化学发光法与连苯三酚自氧化法消除O2—自由基可靠性的比较

化学发光法与连苯三酚自氧化法消除O2—自由基可靠性的比较 化学发光法与连苯三酚自氧化法消除O2—自由基可靠性的比较-权威资料 本文档格式为WORD,若不是word文档,则说明不是原文档。 最新最全的 学术论文 期刊文献 年终总结 年终报告 个人总结 述职报告 实习报告 单位总结 【摘 要】本实验利用化学发光法和连苯三酚自氧化法测试了五种抗氧化剂对O2?自由基的消除作用，结果表明同种抗氧剂相同浓度下不同反应体系对O2?自由基消除率相差很大，比较了不同反应体系的吸收光谱说明两法测试结果的区别，对化学发光法与连苯三酚自氧化法的可靠性进行了对比。 【关键词】化学发光法;连苯三酚自氧化法;氧自由基 1.引言 近年来，药学及其有关学科的迅速发展使药学的研究领域不断扩大且日益广阔和繁荣。在现代药学的各个学科中，临床医学和生命化学领域中的自由基理论的研究及其在医学科学中的应用，是药学新领域研究的重要发展。 随着年龄的增长，生物体内产生抗氧剂和抗氧化酶能力逐渐下降。自由基代谢平衡紊乱，过多的自由基会通过各种作用使机体受损而导致各种疾病或加快衰老。因此，如何有效清除自由基就显得尤为重要，而O2?自由基是其中常见的一种。目前，国内外对消除O2?自由基的测定方法很多，主要有:连苯三酚自氧化法、化学发光法、肾上腺素法、极谱电极法等，本文主要通过五种抗氧化剂来研究化学发光法与连苯三酚自氧化法对O2?自由基消除作用，从而比较两法的可靠性。 2.实验部分 2.1 试剂与仪器 试剂:茶多酚、苯甲酸、芦丁、芸香叶苷、槲皮素、连苯三酚、NaCO3、NaHCO3、HCl、Tris(三羟基甲基氨基甲烷)、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，以上均为国产分析纯;鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼)为德国Merck-Schuchrdt公司产品;所用水均为二蒸水。 仪器:化学发光仪、pH数字酸度计、UV-754紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)。 2.2 溶液的配制 2.2.1 配制苯多酚等溶液 (1)称取一定量的槲皮素、苯甲酸、芦丁、芸香叶苷等，用乙醇水溶液(体积比为4:6)溶解定容，配制浓度分别至:100 mg/25 mL、100 mg/10 mL、20 mg/10 mL、50 mg/10 mL;称取一定量的茶多酚，用水溶解定容至浓度为100 mg/10 mL。 (2)缓冲液的配制 称取NaCO3 5.3g、NaHCO3 4.2 g，用二蒸水分别定容至500 mL，按两者体积比6:4配制成500 mL的溶液，用pH计调整至pH=10.16。 称取Tris 0.6057 g，EDTA 0.149 g，用二蒸水分别定容至500 mL，再取0.1 mol/L HCl 22.9 mL，混合均匀后，用用二蒸水定容至100 mL，调整pH=8.2。 (3)5 mmol/L鲁米诺溶液的配制 称取0.0442 g鲁米诺，加入少量三乙胺，再用pH=10.16 NaCO3 -NaHCO3缓冲液定容至50 mL，放置三天后备用。 (4)10 mmol/L HCl的配制 先量取浓HCl 5 mL稀释至100 mL，再移取3.33 mL定容至200 mL即可。 (5)6 mmol/L连苯三酚溶液的配制 称取连苯三酚0.0378 g，用10 mmol/L HCl定容至50 mL。 3.实验方法 3.1化学发光法 先启动发光仪预热两小时，在测定管中加入鲁米诺溶液1.6 mL，加入不同溶液的待测液0.04 mL，再加入连苯三酚0.2 mL，混合反应，待10s后，测定器5 s内发生强度的平均值，求出抑制率。 3.2连苯三酚自氧化法 (1)自氧化法曲线的测定 按下表要求加样，迅速摇匀，立即加入比色皿中，在420 nm处测其吸光度，每分钟一次，共测5分钟，平行三次，求出自氧化曲线。 (2)抗氧化性的测定 按下表加样，调整X的数值，以调节抗氧剂的量，测定不同浓度下的曲线，求出他们的斜率。 (3)抗氧化剂抑制率的测定 抑制率=(A0-AS)/A0% 其中A0为自氧化曲线斜率，AS为加抗氧化剂后的曲线斜率。 4.实验结果 4.1 抗氧化剂对O2-的消除作用 4.1.1 茶多酚对O2-的消除作用 化学发光法 连苯三酚自氧化法 4.1.2 苯甲酸对O2-的消除作用 化学发光法 连苯三酚自氧化法 4.1.3芦丁对O2-的消除作用 化学发光法 连苯三酚自氧化法 4.1.4芸香叶对O2-的消除作用 化学发光法 连苯三酚自氧化法 4.1.5槲皮素对O2-的消除作用 化学发光法 连苯三酚自氧化法 5.讨论 5.1各物质对O2-的最大消除率的比较 化学发光法是应用自氧化反应产生的O2-，而O2-与化学发光剂鲁米诺反应产生电子激光态的中间产物，当其返回基态时即发光，当抗氧化物存在时由于歧化反应而发光。自氧化法是由于自氧化反应属于游离基链反应，自氧化过程产生O2-，抗氧化物通过消除O2-降低了自氧化反应的总速度，其氧化产物在一定的波长处表现特征吸收，基于上述机理，样品的颜色对化学发光法无影响，而对自氧化影响较大，因为颜色越深，透过率越小，故其所测的最大消除率较小。 5.2 各物质对O2-消除作用的CI50比较 CI50是指抗氧化物对O2-自由基消除率达50%时所需抗氧物的量，通常用它来比较抗氧化物对自由基消除能力的大小，其值越小，抗氧化能力越强。表6为各氧化物的CI50。 可见，化学发光法能较好的测出各物质的CI50值，而连苯三酚自氧化法对有些物质则不能测出，为了更好的比较两法的差别，我们又做了它们的吸光光谱。 5.3 误差及造成误差的原因 两种方法除去系统误差的影响外，偶然误差的影响不可忽视，现举一例说明如下: 在化学发光法中以茶多酚的消除率的50%为例，空白值为2500，当加入样品后其值为1250，若读数偏差为50时，其误差率为2%。 在分光光度计中，自氧化速率为0.0139 min-1，加入样品后其读数为0.00695，如读数偏差为0.00095，其误差率可达7%。 由此可见，偶然误差对分光光度法的影响较化学发光法大的多，从而使其可靠性有所降低。 6.结论 综合上述实验不难看出:首先最大消除率方面，化学发光法所测值比连苯三酚高的多，其次在求CI50值时，前者能准确测出各物质的CI50值，而后者则做不到，最后去除其他 外界因素对两法的影响，偶然误差的存在对前者的影响要小的多。 由此可见，在测定抗氧化剂对自由基的消除作用时，化学发光法比连苯三酚自氧化法更可靠。 参考文献: [1] 陈执中，超氧化物歧化酶和自由基的测定及其在医药科学研究中的应用进展:上海药品检验所. [2] 邹国林，桂兰芬，钟晓凌，朱汝潘，一种测定方法:武汉大学生物系. [3] 袁勤生，陈洁，周刚宏，超氧化物歧化酶测活方法比较:华东理工大学. [4] 静天玉，赵晓瑜，用终止剂改进超氧化物歧化酶连苯三酚测活法:河北大学生物技术中心. [5] 邓碧玉，袁勤生，李文杰，改良的连苯三酚自氧化法测定超氧化物测定氧化物歧化酶活性的方法:华东化工学院生化组. 阅读相关文档:浅析数控高速切削加工 浅谈互动空间在博物馆展示空间中的应用 修文县把七水库除险加固 基于单片机的交流串激电机速度控制 浅谈华南地区城市污水低温生化处理技术 浅谈RTK&infill测量模式的应用 PLC技术在公厕中应用 虚拟数控机床动态建模技术研究 化学需氧量测定中应注意的几个细节问题 关注大气污染 减少PM2.5排放 浅析进线备自投装置 浅析风电场集电线路架空导线的选型 模糊多目标动态规划法在确定水库年末蓄水位中的应用 配筋砌体工程中几个细节问题的分析 分析双碑嘉陵江大桥挖孔桩施工技术 关于地暖系统设计 新疆广汇白石湖露天矿钢结构输煤栈桥设计浅析 *本文若侵犯了您的权益，请留言。我将尽快处理，多谢。* 最新最全【学术论文】【总结报告】 【演讲致辞】【领导讲话】 【】 【党建材料】 【常用】【分析报告】 【应用文档】 免费阅读下载