70例严重少精症和无精症患者Y染色体微缺失检测_25645

70例严重少精症和无精症患者Y染色体微缺失检测_25645 70例严重少精症和无精症患者Y染色体微缺失检测 [标签:来源] 作者:王喜良，郝冬梅，侯开波，张宁，闫素文 【摘要】 目的:探讨严重少精症和无精症与Y染色体微缺失的关系。:对染色体正常 的70例严重少精症和无精症患者运用多重 PCR技术检测Y染色体AZF基因家族AZFa、AZFb、 AZFc三个区域中6个序列标签位点(sequence tagged sites， STS)微缺失，20例精液正常 患者作为对照。 结果:39例严重少精症患者中发现5例存在Y染色体微缺失，均为AZFc缺 失，缺失率为12.82%(5/39);31例无精症患者中发现6例存在Y染色体微缺失，其中AZFb+AZFc 缺失2例，AZFb缺失3例，AZFc缺失1例，缺失率为19.35%(6/31)。20 例精液正常患者Y 染 色体均未发现微缺失。 结论:Y染色体微缺失是造成男性精子发生障碍的常见病因之一。 【关键词】 严重少精症;无精症;Y染色体微缺失 AbstractNFDEAObjective:To assess the relationship between severe oligozoospermia or azoospermia and Y chromosomal microdeletions.Methods:Seventy chromosome normal infertile men with severe oligozoospermia or azoopermia were screened by multi-polymerase chain reactions with 6 sequence tagged sites in AZFa、AZFb、AZFc region，and 20 normospermic men as controls.Results:12.82 %(5/39)of microdeletions were detected in 39 severe oligozoospermia， and microdeletion type was AZFc.19.35 %(6/31)of microdeletions were detected in 31 azoospermia，and microdeletion types were AZFb+AZFc，AZFb and AZFc.Microdeletions were not detected in 20 normospermic men.Conclusion:Y chromosome microdeletion is one of the causes which result in male spermatogenetic obstacle. Key wordsNFDEAsevere oligozoospermia;azoospermia;Y chromosomal microdeletion 严重少精症和无精症是男性不育的主要原因之一[1]。导致严重少精症和无精症的因素有 很多，包括染色体数目和结构异常，微生物感染、药物影响等。近年发现Y染色体长臂存在 微缺失现象，本文采用多重PCR 技术检测染色体正常的严重少精症和无精症患者的Y染色体 微缺失，探讨严重少精症和无精症与Y染色体微缺失之间的关系。 1 与方法 1.1 一般资料 70例严重少精症和无精症患者均来自本院2009年1月至12月不育门诊就诊患者。年龄22,39 岁，平均30岁。按WHO 精液常规确定为严重少精症或无精症，其中严重少精症39 例，无精症31例。对照组20 例为在本院就诊， 并经至少1 次精液常规分析满足WHO(精子密度正常)标准者。 1.2 方法 用血液DNA 提取试剂盒提取DNA，运用多重 PCR技术检测Y染色体AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三个区域中的6个序列标签位点微缺失。每个样品做A组和B组两个多重PCR反应，A组包括sY254、sY127、sY86三个位点，B组包括sY134、sY84、sY255三个位点。每组设置一对扩增SRY基因(位于Y染色体短臂上的性别决定基因)的引物，作为内对照。Y染色体微缺失试剂盒来自于透景生命科技有限公司。按照试剂盒操作说明扩增DNA，扩增条件为: 95 ? 3 min; 95 ? 30 s， 59 ? 30 s， 72 ? 30 s,35 个循环，最后72 ?延伸10 min。