丙种球蛋白的制备

nullnull制作者：王维null中文简称：“丙球” 　　英文名称：γ-globulin、gamma globulin 【别名】 免疫血清球蛋白，普通免疫球蛋白，人血丙种球蛋白，丙种球蛋白，静脉注射用人免疫球蛋白（pH4） 丙种球蛋白预防传染性肝炎，预防麻疹等病毒性疾病感染，治疗先天性丙种球蛋白缺乏症 ，与抗生素合并使用，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。 注：由于人血中的免疫球蛋白大多数为丙种球蛋白（γ-球蛋白），有时丙种球蛋白也被混称为“免疫球蛋白”(immunoglobulin) 。null性状 冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，液体制剂和冻干制剂溶解后，溶液应为接近无色或淡黄色的澄明液体，微带乳光。但不应含有异物或摇不散的沉淀。 药理作用 注射丙种球蛋白是一种被动免疫疗法。它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态。由于抗体与抗原相互作用起到直接中和毒素与杀死细菌和病毒。因此免疫球蛋白制品对预防细菌、病毒性感染有一定的作用[1]。 药代动力学 人免疫球蛋白的生物半衰期为16～24天。null1. Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白； 2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳制备丙种球蛋白。nullSephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。 Sephadex凝胶按交联度不同，用Sephadex G加一个数字来区别型号，数字越小，示介质交联度越大，分级范围越小，反之亦然。 Sephadex G 葡聚糖凝胶特点： 1、经典的葡聚糖和环氧丙烷偶联介质，拥有极高的流速 2、多种不同的分离范围，提供了广泛的选择性。null1. 学习和掌握分子筛凝胶层析法的和基本操作技术。 2 学会使用Sephadex G－50分离丙种球蛋白null 凝胶过滤是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析。此类层析的固相载体是具有分子筛性质的凝胶，此次实验使用葡聚糖凝胶过滤。凝胶过滤的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。加入交联剂表氯醇交联聚合而成多糖链的三维结构，是多孔性网状结构，凝胶的孔径大小与交联剂的量有关，交联剂多则交联度大，网状结构紧密，孔径小，反之交联剂少则孔径大。 null1、实验器材 层析柱（玻璃柱）、铁架台 2、实验材料 样品液：0.05%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。 注意：核黄素需近期生产，并新鲜配制 3、实验试剂： (1) 洗脱液(pH7.2 ;0.1mol/L磷酸盐缓冲液）:取0.1mol/L磷酸氢二钠720ml和0.1mol/L磷酸二氢钠280ml,混匀。 (2)交联葡聚糖凝胶G-50 (Sephadex-G-50)：G后的数字为凝胶吸水值的10倍，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度和分布范围null凝胶的预处理 根据柱体的容积和凝胶的膨胀率计算所需凝胶干粉的用量。称取所需重量的凝胶干粉，放置于烧杯内，加水溶胀。 装柱 装柱的质量对层析分离的效果有直接的影响，必须十分细心。取直径0．8-1.2cm，长度为25cm的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水2-3ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。 将充分溶胀的凝胶制成厚浆状悬液，沿管壁倒入柱内(柱体预先放妥支持板)，待底部凝胶沉积2-3cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。操作过程中，应防止气泡与分层现象的发生。让凝胶自然下沉，使表层平整。待凝胶柱层稳定后，以洗脱液(蒸馏水)洗柱5分钟，调节流速至4滴每分钟。null加样 待蒸馏水流至柱面平时，(注意，不可使柱面干掉)，马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面，注意尽量不使床面搅动，马上加入1—2倍于样晶体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。 洗脱 层析柱在加好样以后，即可接上恒压洗脱贮瓶开始洗脱。可用大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。 null1．在收集过程中，要保持流出液的流速稳 定，洗脱速度控制在4滴/min。 2．加样时，保持凝胶上平面不被搅动。 3．液面要始终高于凝胶上平面，否则会导致 干柱 4．装柱避免出现断层、气泡。 null