八子补肾胶囊的质量标准研究

八子补肾胶囊的质量研究 八子补肾胶囊的质量标准研究 药物鉴定 八子补肾胶囊的质量标准研究2011年第2O卷第7期 许红辉,张永锋,李晓燕,赵韶华,李向军 (河北以岭医药研究院,河北石家庄050035) 摘要:目的探-/,j-~\子补肾胶囊的质量控制方法.方法采用薄层色谱法定性鉴别八子补肾胶囊中的人参,五味子,淫羊藿,高效液相色谱法 测定蛇床子素的含量.结果薄层色谱中王i,点清晰,便于定性鉴别;蛇床子素进样量在28.056,561.12ng范围内与峰面积线性关系良好, 平均回收率为98.26%,RSD为0.76%(n=6).结论所用定性鉴别方法专属,含量测定方法简便,准确,重现性好,精密度高,两法联用可 作为八子补肾胶囊的质量控制方法 关键词:八子补肾胶囊;薄层色谱法;高效液相色谱法;蛇床子素;含量测定 中图分类号:R284.1;R286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)07—0024—02 八子补肾胶囊为我院自行研发的中药六类新药,具有自主知 识产权,由蛇床子,人参,五味子,淫羊藿等药昧组成.为有效控制 其质量,现采用薄层色谱法鉴别其中的人参,五味子,淫羊藿,高效 液相色谱法测定蛇床子素的含量,报道如下. 1仪器与试药 Waters2695—2487型高效液相色谱系统.八子补肾胶囊(石家 庄以岭药业股份有限公司,批号为060801);人参皂苷RIll对照品, 人参皂苷R对照品,人参皂苷对照品,五昧子甲素对照品,淫 羊藿苷对照品,蛇床子素对照品均购自中国药品生物制品检定所, 批号分别为l10704—200420,110754—200420,110703—200424, 110764—200107,l10737—200312,l10822—200204;乙腈为色谱 纯,水为乐百氏纯净水,其余试剂均为分析纯. 2方法与结果 21定性鉴别(薄层色谱法) 人参:取本品内容物8g,加甲醇60mL,超声处理10min,滤 过,滤液蒸干,残渣用20mL水溶解,过D101型大孔吸附树脂柱 (内径1.5om,柱高约15em),用水洗脱至洗脱液近无色,弃去洗脱 液,再用70%乙醇100mL洗脱,收集洗脱液,浓缩至约20mL,加 正丁醇20mL,振摇提取,提取液用1%氢氧化钠溶液10mL洗涤, 弃去洗涤液,再用1OmL水洗涤,分取正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇 1mL溶解,作为供试品溶液;取不含人参的阴性样品,同法制备阴 性对照品溶液;另取人参皂苷R人参皂苷R,人参皂苷R-对照 品,加甲醇制成每1mL分别含1nag上述对照品的混合溶液,作为 对照品溶液.吸取供试品溶液,阴性对照品溶液各15L和对照品 收峰,明阴性对照品溶液对测定无干扰(图1).表1葛根素加样回收试验结果 (n=6) l i——』一一——i Ul224Ulj0Ul,j0 ABC 1.葛根素 A.对照品溶液B.供试品溶液C阴性对照品溶液 图1高效液相色谱图 线性关系考察:精密吸取对照品溶液2,4,8,16,20L,注入液 相色谱仪,测定峰面积.以葛根素进样量X(g)对峰面积y进行 回归,得回归方程Y=2614021X—l15642,r=0.9999(n=5). 结果表明,葛根素进样量在0.104,1.04txg范围内与峰面积线性 关系良好. 精密度试验:精密吸取对照品溶液1O,重复进样6次,测定 峰面积.结果的RSD为0.92%(n=6),表明仪器精密度良好. 稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于0,1,3,9,12h时进样 测定峰面积.结果的RSD为0.66%(n=5),表明供试品溶液在12h 内稳定性良好. 重复性试验:按拟订的含量测定方法,取同一批样品6份,依 法测定峰面积,以外标法计算葛根素含量.结果样品中葛根素平均 含量为0.75mg/片,RSD为1.08%(n=6),表明方法重复性较好. 加样回收试验:取已知含量的样品6份,分别加人葛根素对照 品,按供试品溶液制备方法制备溶液,测定葛根素含量,计算回收 率.结果见表l. 24样品含量测定 按供试品溶液制备方法制备溶液,依法测定样品中葛根素含 ? 24? 量.结果批号为100201,100202,100205,100301,100302的5批样 品中,葛根素含量分别为0.72,0.69,0.80,0.77,0.70Hag/片. 3讨论 试验中采用的供试品溶液制备方法系参照文献【1—2】确定. 曾比较了甲醇回流提取法,微波提取法和超声波提取法,结果超声 波提取法与回流提取法的提取结果相近,但考虑到方法的简单,快 捷,实用,故选择超声波提取法作为供试品溶液的制备方法.参考 文献[3]以甲醇一水溶液作为流动相,多次试验表明,甲醇一水(25: 75)能使样品中葛根素峰与相邻色谱峰达到基线分离且峰形对称, 阴性对照无干扰.本研究表明,高效液相色谱法可用于心舒片的质 量控制. 参考文献: f11杨芳.RP—HPLC测定益脑复健胶囊中葛根素的含量[J].中国医药 导报,2009,6(20):43. 『21谢东,路玫.HPLC法同时测定风寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含 量【J】广东药学院,2009,25(1):28. 【3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)【M].北京:化学工业出 版社,2005:233. (收稿日期:2010—03—16;修回日期:2010—06—28) 中国药业ChinaPharmaceutica~ 』 2011年第20卷第7期 溶液2IxL,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上,以正丁醇一冰醋酸一水(8:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干, 喷以5%磷钼酸无水乙醇液,105?下加热至斑点显色清晰.结果供 试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑 点,阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图lA). 