[doc格式] 生育酚过氧化氢诱导晶状体混浊的实验研究

[doc格式] 生育酚过氧化氢诱导晶状体混浊的实验研究 生育酚过氧化氢诱导晶状体混浊的实验研 究 中国实用医药2008年8月第3卷第24期ChinaPracMed.Aug2o08,v01.3.No.24 番茄红素联合Ot.生育酚过氧化氢诱导晶状 体混浊的实验研究 胡秀川蔡可丽 【摘要】目的探讨番茄红素联合a一生育酚对晶状体氧化损伤进行药物治疗的可行性.方法体 外培养正常大鼠晶状体,按随机分组原则将大鼠晶状体分为以下8组:空白对照组(A),过氧化氢处理组 (B),过氧化氢和不同浓度番茄红素(1Ixmol/L,5Ixmol/L,10Ixmol/L)处理组(c1,c2,c3),过氧化氢和 不同浓度番茄红素(1m0L/l,5moL/L,10moL/L)联合a一生育酚处理组(D1,D2,D3).紫外分光光度 计测定晶状体组织的总抗氧化能力(T-AOC),丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH),超氧化物歧化酶(SOD), 过氧化氢酶(CAT)的变化.结果培养24h结束后,不同浓度番茄红素处理组及不同浓度番茄红素联 合a一生育酚用药组SOD,CAT活性和GSH,T-AOC含量均显着高于 过氧化氢处理组,MDA含量均显着低 于过氧化氢处理组,经统计学,差异有显着统计学意义(P<0.01),不同浓度番茄红素处理组以5 ~moW1抑制晶状体氧化损伤的效果最明显;联合应用a-生育酚可以增强番茄红素的作用.不同浓度番 茄红素处理组与联合用药组各小组间两两比较,1~moWL番茄红素联合a.生育酚处理组与5ixmol/L番 茄红素处理组间没有显着性差别,其余各组间差异均有显着统计学意义(P<0.O1).结论番茄红素可 以抑制过氧化氢诱导的晶状体混浊,番茄红素联合a.生育酚抑制试验性白内障的形成是通过其抗氧化 作用发挥作用,在a一生育酚存在的条件下可以增强番茄红素的作用,使低浓度的番茄红素发挥更好的作 用.番茄红素联合a.生育酚有望成为预防或治疗白内障的新药. 【关键词】番茄红素;a一生育酚;白内障;大鼠 Experimentalstudyonlycopeneinassociationwitha-tocopherolinhibitiono fhydrogenperoxideinduced cataractHUXiu-chuan,CAIICe-li.DepartmentofOphthalmology,QiluHos pital,ShandongUniversity,JiNan 250012,China 【Abstract】ObjectiveToexplorethevalidityoflycopeneinassociationwither-tocopherolo nthetreat mentofhydrogenperoxideinducedcataract.MethodsCulturednormalratlensinvitrowererandomlydivided into8groups:thecontrolgroup,thegrouptreatedbyhydrogenperoxide,thegrouptreatedbyhydrogenperoxide andlycopene(1~moWL,5Ixmol/L,10Ixmol/L),thegrouptreatedbyhydrogenperoxideandlycopene(1 Ixmol/L,5~moWL,10~moWL)inassociationwitha-tocophero1.Theapoptosisratiooflensonthetimepoints 0f24hoursweredeterminedbyflowcytometry.Attheendoftheincubationperiod.thelenswereexaminedfor biochemicalparameterssuchasmalondialdehyde(MDA)superoxidedismutase(SOD)catalase(CAT)glutathione (GSH)andtotalantioxidiationability(TAOC)byspectrophotometrically.ResultsTocomparewiththecontrol group,thelevelofTAOCGSHandtheactivityofSODCATofthegrouptreatedbyhydrogenperoxidereduced statistically;thelevelofMDAincreasedstatistically(P<0.01).Abovementionedbiochemicalparametershad alteredstatisticallyofthegrouptreatedbyhydrogenperoxideandlycopene(1~moWL,5Ixmol/L,10~moWL) andofthegrouptreatedbyhydrogenperoxideandlycopene(1~moW1,5~mo