小儿清热止咳口服液澄清工艺比较
[收稿日期] 20111230(001)
[第一作者] 王玲,硕士,讲师,从事药物新制剂的研究,Tel:
0991-4362442,E-mail:447673762@ qq. com
[通讯作者] * 高晓黎,博士,教授,从事药物新制剂的研究,
Tel:0991-4362442,E-mail:xli_g@ sina. com
小儿清热止咳口服液澄清工艺比较
王玲1,周稚川2,高晓黎1*
(1. 新疆医科大学药学院,乌鲁木齐 830022;
2. 新疆医科大学第一附属医院药剂科,乌鲁木齐 830022)
[摘要...
[收稿日期] 20111230(001)
[第一作者] 王玲,硕士,讲师,从事药物新制剂的研究,Tel:
0991-4362442,E-mail:447673762@ qq. com
[通讯作者] * 高晓黎,博士,教授,从事药物新制剂的研究,
Tel:0991-4362442,E-mail:xli_g@ sina. com
小儿清热止咳口服液澄清工艺比较
王玲1,周稚川2,高晓黎1*
(1. 新疆医科大学药学院,乌鲁木齐 830022;
2. 新疆医科大学第一附属医院药剂科,乌鲁木齐 830022)
[摘要] 目的:优选小儿清热止咳口服液的澄清工艺。方法:比较高速离心法、乙醇沉淀法、ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂法
3 种澄清工艺对小儿清热止咳口服液中收膏率、麻黄碱和黄芩苷相对含量的影响。结果:乙醇沉淀法为最佳澄清工艺,其工艺
条件为药液浓度比 1∶ 1,加 95%乙醇调至含醇量 60%,冷藏放置 6 h。结论:优选的澄清工艺稳定,可行。
[关键词] 小儿清热止咳口服液;澄清工艺;综合评分法
[中图分类号] R283. 6 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)10-0055-05
Comparison of Clarification Technology for
Xiao’ er Qingre Zhike Oral Solution
WANG Ling1,ZHOU Zhi-chuan2,GAO Xiao-li1*
(1. College of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Urmuqi 830022,China;2. Department of Pharmacy,
First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urmuqi 830022,China)
[Abstract] Objective: To optimize clarification technology of Xiao'er Qingre Zhike oral solution.
Method: To compare effect of three clarification technology (high-speed centrifugation method, ethanol
precipitation method and ZTC1 + 1Ⅲ adsorption clarify agent method)on yield of extract and relative content of
ephedrine and baicalin which were active components in Xiao' er Qingre Zhike oral solution. Result:The best
clarification technology was ethanol precipitation method,its technology conditions were:the concentration ratio of
sample liquid 1∶ 1 with adding 95% ethanol to adjust ethanol concentration to 60%,refrigerated 6 h. Conclusion:
Optimized clarification technology for Xiao'er Qingre Zhike oral solution was stable and feasible.
[Key words] Xiao’ er Qingre Zhike oral solution;clarification technology;comprehensive scoring method
小儿清热止咳口服液收载于 2010 年版《中国药
典》一部,原工艺较简单,但成品的外观质量较差,
长时间存放会产生大量沉淀。本试验考察 3 种澄清
工艺对小儿清热止咳口服液中收膏率变化、麻黄碱
相对含量、黄芩苷相对含量的影响,为小儿清热止咳
口服液的澄清工艺提供实验依据。
1 材料
SCL-10AVP 型高效液相色谱仪(SPD-10AVP 型