五味子:取本品内容物2g,加三氯甲烷30mL,超声处理20rain, 滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷2mL使溶解,作为供试品溶液; 取不含五味子的阴性样品,同法制备阴性对照品溶液;另取五味子 甲素对照品,加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品 溶液.吸取供试品溶液,阴性对照品溶液各l5L和对照品溶液 2L,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF薄层板 上,以甲苯一乙酸乙酯(9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光 灯(254nln)下检视.结果供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱 相应位置上显相同颜色的荧光斑点,阴性对照品溶液色谱则无此 斑点(图1B). 淫羊藿:取本品内容物1g,加甲醇25mL,超声处理20min,滤 过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加三氯甲烷20mL振摇提 取,弃去提取液,再加乙酸乙酯15mL振摇提取,分取乙酸乙酯层, 蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液;取不含淫羊藿的 阴性样品,同法制备阴性对照品溶液;另取淫羊藿苷对照品,加甲 醇制成每1mI含0.1mg的溶液,作为对照品溶液.吸取供试品溶 液,阴性对照品溶液和对照品溶液各1txL,点于同一聚酰胺薄层板 上,以乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水(12:2:1:0.2)为展开剂,展开, 取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯(365nrn)下检视.结果 供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色 的荧光斑点,阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图1C). _-豳J2345J2j45l2345 ABC 1.阴性对照品溶液2.对照品溶液3—5.供试品溶液 A人参B五味子C.淫羊藿 图1薄层色谱图 22含量测定(高效液相色谱法) 2.2.1色谱条件 色谱柱:PhenomenexGeminiC】8柱(150innl×4.6mnl,5m), 流动相:乙腈一水(65:35);流速:1mL/min;检测波长:322nm.理 论板数按蛇床子素峰计应不低于5000. 2.2.2溶液制备 精密称取蛇床子素对照品适量,加甲醇制成每1mL含8g 的溶液,摇匀,即得对照品溶液.取本品内容物,研细,取0.3g,精 密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇25mL,称定质量,超声(功率 250W,频率40kHz)处理30min,放冷,用甲醇补足减失的质量,滤 过,取续滤液作为供试品溶液.照处方配比取除蛇床子外的其他药 味,按制备工艺和供试品溶液的处理方法制成阴性对照品溶液. 2.2.3方法学考察 专属性试验:精密吸取对照品溶液,供试品溶液和阴性对照品 溶液各1OL,进样测定.结果方中除蛇床子外的其他药味不干扰 蛇床子素的测定(图2). 中国药业ChinaPharmaceuticals 线性关系考察:精密吸取质 量浓度为14.028Ixg/mL的对照 品溶液2,5,10,20,40IxL,注入液 相色谱仪,测定峰面积,以峰面积 积分值为纵坐标,进样量为横坐 标绘制标准曲线,得回归方程 l,:3.68×10X一3.09×10.r= 0.999997(n=5).结果表明,蛇床 子素进样量在28.056,561.12ng 范围内与峰面积积分值线性关系 良好. 精密度试验:精密吸取对照 品溶液10L,连续进样5次,测 定色谱峰吸收值.结果的RSD分 别为0.25%(n=5),表明方法精 密度良好. 稳定性试验:精密吸取供试 药物鉴定 05l0 C 1.蛇床子素 A.对照品溶液 B.阴性对照品溶液 C供试品N-液 图2高效液相色谱图 品溶液10L,分别于0,3,6,12,24h时测定色谱峰吸收值.结果 的RSD为0.29%(n=5),表明供试品溶液在24h内稳定. 重复性试验:取同批次样品9份,取样量分别为1.6,2.0,2.4g, 对每个取样量各制备3份供试品溶液并检测.结果蛇床子素平均 含量为1.3608mg/g,RSD为1.46%(n=9),表明方法重复性良好. 加样回收试验:取同批次样品6份,分为2组,各加入低,中, 高3种质量浓度的对照品溶液,即每个质量浓度分别制备2份供试 品溶液,测定其含量,计算回收率.结果见表1. 表1蛇床子素加样回收试验结果(n=6) 取样量(g)样品含量(ng)加入量(ng)测得量("g)回收率(%)(%)RSD(%) 2.2.4样品含量测定 依法测定4批样品,结果批号为2006100l,20061002,20061003, 20061004的样品中,蛇床子素的含量分别为0.3916,0.4416, 0.4496,0.4272mg/粒(:2),平均0.4275mg/粒. 3讨论 鉴别人参时,由于本品为复方制剂,成分复杂,为了有效除去 杂质,使鉴别斑点更清晰,先用大孔吸附树脂柱除杂,后用正丁醇 萃取皂苷类成分,并用碱洗正丁醇层除去杂质…,结果获得了较 好的薄层色谱鉴别效果.曾对蛇床子素对照品,样品,阴性样品进 行光谱检测,结果对照品和样品在322nm波长处有最大吸收,而 阴性样品在此波长处没有吸收,故选择322nm为检测波长.含量 测定项下的提取溶剂采用甲醇,与药典采用无水乙醇…:zo相比,获 取的蛇床子素含量高,原因有待进一步研究. 作者简介:许红辉(1976一),女,副主任中药师,研究方向为中 药新药开发研究,(电话)0311—85901590. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M】.北京:化学工业出 版社.2005. (收稿日期:2010—03—29;修回日期:2010—07—19) ? 25? 删 一,A,B——一m???m鲫??m鲫??