药学论文-赤雹果水提取物镇痛作用与前列腺素E2关系研究

药学论文-赤雹果水提取物镇痛作用与前列腺素E2关系研究 作者：陈光晖 佟继铭 刘玉玲 宋利萍 赤雹果 水提取物 镇痛 前列腺素E2 Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between PGE2 and the analgesic effect of the water extract of Thladiantha dubia fruits. MethodsThe analgesic effect of FTDB was evaluated by the classical writhing test. The content of PGE2 was detected in peritoneal fluid of mice.Results1.0, 2.0 and 4.0 g/kg of WEFTD markedly reduced the numbers of pain reaction induced by antimony potassium tartrate solution(P<0.05 vs model group) and obviously decreased the content of PGE2 in peritoneal fluid of mice (P<0.05 vs model group). ConclusionWEFTD has obvious analgesic effect and its one of mechanisms is to inhibit the synthesis or release of PGE2. Key words：Thladiantha dubia fruits； Water extraction； Analgesic； PGE2 赤雹(Thladiantha dubia Bunge,TDB)为葫芦科多年蔓生草本植物［1］，赤 雹果是赤雹的干燥成熟果实，民间常用于治疗腰腿痛、风湿痛、痛经、软组织损 伤等多种疼痛，还具有较强的抗炎和抗过敏作用，且无明显的毒副作用，是值得 进一步研究的抗炎镇痛药。前期研究已经证明赤雹果水提取物（WEFTD）具有明显的镇痛作用［2］，其镇痛作用与阿片受体无关［3］。为进一步探讨赤雹果的 镇痛作用机制，本实验采用小鼠扭体法对WEFTD的镇痛作用与PGE2关系进行了研究。 1.1 动物 选用昆明种小鼠70只，体重20～22 g，雌雄各半，河北医科大 学实验动物中心合格证号：医动字第04056号。实验前禁食12 h（自由食水）。 1.2 药物与试剂WEFTD，由承德医学院中药研究所制备。阿斯匹林，石家 庄永强制药厂产品，批号001009。酒石酸锑钾，杭州临安金龙化工有限公司； 吗啡，东北第六制药厂产品，批号0010109。PGE2试剂盒，南京建成生物工程研 究所。氢氧化钾（KOH）化学纯上海泗联化工厂产品，批号970402。 甲醇（Methanal）纯,上海化学试剂厂产品，批号990405。 1.3 仪器岛津260紫外-可见分光光度计(日本)，DT-100A分析天平(北京光学仪器厂)，DHF-1高速分散器(上海金达生化仪器厂)，TLL-D台式冷冻离心机(军事医学科学院实验仪器厂)，WSZ-261-79恒温箱(上海医疗器械七厂)。 2.1 小鼠扭体法［4］小鼠70只，禁食12 h（自由食水），取出60只，随机分为模型（NS）组，WEFTD低、中、高（1 000，2 000，4 000 g/kg）剂量组，吗啡（Mor）7.5 mg/kg组、阿斯匹林（Asp）200 mg/kg组,每组10只。 Mor皮下注射（Sc）给药；其它组灌胃给药(ig)，给药容积0.2 ml/10 g 体重，盐水组ig等容积的生理盐水。Sc给药后15 min，ig给药后40 min，腹腔注射0 .05% 酒石酸锑钾0.2 ml /只致痛，观察小鼠产生“扭体”反应(腹部凹陷，躯干后腿伸直，臀部高起)，计数致痛后15 min内各小鼠的扭体反应次数，并按文献方法 ［2］计算扭体反应抑制率。 2.2 小鼠腹腔液中PGE2测定小鼠扭体反应记录15 min后,把上述60只小鼠及备用的10只对照组小鼠快速断头处死，撕开腹部皮肤浆膜，收集腹腔液2 ml，离心（2 500 r/min, 10 min, 4?），取上清液0.5 ml，加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液2 ml，在50?水浴中异构化20 min，用甲醇溶液稀释到5 ml，离心10 min（2 500 r/min），取上清液，在278 nm紫外光处测定。以吸收光密度值 显示PGE2 的含量。 2.3 观察指标各给药组小鼠在酒石酸锑钾腹腔注射后的扭体反应次数。各 实验组小鼠及对照组小鼠的腹腔液中PGE2含量（A）值。 2.4 统计学分析应用SPSS10.0软件进行分析。实验数据用?s示，组间差别比较采用方差分析。 3.1 对扭体反应的影响WEFTD 3个剂量组小鼠的扭体反应次数均明显减少 （与模型组比较P <0.05 ～ 0.01），并可剂量依赖性地提高扭体反应抑制率。 见表1。表1 WEFTD对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，n=10 3.2 PGE2的含量测定模型组小鼠腹腔液中PGE2含量比对照组小鼠显著升 高，Asp，Mor，WEFTD组小鼠腹腔液中PGE2含量显著低于模型组。见表2。表2 腹腔注射酒石酸锑钾对扭体反应小鼠腹腔液中PGE2含量（A值）的影响与对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，?P<0.01 ；n=10 赤雹果是满族人长期沿用的药材，民间应用经验证明其对风湿痛，跌打损伤 性疼痛、关节肿痛、肌肉痛，乳房胀痛、痛经均有显著的疗效，且无明显的毒副 作用。前期研究证明WEFTD对多种疼痛模型有明显的镇痛作用［2］，其镇痛作用与阿片受体无关［3］。为了进一步探讨WEFTD的镇痛作用机制，本研究采用 小鼠扭体法对WEFTD的镇痛作用与PGE2的关系进行了分析，结果显示WEFTD可显著减少酒石酸锑钾诱发的小鼠扭体反应次数，并明显减少小鼠腹腔液中PGE2含量。 小鼠扭体实验是通过化学刺激性物质注入小鼠腹腔后，刺激脏层和壁层腹膜， 引起较大面积较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现扭体反应。化学刺激引起的组 织损伤同时伴随大量致炎介质的释放，致炎介质对感受伤害的神经元作用方式有 两种，或是直接偶合于细胞膜受体，如特定的离子通道（氢离子、三磷酸腺苷、 5-HT），或是通过细胞内的第2信使的间接作用，如作用于β2受体的缓激肽，细胞因子（白细胞介素、肿瘤坏死因子），二十碳酸（前列腺素，白三烯）等等。 前列腺素是重要的炎性介质，前列腺素不直接刺激伤害感受器，而是使其对机械 刺激感受伤害的化学介质如缓激肽和组胺敏化，产生炎性疼痛，抑制前列腺素的 生物合成，是非甾体抗炎药的镇痛机制之一［5］。本研究证明WEFTD显著减少 小鼠腹腔液中PGE2的含量，提示其镇痛作用与抑制PGE2的合成和/或释放有关。具体的作用方式有待进一步研究。 ［1］ 宋立人，红 恂，丁绪亮，等. 现代中药大辞典，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2001：1022 . ［2］ 佟继铭，宋利萍，刘玉玲，等. 赤雹果水提取物的镇痛作用与阿片受体的 关系［J］.承德医学院学报，2007,24(3)：229. ［3］ 佟继铭，李兰芳，宋利萍，等.赤雹果水溶性提取物镇痛作用研究［J］.承德医学院学报，2006，23(4)：337. ［4］ 徐叔云 药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：282，283. ［5］ 李振军，李学旺，唐福林.非甾体类抗炎药治疗新进展［J］.国外医学?内科学分册，1998，25（8）：344.