检测器,Ver5. 33 色谱工作站,日本岛津) ,全自动
LC-20AV 型高效液相仪(日本岛津公司) ,BP211D
型精密天平(德国 Sartorius) ,SZ-96 型自动超纯水制
备仪(上海亚荣生化仪器厂) ,ZK-82B 型真空干燥
箱(上海市试验仪器总厂) ,GB11240-80 型恒温水浴
锅(北京市医疗设备厂) ,pH S-3 型精密 pH 计(上
海精科雷磁仪器厂) ,ZBS-6G 型智能崩解仪(天津
大学无线电厂) ,JCT-C-2 型穿流式热风循环烘箱(常
州范群干燥设备有限公司) ,TGL-16C 型高速离心机
(上海弗鲁克机电设备有限公司) ,JN-500 型真空减
压浓缩锅(陕西昌泰实业有限公司) ,RNLGO1-1 型多
功能中药液浓缩锅(陕西昌泰实业有限公司)。
盐酸麻黄碱、黄芩苷对照品(中国药品生物制
品检 定 所,批 号 分 别 为 171241-200303,110715-
200514) ,ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂(天津正天成澄
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清技术有限公司) ,甲醇、乙腈为色谱纯,所用水为
双蒸水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 收得浸膏变化率 按处方比例投量煎煮,提
取 2 次,合并 2 次提取液,滤过,定容至 0. 1 g·mL - 1,
精密量取 50 mL,倾入已干燥恒重的蒸发皿内,水浴
浓缩至干,移入 105 ℃烘箱干燥 4 h,取出,于干燥器
中冷却 30 min,取出称重,按以下公式计算。
浸膏得率 =干燥物 /投料量 × 100%
收得浸膏变化率 = (除杂前出膏率 - 除杂后出膏率)/
除杂前出膏率 × 100%
2. 2 麻黄碱的相对含量测定[1]
2. 2. 1 色谱条件 采用 phenomenex Gemini 5u C18
110A 色谱柱(4. 6 mm × 25 mm,5 μm) ,Security
GuardTM通用型保护柱,流动相乙腈-0. 1%磷酸溶液
(含 0. 1%三乙胺) (3 ∶ 97) ,检测波长 205 nm,柱温
25 ℃,流速 1. 0 mL·min - 1,进样量 20 μL。
2. 2. 2 样品测定 精密量取样品液 5 mL,加水 10
mL 及浓氨试液 0. 5 mL,乙醚提取 5 次(每次用量分
别为 30,30,20,20,20 mL) ,合并乙醚液,加盐酸乙
醇溶液(1 ~ 20)2 mL,混匀,低温回收溶剂至干,残
渣加乙醇 5 mL 使溶解,转移至 25 mL 量瓶中,加
0. 1 mol·L - 1盐酸液至刻度,摇匀,以 0. 45 μm 微孔
滤膜滤过,进样,测定,即为麻黄碱相对含量。
2. 3 黄芩苷的相对含量测定[1]
2. 3. 1 色谱条件 采用 phenomenex Gemini 5u C18
110A 色 谱 柱 (4. 6 mm × 25 mm,5 μm ) ,
SecurityGuardTM通用型保护柱,流动相甲醇-水-磷酸
(47∶ 53 ∶ 0. 2) ,检测波长 280 nm,柱温 40 ℃,流速
1. 0 mL·min - 1,进样量 20 μL。
2. 3. 2 样品测定 精密量取样品 1 mL,置 25 mL
量瓶中,加 60%甲醇至刻度,摇匀,静置,以 0. 45 μm
微孔滤膜滤过,进样,测定,即得黄芩苷的相对含量。
2. 4 综合评分 在优化过程中需对各个指标进行
综合考虑和权衡,以综合指标(overall desirability,
OD)进行直观分析和方差分析[2-3]。各指标规格化
方程如下:
di =(Yi - Ymin)/(Ymax - Ymin)
di 为各指标的规格化值;Ymax和 Ymin分别为各指
标中测得的最大值和最小值;Yi 为各次试验中各指
标的实测值。
根据收得浸膏变化率、麻黄碱及黄芩苷相对含
量所作贡献比重大小不同,分别赋予加权值 20,40,
40;即方程变为 di(收得浸膏变化率) = (Yi - Ymin)/(Ymax -
Ymin)× 20;di(麻黄碱、黄芩苷相对含量) = (Yi - Ymin)/(Ymax -
Ymin)× 40。
2. 5 水提取液制备 称取处方量药材,按已优化的
提取工艺条件制得提取液并减压浓缩为相应浓度
(如药液浓度为 1∶ 1即表示 1 mL 药液相当于 1 g 原
药材,以此类推)。
2. 6 不同澄清工艺样品的制备
2. 6. 1 高速离心
2. 6. 1. 1 药液浓度考察 分别量取提取液 4 份,每
份 40 mL,药液浓度分别为 4 ∶ 1,2 ∶ 1,4 ∶ 3,1 ∶ 1;分别
标记为 C1,C2,C3,C4,15 000 r·min
- 1转速下离心 20
min。取上清液,分别按上述方法测定出膏率、麻黄
碱和黄芩苷的含量。结果见表 1。
表 1 不同药液浓度和离心速度对指标成分的影响(珋x ± s,n = 3)
No.
