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组织病理切片的制作过程

2017-09-17 3页 doc 14KB 18阅读

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组织病理切片的制作过程组织病理切片的制作过程 组织病理切片的制作过程 1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学,科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切 .取材 除标本,活检标本,尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法.取材者需要掌握解剖学,组织学,病理学的基 本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材 料,不然,无法达到教学,科研和临床诊断的目的,具体要求如下: (1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态 学结构...
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程 组织病理切片的制作过程 1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学,科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切 .取材 除标本,活检标本,尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法.取材者需要掌握解剖学,组织学,病理学的基 本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材 料,不然,无法达到教学,科研和临床诊断的目的,具体要求如下: (1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态 学结构. (2)组织块的大小:所取组织块较理想的体积为 2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部, 但根据制片材料和目的不同, 组织块的较理想体积也不同, 如制作病理外检, 科研切片, 其组织块可以薄取 0.1,0.2cm 即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取 0.3 ,0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学 切片. (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动.夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使 组织,细胞变形. (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位,性质的不同,根据要求规范化取 材. (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构, 决定其切面的走向. 纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键, 如长管状器官以横切为好. (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液,污物,粘液,食物,粪便等,可用水冲洗干净后再放入固定液中. (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形.为此可将组织展平, 以尽可能维持原形. 2.固定 . (1)小块组织固定法:这是最常用的方法,从人体或动物体取下的小块组织,须立即置入液态固定剂中进行固定, 通常,标本与固定液的比例为 1:4,20,但组织块不宜过大过厚,否则固定液不能迅速渗透.故取组织块的大小一般 为 2.0cm×2.0cm×0.3cm. (2)注射,灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部,或需要对整个脏器或整个动物体进行 固定.这时宜采用注射固定或灌注固定法.将固定液注入血管,经血管分支到达整个组织和全身,从而得到充分的 固定. (3)蒸汽固定法:比较小而厚的标本,可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法.如血液涂片,则应在血片未干燥前采用锇 酸或甲醛蒸汽接触固定. 最常用的固定液有 10%甲醛固定液和 95%乙醇固定液. 1 3.脱水透明标本经过固定和冲洗后,组织中含有较多的水分,必须将组织块内的水分置换出来,这一过程叫做 .脱水透明 脱水.无论是用石蜡切片,还是用火棉胶切片,都必须除去组织中所含水分,因含水组织与石蜡,火棉胶等包埋材 料不相容,常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇. 脱水的步骤是:80%,90%,95%,100%各种浓度乙醇 2 小时,此过程可用脱水机自控完成. 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂,但因其脱水能力很强,对组织有剧烈收缩作用,在制作科研,教学切片 时一般不用该试剂.因乙醇,丙酮等不溶于石蜡,还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明.常用的透明 剂有二甲苯,三氯甲烷,水杨酸甲酯等. 4.浸蜡,包埋 .浸蜡, (1)使石蜡浸入组织中,取代组织中含有的透明剂. (2)包埋:将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中,石蜡凝固后,组织即被包在其中,称蜡块,此过程称为包埋. 5.切片和贴片 . (1)修整蜡块:可视其组织的大小,在组织边缘约 0.1,0.2cm 处,切去余蜡部分,否则易造成组织皱缩不平. (2)准备好切片用具:切片刀,毛笔,眼科镊子(弯),漂烘温控仪 (3)安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上. (4)安装切片刀:将切片刀安装在切片机的刀台上,把刀台上的紧固螺丝旋紧,使切片时不产生振动,能保持一 定的切片厚度. (5)切片的厚度:切片机的厚度调节器上刻有 0,50m 或 0,25m,可任意选择其厚度,石蜡切片的厚度一般在 4,6m. (6)切片 (7)铺片:用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在 40,45?的水面上,借水的张力和水的温度,将略皱的蜡带自然展平. (8)贴片,烘片:待切片在恒温水面上充分展平后,将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水,置入 60, 65?恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片 15,30 分钟,脱去溶化组织间隙的石蜡. 6.染色和封片常用的染色方法是苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin)染色法,简称 H.E 染色法.这种方法对任何 .染色和封片 固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用.苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色, 如细胞核中的染色质等;伊红是一种酸性染料,可使组织中的嗜酸性物质染成红色,如多数细胞的胞质,核仁等在 H.E 染色的切片中均呈红色. H.E 染色程序如下:脱蜡,脱苯,复水,染色,脱水,透明,封固 常规苏木素染色中的对比染色是用伊红,近年来在英,美国家的一些实验室则采用焰红(phloxine),此外也有用桔黄 G (OrangeG),比布里希猩红(Biebrich scarlet),波尔多红(Bordeaux red)等作为对比染色.伊红为染胞质,胶原纤维, 肌纤维,嗜酸性颗粒等常用的染料. 2 ass="bt ui-btn ui-btn-26-light">预览复制
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