化瘀祛斑胶囊提取工艺研究

化瘀祛斑胶囊提取工艺研究 【摘要】目的:确定化瘀祛斑胶囊最佳提取工艺方法。方法: 采用正交试验方法，以黄芩苷含量为检测指标，以水提醇沉为提取制备方法，考察各因素的影响。结果 最佳工艺如下:加入的水量为10倍，提取次数为3次，提取时间为1 h。合并滤液，浓缩至浓度为1.1g/mL-1，加乙醇使含醇量为60%沉淀，静置18 h。结论该法提取效率高，稳定性好。 【关键词】化瘀祛斑胶囊;正交试验;黄芩苷;提取工艺 【中国分类号】R461【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)11-0078-01 化瘀祛斑胶囊是由柴胡、薄荷、黄芩、当归、红花、赤芍6味药物制成，功效为疏风清热，活血化瘀，用于黄褐斑、酒渣、粉刺。收载于《卫生部药品》中药成方制剂第19册。方中柴胡、薄荷、当归为粉碎料，其余三味药材红花、赤芍、黄芩选择水提醇沉法为提取方法。本文以黄芩苷的提取量为考察指标，采用正交试验法对化瘀祛斑胶囊的提取工艺条件进行比较优化。 1 仪器和试药 日本岛津高效液相色谱仪:LC一10ATvp泵、SPD-10Avp检测器;浙江大学智能信息公司N一2000双通道色谱工作站;H54AR 1型十万分之一电子天平;药材饮片(购于邢台市恒祥大药房)，所用化学试剂均为分析纯。黄芩苷标准品购自中国药品生物制品检定所(批号110715-200714，供含量测定用)。 2 方法和结果,1,3, 2(1 水提工艺的优选 2(1(1 水提因素水平(1) 采用正交试验法对其主要影响因素加水量(A)、提取次数(B)、回流提取时间(C)进行考察。每付药提取后定容至125mL。以黄芩苷的提取量为考察指标，采用三因素三水平正交法确定其提取条件。 2(1(2 黄芩苷的含量测定:色谱条件:色谱柱:DiamonsilTM Cl8 5μm (200mm×4(6 mm)色谱柱;流动相:乙腈―甲醇―0.2M磷酸缓冲盐(21:10:69);流速:1(0mL,min;柱温:30?;检测波长:28Onm;理论板数:按黄芩苷峰计算不得低于2OOO。 注:0.2M磷酸缓冲盐溶液配制方法:取31.2g磷酸二氢钠加水至1000mL，加入磷酸13mL即得。 对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品10.4mg，置10mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，溶解、摇匀即得(每1 mL中含黄芩苷1.04mg)。 供试品溶液的制备:提取液真空烘干至恒重，取样品约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加稀乙醇50 mL密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 标准曲线的制定 精密吸取对照品溶液(1.05692mg/mL-1)1，2，3，4，5,6 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积，结果为Y=998.76X+24 ，r=0.9998;线性范围:1μg,6μg。 各提取液中黄芩苷的含量测定:精密吸取各供试品溶液10μL，以“标准曲线的制定”项下操作并测定吸收峰面积，计算含量。对结果进行方差分析。 各因素对化瘀祛斑胶囊水提工艺中黄芩苷含量的影响大小顺序是:提取次数>加水量>提 取时间。表3方差分析结果表明，A因素(加水量)和C因素(提取时间)对结果影响不大，B因素(提取次数)对结果有显著性影响。根据正交试验结果，6号试验结果提取黄芩苷含量最多即加入的水量为10倍，提取次数为3次。提取时间为1 h。故采取此提取方法。 2(1(3 验证试验:取3份药材，按上述优选的试验结果即加入的水量为10倍，提取次数为3次，提取时间为1 h;浓缩至浓度为1.1 mg/mL-1。测定结果见表4，可见该工艺条件稳定，重复性好。 2(2 醇沉工艺的优选"为除去杂质并最大限度的保留有效成分，以黄芩苷含量为指标，对影响醇沉的因素(药液浓度、含醇量、静置时间)进行考察。以最佳水煎工艺置备一定量的药液并平分9分。按正交试验进行(含量测定方法同上，醇沉因素水平详见表2，结果醇沉最佳工艺为药液浓度为1.1 mg/mL-1，乙醇浓度为6O,，静置时间为18 h。由于三个因素对其结果均无显著性影响，从节约能源角度考虑将制备工艺确定为浓缩至浓度为1.1 mg/mL-1，加乙醇使含醇量为60,进行沉淀。静置18 h。 表2 醇沉因素水平表 2(3 验证试验:取3份药材，按上述优选的试验结果即加入的水量为10倍，提取次数为3次，提取时间为1 h;浓缩至浓度为1.1 mg/mL-1，加乙醇使含醇量为60,沉淀，静置18 h进行提取。结果可见该工艺条件稳定，重复性好。 3 讨论 3(1 在水提过程中黄芩苷为方中主要成分且比较稳定，所以采用黄芩苷的提取量为指标，根据文献,2,用高效液相色谱法法进行测定。 3(2 原处方中没有醇沉工序，在实际生产中存在大量的杂质成分，造成后道工序难于进行，所以在考虑减少杂质，提高有效成分方面增加了醇沉工序，根据试验结果显示此工序还是很必要的，但需要进一步进行药效药理方面的研究。 3(3 在制备供试液中，采用提取液真空烘干后再进行精密称量，是为了统一黄芩苷的提取量单位。 3(4 黄芩苷在热的环境下不稳定，根据上述试验亦证明了，故实际生产操作中应尽量控制提取的时间，同时，在浓缩过程中，注意保持真空度，提取液沸腾温度应控制在70摄氏度左右。 参考文献 ,1,卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第19册),S,.北京:人民卫生出版社,1998:130 ,2,赵赫，訾慧. HPLC法测定化瘀祛斑胶囊中黄芩苷的含量 ,J,。辽宁中医药大学学报，2007，9(1):146-147. ,3,谢燕，朱太咏，张国梁. 益气生骨颗粒剂的提取工艺研宄 ,J,。上海中医药杂志，2006，40(12)，74-75