出膏变化率
/%
相对含量
麻黄碱 黄芩苷
总分
C1 11. 12 ± 0. 32 2 459 895 ± 78 963 19 000 753 ± 486 419 49. 10
C2 13. 98 ± 0. 43 2 756 891 ± 78 571 16 598 756 ± 328 655 44. 96
C3 17. 06 ± 0. 70 2 655 562 ± 94 804 19 989 563 ± 723 622 65. 69
C4 16. 32 ± 0. 38 2 733 268 ± 109 604 19 998 978 ± 703 964 67. 60
V1 12. 12 ± 0. 12 2 179 869 ± 64 088 18 785 423 ± 510 964 39. 35
V2 14. 88 ± 0. 58 2 298 765 ± 77 009 18 896 987 ± 568 799 45. 83
V3 16. 02 ± 0. 41 2 458 799 ± 45 980 18 239 581 ± 625 618 47. 35
V4 18. 97 ± 0. 69 2 587 969 ± 104 813 18 977 691 ± 523 784 58. 23
2. 6. 1. 2 离心转速考察 分别量取提取液(药液
浓度 1∶ 1)4 份,每份 40 mL,标记为 V1,V2,V3,V4,分
别在 11 000,13 000,15 000,17 000 r·min - 1转速下
离心 20 min,取上清液,分别测定出膏率、麻黄碱和
黄芩苷的相对含量。结果见表 1。
2. 6. 1. 3 验证试验 按优化条件取浓度为 1 ∶ 1提
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取液 50 mL,17 000 r·min - 1离心 20 min,其余操作同
前。进行 3 次验证试验,结果 3 份提取液总评分均
值 58. 55,RSD 1. 68%,表明优选的除杂工艺稳定、
可行。
2. 6. 2 ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂
2. 6. 2. 1 ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂的配制 a 组
份:少量去离子水(蒸馏水)搅成糊状,加适量去离
子水,溶胀 24 h,搅拌,配制成 1%黏胶液,用前用去
离子水稀释至 0. 1%。b 组份:配制 1% 醋酸,用少
量 1%醋酸溶解 b 组份并搅成糊状,加入适量 1%醋
酸,溶胀 24 h,搅拌,配制成 1%黏胶液。
将提取液浓缩至适当浓度后,在相应得温度下
搅拌加入 1% b 组份溶液,保温,期间每隔 30 min 搅
拌一次,2 h 后同样方法加入 0. 1% a 组份溶液,保
温 1 h,过滤,得澄清药液,进行各项指标的测定。
2. 6. 2. 2 正交试验 选取 ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清
剂的加入量、温度、料液浓度比是影响澄清效果的主
要因素,在此基础上,进行正交试验,因水平表见表
2,试验安排见表 3,方差分析见表 4。
表 2 小儿清热止咳口服液 ZTC1 + 1Ⅲ
澄清剂澄清工艺正交试验因素水平
水平 A 浓度比 B 温度 / ℃ C 澄清剂用量 b∶ a(mL /100 mL 药液)
1 1∶ 3 60 4∶ 20
2 1∶ 2 70 5∶ 25
3 1∶ 1 80 6∶ 30
表 3 小儿清热止咳口服液 ZTC1 + 1Ⅲ澄清剂澄清工艺正交试验安排
No. A B C D 出膏率 /% 麻黄碱相对含量 黄芩苷相对含量 总分
1 1 1 1 1 19. 51 2 596 500 16 927 573 45. 51
2 1 2 2 2 20. 09 2 543 700 16 821 924 43. 50
3 1 3 3 3 23. 78 2 733 681 16 814 208 51. 93
4 2 1 2 3 24. 63 2 334 578 15 537 069 31. 36
5 2 2 3 1 22. 37 2 424 256 15 816 740 34. 60
6 2 3 1 2 25. 61 2 459 895 15 915 495 38. 48
7 3 1 3 2 19. 51 2 442 332 16 406 401 37. 17
8 3 2 1 3 27. 85 2 407 944 15 948 446 38. 47