产物经琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像系统观察分析条带。 2 结果 39例严重少精症患者中发现5例存在Y染色体微缺失，均为AZFc缺失，缺失率为12.82%。31例无精症患者中发现6例存在Y染色体微缺失，其中AZFb+AZFc 缺失2例，AZFb缺失3例，AZFc缺失1例，缺失率为19.35%。70例严重少精症和无精症患者共检出11例Y染色体微缺失，总缺失率为15.71%。20 例精液正常患者Y 染色体均未发现微缺失。 3 讨论 1976年，Tiepolo 和Zuifaidi 首先提出Y染色体上有多个基因参与生精过程[2] ,30 多年来的研究发现男性特有的Y染色体上面存在一个关键的与生育相关的因子的区域，称为AZF区。目前认为在AZF 区上存在三个精子发生亚区(AZFa、AZFb、AZFc)，各亚区包含的位点在男性生殖细胞发育的不同时期起着不同的作用，位点的缺失可致患者现为少、弱精症或无精症从而引发不育。一般认为，Y染色体的近端缺失(涉及AZFa 和AZFb)，表现以唯支持细胞综合症为主的严重生精障碍， Y染色体的远端缺失(涉及AZFb 远段和AZFc)，可残留岛状的生精正常区域[3] 。无精症和少精症AZF 总的缺失率不同实验室报道差别很大1%,55%[4]，可能是选择的对象不同导致结果不同。本文中选择的病例是排除了染色体异常的患者后检测的结果。31例无精症患者中发现6例存在Y染色体微缺失，其中AZFb+AZFc 缺失2例，AZFb缺失3例，AZFc缺失1例，缺失率为19.35%，而39例严重少精症患者中发现5例存在Y染色体微缺失，均为AZFc缺失，缺失率为12.82%。可以看出无精症患者的微缺失率高于严重少精症，且缺失情况更严重。 Y染色体微缺失的检测具有非常重要的意义，不同的位点缺失其治疗方法是不一样的，检测的结果将指导临床医生决定是否采用供精人工授精或移植前遗产学诊断(PGD)实施辅助生育。AZFa，AZFb， AZFb+AZFc，AZFa+b+c这四种类型缺失的患者，一般表现为无精子症。即使通过睾丸穿刺，获得精子的机会也几乎为零，故不建议进行穿刺手术和施行卵胞浆内单精子注射ICSI 。这类患者可以通过人类精子库供精生育后代。AZFc区域缺失的少精子症患 者，其精子数目有进行性下降的趋势，部分患者最后发展为无精，所以应及早进行治疗，对 暂不需要后代的患者，可将其精液冷冻保存。 20世纪90年代始，卵胞浆内单精子注射技术的应用使严重少精症甚至无精症不育男性 实现了生育的可能。但无精症和严重少精症患者存在遗传缺陷的几率是很大的， Y 染色体微 缺失可通过辅助生殖技术传给男性子代，子代有可能在成年后表现出与父亲相同的异常缺陷， 应建议患者实施移植前遗传学诊断(PGD)来获得后代。因此严重少精症和无精症患者在进行辅 助生育治疗前应常规进行遗传咨询， 并应把Y染色体微缺失检测应作为常规的检查项目[5]。 开展Y染色体微缺失检测，可全面评价男性不育遗传缺陷，从而更好的解释发病原因，提供 遗传咨询和指导临床诊疗。 【参考文献】 [1]Krausz C， Mc Elreavey K.Y chromosome and male infertility [J].Front Biosci， 1999， 15(4):1-8. [2]Tiepolo L， Zuffardi O.Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm[J].Hum Genet,1976,34 (2):119-124. [3]Maurer B， Simoni M.Y chromosome microdeletion screening in infertile men [J].J Endocrinol Invest， 2000， 23(10):664 - 670. [4]Dada R，Gupta NP， Kucheria K.Yq microdeletions-azoospermia factor candidate genes and spermatogenic arrest [J].J Biomol Tech,2004,15(3):176-183. [5]Liow SL， Yong EL， Ng SC.Prognostic value of Y deletion analysis: How reliable is the outcome of Y deletion analysis in providing a sound prognosis? [J].Hum Reprod,2001,16(1): 9-12.