W1,10~moW1)inassociation withertocophero1.ConclusionThelycopenecaninhibittheturbidityoflensinvitro.Lycopeneinassociation witha-tocopherolprotectsagainstexperimentalcataractdevelopmentbyvirtueofitsantioxidantproperties.The lycopeneinassociationwithatocopherolcanenhanceantioxidiationabilityoflycopene.Lycopeneinassociation withatoeopherolmaybeusefulforprophylaxisortherapyagainstcataract. 【Keywords】Lycopene;ortocopherol;Cataract;Rats 白内障是世界范围内首位的致盲性眼病,同时也是中国 第一位的致盲性眼病…,目前在世界范围内治疗白内障的措 施仍以手术或植人人工晶体为主要复明手段.但手术治疗也 会出现各种各样的并发症比如后发障的形成,手术源性散光, 最重要的是术后患者丧失了晶状体的调节作用,而影响患者 的生存质量.因此,寻求有效治疗和预防白内障的药物,为眼 科界多年来追求的目标.目前认为氧化损伤是诱发白内障的 主要因素,而LiWC等研究认为,晶状体上皮细胞凋亡是 除先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础. 本研究应用番茄红素单独或联合a生育酚作用于离体氧化 损伤晶状体,观察其治疗效果,为临床用药提供实验依据. 工柞单位:272600山东省梁山县人民医院眼科 ? 3? 1材料和方法 1.1实验动物健康Wistar大鼠,雌雄不限,体质量250— 300g.购自山东大学实验动物中心. 1.2主要仪器与试剂苏州YZ2OPS眼科手术显微镜及眼 科器械,美国NV2500E型二氧化碳细胞培养箱,德国BP 211G型电子天平,上海UV-754型紫外分光光度计,美国BD 公司FACScan流式细胞仪,苏州安泰空气技术有限公司BHC 1300IIA/B3超净工作台.RPMI1040培养液(美国Gibco公 司),番茄红素(LY)(华北制药有限公司批号041202纯度 90%),使用时用无水乙醇稀释成不同浓度的应用液,1mol/ la生育酚(北京硕康医药有限公司批号050401纯度99%)使 用时用无水乙醇稀释.总抗氧化能力(TAOC),丙二醛 (MDA),谷胱甘肽(GSH),超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化 ? 4?中国实用医药2008年8月第3卷第24期ChinaPraeMed,AuK2008,Vo1.3,No.24 氢酶(CAT)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所 1.3离体培养大鼠晶状体过量乙醚麻醉致死后眼部碘伏 消毒,无菌状态下取出眼球,用含500ml的青霉素生理盐 水冲洗眼球后置于含青霉素8O万U,庆大霉素8万U的生理 盐水500ml中,1min后取出,在手术显微镜下由后极部剪开 巩膜,小心摘出晶状体,生理盐水冲洗后放人24孔细胞培养 板,每孔加入含青霉素100U/ml,链霉素100g/ml及含10% 胎牛血清的1640培养液2ml.置人37?,5%CO2培养箱内 培养6h,取透明晶状体备用. 1.4实验分组及处理采用随机数字表法将上述透明晶状 体进行随机分组,每组1O只晶状体.分为空白对照组(A), H:O:处理组(B),H:O:和不同浓度番茄红素处理组(c组: c1,c2,C3),H:O:和不同浓度番茄红素联合仅一生育酚处理 (D组:D1,D2,D3),A组:加入1640培养液2ml,同时加入 青霉素及链霉素,使其终浓度分别为100U/ml,100g/ml.B 组:在A组的基础上再加入3%H:O:4.5l,使其终浓度为 2mmol/L.C组:在B组的基础上,再加入不同浓度的番茄红 素,c1组加入1mmol/1的番茄红素母液2l,使其终浓度为1 vumol/1,C2组加入5mmol/1的番茄红素母液2l,使其终浓 度为5vumol/1,C3组加入5mmol/1的番茄红素4vul,使其终 浓度为10vumol/L.D组:在C组各小组的基础上,加入仅一生 育酚,使其终浓度为0.O1mol/L.每6h更换一次含相应浓 度的H:O:和不同浓度的番茄红素及仅.生育酚的培养液. 1.5检测晶状体的组织化学变化于24h培养结束后,每 组晶状体选择7只,从培养液中用圈匙取出,置于预冷的? 