9 3 3 2 1 25. 61 2 465 751 15 318 357 34. 78
K1 140. 939 7 114. 038 122. 458 114. 89
K2 104. 443 9 116. 575 109. 647 119. 15
K3 110. 425 6 125. 196 123. 704 121. 77
R 36. 495 8 11. 158 14. 0574 6. 88
表 4 ZTC1 + 1Ⅲ澄清剂澄清工艺方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 255. 426 9 2 127. 713 5 31. 825 2 0. 030 5
B 22. 806 7 2 11. 403 4 2. 814 6 0. 260 3
C 40. 364 6 2 20. 182 3 5. 029 3 0. 165 9
D(误差) 8. 025 9 2 4. 013 0
注:F0. 05(2,2)= 19. 00,F0. 01(2,2)= 99. 00(表 7 同)。
由方差分析结果可知,3 因素中浓度比对于指
标的影响具有统计学意义,经直观分析,其影响大小
的顺序为浓度比 >澄清剂用量 >温度,综合考虑,得
优化处方条件为 A1B1C1,即浓度比为 1∶ 3,保温温度
为 60 ℃,澄清剂加入量为 1% b 组份 4 mL·药液100
mL - 1,0. 1% a 组份 20 mL·药液100 mL - 1。
2. 6. 2. 3 验证试验 取浓度为 1 ∶ 3 的提取液
50 mL,在 60 ℃水浴保温下边搅拌边加入 1% b 组
份 2 mL,2 h 后加入 0. 1% a 组份 10 mL,保温 1 h,
过滤,得澄清药液,进行各项指标的测定。按优选工
艺进行 3 次验证试验,结果 3 份提取液总分平均值
为 51. 51 ± 1. 41,RSD 2. 74%。表明优选的澄清工
艺稳定、可行。
2. 6. 3 醇沉澄清工艺
2. 6. 3. 1 处理方法 分别量取不同浓度的提取液
50 mL,加 95%乙醇调至含醇量至相应比例,放置相
应时间,滤过,滤液减压浓缩至无醇味,定容至 50
mL,按前法测定各项指标。
2. 6. 3. 2 正交试验 选取料液浓缩比、静置时间及
醇沉浓度为醇沉工艺效果的主要因素,进行 L9(3
4)
正交试验,其因素水平见表 5,试验安排见 6,方差分
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王玲,等:小儿清热止咳口服液澄清工艺比较
析见表 7。
方差分析结果表明 3 因素对指标均有统计学意
义,经直观分析其影响大小的顺序为浓缩比 > 醇沉
浓度 > 静置时间,综合考虑,得优化处方条件为
A3B1C3,即浓缩比为 1∶ 1的药液,加 95%乙醇调至含
醇量 60%,冷藏放置 6 h。
表 5 小儿清热止咳口服液醇沉工艺正交试验因素水平
水平 A 浓缩比 B 静置时间 / h C 醇沉浓度 /%
1 1∶ 3 6 40
2 1∶ 2 12 50
3 1∶ 1 24 60
表 6 小儿清热止咳口服液醇沉工艺正交试验安排
No. A B C D 出膏率 /% 麻黄碱相对含量 黄芩苷相对含量 总分
1 1 1 1 1 30. 98 2 332 809 16 668 214 42. 75
2 1 2 2 2 28. 53 1 935 388 17 541 822 34. 09
3 1 3 3 3 11. 42 2 546 388 18 372 562 48. 06
4 2 1 2 3 14. 43 2 633 334 18 830 736 55. 78
5 2 2 3 1 23. 65 2 667 368 18 131 022 58. 29
6 2 3 1 2 26. 94 2 550 452 17 319 528 51. 37
7 3 1 3 2 8. 41 3 180 720 21 284 754 85. 43
8 3 2 1 3 17. 68 2 645 751 19 211 382 60. 76
9 3 3 2 1 11. 59 2 837 757 19 403 253 64. 23
K1 124. 912 183. 969 154. 883 165. 27
K2 165. 440 153. 134 154. 108 170. 9
K3 210. 422 163. 671 191. 783 164. 6
R 85. 510 30. 835 37. 675 6. 3
