原和FN半定量积分显着增高 (P<0.01). 4肾小管周围毛细血管密度和/或肾小球毛细 血管密度与肾小管间质损伤程度,内生肌酐清除率, ?型胶原及Fibronectin表达变化的关系. PTC密度与1'I程度,Ccr,HI型胶原及FN在肾 小管间质的表达明显相关(r:一0.88,0.94,一 0.91,一0.90,P<0.O1).此外,PTE密度和Ccr的相 关程度(r=0.94,P<0.O1)较GC密度和Cer相关程 度(r=0.71,P<0.05)更高. 讨论 肾问质微血管主要是指源于出球小动脉并分布 于肾小管周围的二级毛细血管网,即肾小管周围毛 细血管,其对维持肾小管正常的结构,功能以及肾小 球滤过功能起关键作用[310但有关肾问质微血管病 变及缺氧在小管间质损伤和肾功能减退中的作用, 目前尚不明确.研究表明,缺氧可作为一种独立因 素参与肾小管损伤和间质纤维化D】.Norman等研 究发现,低氧刺激肾间质成纤维细胞增加胶原合成, 其作用与低氧促进细胞因子TGF,p的表达及直接 调控纤维化相关基因有关….Choi等研究表明,在人 类慢性小管间质损伤的肾病中,无论病因如何,均存 在肾问质微血管病变[710Bohle等发现,人类多种进 展性肾病存在肾小管周围毛细血管丢失,并认为肾 小管周围毛细血管的丢失是造成肾小管间质缺氧性 损伤及肾间质纤维化的重要病因【ll. 本研究以大鼠5/6肾切除建立慢性肾衰模型, 观察间质微血管病变的特点及其在肾小管损伤和间 质纤维化及肾功能减退中的作用.我们发现,正常 组和假手术组肾小管及问质无明显改变,肾小管周 围毛细血管排列分布及形态均正常.而手术组肾小 管扩张或萎缩,肾间质增宽,肾小管周围毛细血管病 变呈局灶性分布,排列紊乱,毛细血管腔缩小和变 形,肾小管周围毛细血管密度显着减少.研究表明, 人类多种进展性肾病存在肾小管周围毛细血管的丢 失【】】,同样在慢性间质肾炎,也有作者证实存在肾小 管周围毛细血管的减少….因此多数作者认为,肾小 管周围毛细血管减少是肾小管间质损伤和纤维化重 要的病理特征之一n. 目前认为,虽然多数进展性肾病的发病与肾小 球有关,但肾小球滤过率(GFR)的进行性减退与肾 小球的病变无关,其预后却与肾小管间质损伤和纤 维化程度相关陋】,我们发现,肾小管间质损伤与内生 肌酐清除率高度相关,说明肾小管间质损伤及间质 纤维化与肾功能减退关系密切,多数研究也支持这 一 点b】.此外,尽管肾小球毛细血管与内生肌酐清 除率相关,但肾小管周围毛细血管与内生肌酐清除 率的相关性更高,说明肾小管周围毛细血管网可能 与肾小球滤过功能更为密切.这一点与Fine提出的 假设相似,即在慢性进展性肾病中,肾小球滤过率进 行性下降与肾小管周围毛细血管的减少相关,其相 关性在肾小球无明显损伤而肾小球滤过率明显下降 的肾病中更为明确….因此,我们推测,肾小管周围 毛细血管作为源于出球小动脉的二级毛细血管网, 对维持正常的肾小球滤过功能可能起重要作用,并 在肾小管间质损伤导致的肾小球滤过功能减退中可 能也起了关键作用. 研究表明,间质微血管病变及其缺氧在肾小管 间质损伤及纤维化中起重要作用,肾小管周围毛细 血管的减少不仅是肾小管间质损伤及纤维化的重要 病理特征之一,而且可能是肾小管间质损伤的病因 或加重因素nl.我们发现,肾小管周围毛细血管密 度与肾小管问质损伤程度,问质基质蛋白(?型胶 原,Fibronectln)呈明显的负相关.研究表明,缺氧可 作为一种独立因素参与肾小管间质损伤和纤维化的 进展[3-.我们研究显示,在间质明显扩张部位肾小 管周围毛细血管明显减少,管腔受挤压缩小或变 形.进一步发现,在小管间质明显损伤而间质扩张尚 不明显部位,已有明显的肾小管周围毛细血管丢失, 说明肾小管周围毛细血管的减少不仅限于一种因受 挤压"被动"丢失,且在肾间质纤维化之前可能已有 明显的肾小管周围毛细血管减少.