0.9%生理盐水中漂洗后,用滤纸吸干称重,放人玻璃匀浆器 中,加入晶状体质量9倍的0.86%冷生理盐水,制成10%的 组织匀浆.500rpm/min,离心10min,取上清液严格按试剂 盒说明测定各晶状体的MDA,T.AOC,SOD,GSH,CAT及蛋白 含量. 1.6统计学方法本研究采用SAS6.12统计软件包应用方 差分析对各组计量资料进行统计学处理,同组问两两比较采 用SNK检验,以P<0.05为差异有统计学意义. 2结果 培养24h结束后,C组及D组SOD,CAT活性和GSH,T AOC含量均显着高于B组,MDA含量均显着低于B组,经统 计学分析,差异有显着统计学意义(P<0.O1)(表1).C组与 D组各小组间两两比较,除c2组与D1组间无明显差别外(P >0.05),其余各组间差异均有显着统计学意义(P<0.O1). 表1培养24h后各组晶状体的MDA,SOD,T—AOC,GSH,CAT的测定结果(n:12,x-i-) 注:SNK检验c2与D1组间无显着性差异.P>0.05 3讨论 老年性白内障作为最常见的白内障类型,其发生受多种 因素的影响,其中晶状体的氧化损伤是老年性白内障发病的 重要因素之一. 3.1白内障的药物治疗现状药物防治白内障由来已久,各 种治疗白内障的药物有这样或那样的缺点,比如:生物利用度 差,严重的不良反应,半衰期短等,理想的药物应该是长期有 效,不良反应小,全身或局部应用药物应能维持晶状体的透明 性.白内障作为一种已经明确为多因素所致疾病,可能有效 的方法仍应是联合用药. 3.2番茄红素和仅一生育酚的生理学功能及治疗过氧化氢诱 导晶状体混浊的可行性番茄红素是使成熟番茄和番茄产品 呈现深红色的色素,是膳食中的一种重要的类胡萝卜素,番茄 红素的化学结构是由11个共轭双键和2个非共轭碳碳双键 组成的非环状平面多共轭双键结构,分子式CH,对分子量 为536.85,为脂溶性,没有B-芷香酮环结构,因此没有 维生素A前体的作用.番茄红素通过抗氧化作用,调控细胞 增殖,降解胆固醇,增强机体免疫力来保护机体,预防疾病的 发生.番茄红素的抗氧化机制是与自由基反应的结果.可以 保护机体细胞的DNA免受氧化损伤. 仅一生育酚由羟化的色原烷醇环和含16碳的植醇侧链组 成,仅一生育酚的色原烷醇环位于生物膜的极性面.环上的羟基 易失去电子或H被氧化,这个结构特性是仅一生育酚能消除 自由基的关键.释出的H提供给自由基,使之成为稳定的 分子结构,自身则被氧化成稳定的仅.生育酚自由基及生育 .醌,从而阻断脂质过氧化链,保护了生物膜上的多不饱和脂肪 酸.因而可防止细胞过氧化损伤,从而保护生物膜和亚细胞 结构的完整.仅一生育酚是重要的生物膜脂质过氧化反应链断 裂抗氧化剂,这使其更便于与其他抗氧化剂协同作用,从而抑 制自由基的快速反应过程,保护了细胞膜作为渗透性屏障 作用. 根据本研究结果,在过氧化氢存在的条件下,晶状体的 SOD值为(4.8473-i-0.6821),CAT值为(0.1476-i-0.010 3),两者的活性均明显降低.随着番茄红素浓度增加(1,5 ~mol/L),晶状体的SOD值,CAT值增加.证明了体外补充番 茄红素或与仅一生育酚联合作用有明显提高晶状体抗氧化酶 系统的活性,增加了抗氧化酶的保护作用机制,番茄红素通过 增强机体的抗氧化酶活性来提高机体的抗氧化能力.番茄红 素组或与仅一生育酚联合用药组的GSH水平,T.AOC水平均明 显高于氧化损伤组,表明在这两种药物存在的条件下,可以增 强晶状体抗氧化能力,防止晶状体混浊的发生.在过氧化氢 存在条件下GSH明显耗竭,MDA的明显增高都增加了晶状 体上皮细胞膜的损伤以及由此而导致的晶状体的混浊.晶状 体SOD,CAT活性,GSH,T-AOC水平及MDA含量测定均显示 防止晶状体混浊的作用LY5~mol/L联合仅一生育酚效果更为 明显,联合应用仅一生育酚时,晶状体的混浊度较单独应用番 茄红素时明显减轻,表明联合用药优于单独用药,增加番茄红 素剂量达10~mol/L时,抑制过氧化氢诱导晶状体混浊功能 反而降低,这可能与高浓度番茄红素反而失去保护氧化损伤 有关.c2组与D1组间无明显差异,表明仅一生育酚可以增 强番茄红素的抗氧化能力,使低浓度的番茄红素发挥更好的 抗氧化作用,番茄红素可以使仅一生育酚再生,更有效的发挥 中国实用医药2008年8月第3卷第24期ChinaPracMed,Aug2008,Vo1.3,No.24 超声联合CA125在预测早期流产中的价值 梁秋峰王海琳雷凯荣 【摘要】目的探讨卵黄囊的声像图特点及CA125的变化规律在预测早期流产中的价值.方法 使用超声对早孕孕妇卵黄囊的形态,大小等特点进行观察,同时采用化学发光法对其CA125水平进行监 测.结果难免流产组卵黄囊的测量值与正常早孕组相比,差异有显着性(P<0.05);难免流产组 CA125值明显高于正常早孕组及继续妊娠组(P<0.01);且难免流产组卵黄囊大小与CA125值呈负相关 (r=-0.695,P<0.05),卵黄囊预测流产的敏感性,特异性分别为80.76%,89.47%;CA125预测流产的 敏感性,特异性分别为92.30%,88.89%;两者联合检测预测流产的敏感性,特异性分别为98.51%, 79.21%.