表 7 醇沉工艺方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 1 219. 764 8 2 609. 882 4 152. 920 6 0. 006 5
B 163. 755 5 2 81. 877 7 20. 529 8 0. 046 4
C 309. 060 7 2 154. 530 3 38. 746 6 0. 025 2
误差 7. 976 5 2 3. 988 2
2. 6. 3. 3 验证试验 按优化条件进行 3 次验证试
验,取浓度为 1∶ 1的提取液 50 mL,加 95%乙醇调至
含醇量 60%,冷藏放置 6 h,过滤,减压浓缩至无醇
味,定容至 50 mL,按前法测定各项指标。3 份提取
液总分的平均值为 81. 14 ± 1. 66,RSD 2. 05%。表
明优选的澄清工艺稳定、可行。
2. 6. 4 3 种澄清方法效果的比较 按照以上筛选
出的 3 种除杂工艺分别处理 3 份样品,指标计算方
法和比较方法同前,结果高速离心,ZTC1 + 1Ⅲ型澄
清剂,醇沉工艺 3 种澄清方法总分分别为 54. 22,
51. 72,86. 56;出膏率分别为 17. 99%,22. 13%,
6. 21%;麻 黄 碱 相 对 含 量 分 别 为 2 559 767,
2 745 876,3 099 878;黄芩苷相对含量 分 别 为
18 599 875,16 898 359,21 699 374。按综合评分法
结果比较,澄清方法的效果为醇沉法 > 高速离心法
> ZTC1 + 1Ⅲ型澄清剂;肉眼观察经 3 种澄清工艺
后的成型制剂的澄明度为醇沉法 > ZTC1 + 1Ⅲ型澄
清剂 >高速离心法。综合考虑,醇沉工艺效果最好。
2. 7 验证试验 按以上优选工艺进行 3 批中试,结
果表明放大生产工艺稳定可行,成品率在(96 ±
1. 34)%,适合工业化大生产。
用 3 批中试样品进行加速试验和长期稳定性试
验,按照质量标准项下要求进行检查。加速试验及
长期试验结果表明在规定的实验条件下,各项考察
指标均未见明显变化,其中在常温条件下放置 6 个
月时有部分制剂出现轻摇即散的少量絮状沉淀,即
该制剂在规定条件下加速试验 6 个月和常温条件下
放置 6 个月是稳定的,证明该制剂的初步稳定性良
好、优选工艺可行,长期留样试验仍在进行中。
3 讨论
澄清工艺的原理不同导致了澄清效果不同。高
速离心是一种借助互不相溶组分间不同的离心力而
达到分离的物理方法,在本研究中发现经高速离心
后的药液放置一段时间后仍会有较多沉淀出现,考
虑可能经多次静置-离心后效果会有所改善。醇沉
法是通过加入乙醇改变溶剂的极性而改变组分的溶
解度,使得某些成分析出。ZTC1 + 1 澄清剂的作用
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原理是第 1 种组分加入后,在不同的可溶性大分子
之间架桥连接,使分子迅速增大,第二种组分在第一
种组分形成的复合物的基础上再架桥,使絮体尽快
形成沉淀而除去[4]。
醇沉对麻黄碱和黄芩苷的影响较其他 2 种方法
都小,同时对出膏率的降低也较少,但对制剂澄明度
的改善却优于其他 2 种方法;ZTC1 + 1III 型澄清剂
能最大程度的降低出膏率,但同时对麻黄碱及黄芩
苷的含量影响也较大,且其对制剂的澄明度改善不
如其他 2 种方法。推测可能是本处方药材所含主要
影响制剂澄明度成分较易被醇沉除去,而其指标性
成分如生物碱、黄酮类成分被较好的保留了下来;
ZTC 澄清剂可能对影响制剂澄明度的成分去除较
差,并可能在除去胶体等不稳定成分的同时对生物
碱、黄酮类成分除去较多,其虽较大降低出膏率,但
对制剂澄明度的改善作用不大,造成其处理后的制
剂澄明度不如经醇沉的制剂。ZTC1 + 1III 型澄清剂
用于小儿清热止咳口服液的澄清有文献[5]以 3 个
成分(盐酸麻黄碱、甘草次酸、黄芩苷)的定性鉴别、
辅以盐酸麻黄碱的定量变化进行考察,认为 ZTC1 +
1III 型澄清剂可应用于该制剂的澄清工艺,文献[6]
表明,采用单一成分的含量变化为指标对中药复方
制剂制备工艺进行评价具有较大的局限性,应尽可
能应用多成分指标。
[参考文献]
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[责任编辑 仝燕
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王玲,等:小儿清热止咳口服液澄清工艺比较
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