因此,我们推测, 肾小管周围毛细血管病变"主动地"参与了肾问质纤 维化的进程. 总之,肾小管周围毛细血管的减少虽然可能是 肾小管间质损伤的一个伴随现象,但其是慢性肾小 管间质损伤的一个重要病理特征,肾小管周围毛细 血管的减少可能在肾小管间质损伤慢性进展和肾功 能减退中起重要作用. 参考文献 1B0}IleA,Maekensen-HaenS,WdumarmM.da1.Significanceof p~st-gtomerdarcapillariesinthel~hogenesisofchronicIefIal~ailure[J】. ? 282? I(idneyB1codPressRes.1996,19:191,195 2OhashiR,KitamuraH,YamanakaN,eta1.Peritubularcapillaryinjury duringtheprogressionofexperimentalglomerulonephritisinrats[J】.J AmSocNephro1.2000.11:47—56 3FineLG,OrphanidesC,NormanJT,ela1.Progressiverenaldisease: thechronichypoxiahypothesis[J】.KidneyInt.1998,65:74—78 4Norman.IT,ClarkIM,GarciaPL,eta1.Hypoxiapromotesfibrogenesis inhumanrenalfibroblasts[J].KidneyInt.2000.58:2351,2366 5EddyAA.Molecularinsibintorenalinterstitialfibrosisp[J】.JAm SocNephro1.1996,7:2495,2508 6KangDH,JolyAH,OhSW,eta1.Impairedangiogenesisinthem nantkidneymodel(I):Potentialroleofvascularendothelialgrowthfac- J.ofChineseMicrocirculationOct.2OO4,Vo1.8,No.5 totandthrombospondin-1【J】.JAmSeeNephrd.2001.12:1434,1447 7ChoiYJ,ChakrabortyS,NguyenV,eta1.Peritubularcapillarylossis associatedthchronictubulointersfitialinjuryinhumankidney:Mtered expressionofv~ularendothelialgrowthfactor[J】.HumPatho1.2000, 31:1491—1497 8BohleA,StrutzF,MullerG,eta1.Onthepathogenesisofchronicrenal failureinprimaryglomemlopathies:Aviewfromtheinterstitum【J】.E印 Nephro1.1994.2:205—210 9OrphanidesC,FineLG,NormanJT,eta1.Sypoxiastimulatesproximal tubularcellmatrixproductionviaaTGF一81一independentmechanism 【J1.KidneyInt.1997,52:637,647 (收稿:2004—03—02修回:2004—06—10) 文章编号:1007—8568(2004)05—0282一O1 高能聚焦超声对子宫肌瘤微血管影响的探讨 须梅,赵维群 我室从2O02年7月至2004年1月,采用高能聚焦超声 治疗子宫肌瘤,并对肌瘤的瘤体和周围组织微血管影响进行 初步探讨,现报告如下. 