结论卵黄囊和CA125与早期流产的发生,发展及预后密切相关;联合测定卵黄囊和CA125 有助于早期流产的诊断. 【关键词】早期流产;卵黄囊;CA125 ThevalueofultrasonographyandCA125inpredictingearlyabortionLIANGQiu-feng,WANGHal—lin, LEIKai—rong.TheFirstHospitalofLanzhouUniversity,Lanzhou73DDDD,China 【Abstract】 ObjectiveToinvestigatecharacteristicofgravidas’yolksacandthelevelofCA125inearly abortion.MethodsToobservethecharacteristic(morphology,magnitude,etc.)ofyolksacbytransabdominal sonography(TAS),meanwhile,monitorthelevelofserumCA125byehemilumineseentimmunoassay(CLIA)of gravidas.ResultsThesizeofyolksacintheinevitableabortionwhichisclearlydifferentfromnormalpregnan— cy(P<0.05);ThelevelofserumCA125ofgravidaswithinevitableabortionissignificantlyhigherthanthatof no13qtlalandevitableabortiongravidas(P<0.01):It’snegativecorrelationbetweenthesizeofyolksacandthe levelofserumcancerembryoantigen(r=-0.695P<0.05).Thesensitivityandthespecificityseparately is80.76%and89.47%oftheYSinpredictingEA;Thesensitivityandthespecificityseparatelyis92.30%and 88.89%ofTheCA125inpredictingEA:Thesensitivityandthespecificityis9 8.51%and79.21%ofunitedthe both.ConclusionTheYSandCA125haveaclosecorrelation(takeplace,deve lopmentandprognosis)with EA;determinationtheyolksacandCA125conducetodiagnosisofearlyaborti on. 【Keywords】Earlyabortion;Yolksac;CA125 早期流产(Threatenedabortion)是产科的常见病,多发病. 妊娠早期流产率为15%,随后迅速降低,至16周后仅为 1%….目前早期流产的预测常以检测血清HCG水平来判 断,但其缺乏特异性_2J.有研究发现J:早孕孕妇妊娠囊中 最早出现的物一卵黄囊,它的存在与否,形态及大小变化 在判断早期流产的预后方面有重要的临床意义.此外,国外 有研究证实:CA125的水平变化有助于判断早期流产结局, 作者单位:730000兰州大学第一医院妇产科(梁秋峰王海 琳),超声科(雷凯荣) ? 5? 但CA125达到何种程度即发生流产,国内外均无相关报道. 本研究旨在找到早期流产时卵黄囊的超声声像图特点和血清 CA125值的变化规律,为早期流产的判断提供理论依据,从而 科学避免流产的发生. 1资料与方法 1.1研究对象选取2006年8月至2007年8月来就诊的, 年龄21—38岁(平均27岁)的单胎初产早孕(孕龄5,12 周)孕妇共77例. 清除自由基的作用.国内于文利等研究发现该复合抗氧 化剂具有协同清除自由基的作用.Mariella等通过研究不 同的抗氧化剂联合番茄红素对于人前列腺癌DU一145细胞生 长的抑制作用,得出只有在生育酚存在的条件下可以增强番 茄红素的抗氧化作用,可能的机制为生育酚和番茄红素分别 影响不同的信号传导途径而导致该复合物的作用增强. 关于番茄红素联合一生育酚抑制晶状体氧化损伤的具 体作用机制尚不清楚,尚需通过进一步的实验来研究其复合 物的具体抗氧化机制. 本研究结果显示,应用番茄红素或与一生育酚联合应用 可以有效抑制过氧化氢诱导的晶状体混浊,有望成为治疗或 预防氧化性白内障的有效药物. 参考文献 [1]张士元.我国白内障的流行病学调查资料分析.中华眼科杂志, 1999,35(5):336-339. 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