资料与方法 1临床资料本组81例,年龄32—51岁,平均41.5 岁.子宫浆膜下肌瘤58例,子宫粘膜下肌瘤23例,瘤体直径 2.8,5.4cTn,热疗前经详细检查明确诊断并进行B超定位. 2治疗方法FEP—BY01高能聚焦超声肿瘤治疗仪, 其输入电功率0.5,2kW,有效治疗深度2,15CITI,治疗介质 为脱气自来水,实测焦点3砌×2n衄×8砌,发射时问为 0.10,0.20s,占空时间0.20s,单点发射次数40,50次,水 温30?,治疗能量1200W,扩大治疗范围5CITI.根据肌瘤大 小决定治疗.一般患者治疗时间为6o,90min,治疗次数 4,8次,隔天一次.子宫粘膜下肌瘤患者由于月经量大部分 较多,体质较弱,可隔2d甚至3d治疗一次.一般患者采取 卧位. 结果 本组81例患者经治疗后半年复查,症状都得到明显改 善.其中58例子宫粘膜下肌瘤阴道出血明显减少的51例,占 87.93%,瘤体无明显增大的55例,占94.83%.23例子宫浆 膜下肌瘤,月经量虽无明显变化,但肌瘤体积无明显增大的 18例,占78.26%,使肌瘤的生长得到了控制(见表1). 表1不同部位子宫肌瘤治疗结果统计 组别例数瘤小瘤瘤大 作者单位:214041江苏省无锡市第三人民医院 第一作者简介:须梅(1971一),女,汉族,无锡人.从事超声热疗 工作. ? 短篇报道? 讨论 高能聚焦超声热疗指以超声波为能量来源,以水为传导 介质对局部组织加热,使局部组织温度升高为治疗手段.充 分发挥了超声波在聚焦过程中穿透性,指向性及聚焦性能好 的优点.肿瘤组织对热损伤比正常组织敏感得多,肿瘤组织 微血管内皮系统发育不良,结构紊乱多呈不规则扭曲,毛细 血管壁缺乏弹性,易破裂,遇到高热不能像正常血管那样扩 张和收缩,管腔变窄,栓塞等改变.故通过高温改变细胞膜, 可引起瘤细胞死亡.子宫肌瘤瘤体在显微镜下显示长有肌瘤 的子宫血管数目增多,管腔扩大,但肌瘤本身却并不存在丰 富的血管,往往只有一根或数根来自邻近正常的动脉穿过肌 瘤假包膜进入肌瘤的血管.而肌瘤的静脉主要位于假包膜, 肌瘤中心处的静脉十分稀少.正是针对上述特点,使肿瘤乏 氧细胞热损伤而其邻近富氧细胞不受影响,周边及组织内部 的血管栓塞,使其失去血供来源,达到阻止肌瘤生长,甚至缩 小肌瘤,减轻临床症状的目的. 对于子宫浆膜下肌瘤,由于患者一般无月经量改变,而 以尿频,尿急或便秘等压迫症状为主要表现,故经高能聚焦 超声治疗控制其生长,能有效防止压迫症状的出现.而对于 子宫黏膜下肌瘤,患者以阴道出血为主要表现,可继发贫血, 经治疗后有减少阴道出血,防止贫血造成并发症.通过治疗 均能提高患者生活质量,且随年龄的增长,患者逐步进入绝 经期,肌瘤可随激素水平下降而缩小,可避免手术创伤.但在 治疗过程中,子宫内膜有可能轻度受损,因此有少量阴道出 血.月经期不能进行治疗,宫内有节育器者需取出后方可治 疗.如果肌瘤位于子宫峡部或子宫颈部者为热疗的禁忌症. 另外,肝,肾,心,肺疾病急性期患者,病人合并重度腹水者, 血小板少于5×10'/L或合并血友病等,明显出血机制障碍者 也为治疗禁忌症.高能聚焦超声为治疗子宫肌瘤开辟了一种 新的方法,在治疗实践中还将不断完善和发展. (收藕:20O4—08—12修回:20O4—09一o8) 四匿7HI~IIU管lf黼埘f琊?J【流鼯呐的傲光譬m流圈 肾小管周围毛细血管减:与肾小管问质损伤的关系 章斌毛伟钻脚阿寻 :,.,.' . ??黩 '致. : .. ? f?',;?..-.Il 图2柄壹何小竹IRt细lIlI符蝇少 肝细胞生长因子对兔心肌梗死后心肌细胞凋亡及左室重塑的影响 采明宝黄岚孛璺氏手 C正史地第301面J 0 ' J 图2埘 , , ..毳, . 毋n 譬,,,.,,'n '纽