龙芽楤木皂甙对急性乙醇性肝损伤小鼠的保护作用

龙芽楤木皂甙对急性乙醇性肝损伤小鼠的保护作用 龙芽楤木皂甙对急性乙醇性肝损伤小鼠的 保护作用 中国临床医学2010年12月第17卷第6期ChineseJournalofClinicalMedicine,2010.Vo1.17,No.6847 论着 龙芽木皂甙对急性乙醇性肝损伤小鼠的保护作用 杜施霖张亚平姚晨玲薛渊栾骁樊帆童朝阳 (复旦大学附属中山医院,上海200032) 摘要目的:探讨龙芽槐木皂苷(As)对乙醇所致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法:采用乙醇灌胃法制备小鼠急性 乙醇性肝损伤模型.50只雄性昆明小鼠随机分为对照组,急性乙醇性肝损伤模型组,As低剂量干预组(30mg?kg)和As 高剂量干预组(60mg?kg.).比较各组小鼠肝脏指数,血清丙氨酸氨基转移酶(AIT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性 及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px),丙二醛(MDA)含量及肝组织病理形态变化.结果:10d 时急性乙醇性肝损伤小鼠肝组织s0D,GSH—Px活性降低(P<0.01),血清ALT,AST活性,肝脏脂质及肝组织MDA含量增 加(P<O.05),与对照组比较有显着差异.给予不同剂量As后,急性乙醇性肝损伤小鼠肝组织S0D,GSH—Px活性均升高(P <0.0I),血清ALT,AST活性和肝组织MDA含量降低(P<0.05),肝脏组织病理损伤不同程度地改善.结论:As能有效地 改善肝功能,减轻脂质过氧化反应,对乙醇所致大鼠急性肝损伤具有预防作用. 关键词龙芽格木皂甙;五醇;急性肝损伤;脂质过氧化作用;预防和控制;小鼠 中图分类号R575文献标识码A ProtectiveEffectofAraiosidesoilAcuteAlcoholicLiver YAOChenlingXUEYuanLUANXiaoFANFan University,Shanghai200032,China InjuryinMiceDUShilinZHANGYaping TONGChaoyangZhongshanHospitalFudan AbstractObjective:T.observethepreventionofAralosides(As)originatedfromAraliaElataMiqSeemonacutealcoholic liverinjuryinmice.Methods:Atotalof50malemicewererandomlydividedinto4groups:controlgroup(GroupN),model group(GroupM),Aslowdosetreatedgroup(GroupL)andAshighdosetreatedgroup(GroupH).Onday10allmicewere sacrificed.Iiverpathologicalchangeswereexaminedwiththeactivitiesofserumalanineaminotranferease(ALT),aspartate aminotranferease(AST),theactivitiesofliversuperoxidedismutase(SOD),glutathioneperoxidase(GSH—Px)andtheleve1of livermalondia— ldehyde(MDA).Results:Attheendof10days,theactivitiesofserumAIT,ASTandtheleve1ofliverMDA weresignificantlyincreasedinmodelgroupcomparedwiththoseofcontrolgroup(P%0.05).TheactivitiesofSODandGSH Pxwerehighlydecreasedinmodelgroupcomparedwiththoseofcontrolgroup(P<0.01).AftergivendifferentdoseofAs, theactivitiesofserumALT,ASTandthelevelofliverMDAweresignificantlydecreasedcomparedwiththoseofmode1group (P<O.05).Meanwhile,theactivitiesofS()DandGSH— Pxwerehighlyincreasedcomparedwiththoseofmodelgroup(P< 0.01).ThereweretypicalliverpathologicalchangesobservedinthetwoAsgroups.Conclusions:Ascaneffectivelypreventa— cutealcoholicliverinjury,whichmaybeduetoitseffectsinpreventionoflipidperoxidation. KeyWordsAralosides;Alcohol;Acuteliverinjury;Lipidperoxidation;Preventionandcontrol;Mouse 龙芽梅木(AraliaElataMiqSeem)是五加科药 用植物,又名辽东梅木,刺龙芽,刺老芽,其提取物的 主要成分为皂苷(Aralosides,As).现代药理学研 究_1]明,龙芽槐木皂苷具有抗炎及抗氧化作用. 我们既往的研究发现,As能够有效地对抗慢性乙 醇摄人造成的过氧化损伤,防治乙醇性肝病.本研 究通过观察As对乙醇诱导的急性肝损伤小鼠肝组 织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH—Px),丙二醛(MDA)以及病理变化的影响,评 价其对小鼠急性乙醇性肝损伤的预防作用. 1资料与方法 1.1药品,动物及试剂As由龙芽梅木根茎提取 总皂甙.SPF级雄性昆明小鼠,平均体质量(20? 2)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司.56 基金项目:复旦大学上海医学院青年骨干启动基金 度白酒由北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒厂生 产.GSH—Px,SOD,MDA试剂盒购自南京建成生 物工程研究所. 1.2急性乙醇中毒模型的制备和动物分组5O只 小鼠随机分为5组:对照组(N组),模型组(M组), 低剂量干预组(L组)及高剂量干预组(H组),每组 10只.模型组以56度白酒按14mL?kgI1体质量 灌胃,每日1次,连续10d.干预组于乙醇灌胃前 30min分别腹腔注射不同剂量As.对照组仅用等 剂量的0.9氯化钠液代替乙醇灌胃腹腔注射.各 组小鼠实验期间均正常进食普通饲料,每日称体质 量以调整给药剂量. 1.3标本的留取各组小鼠末次给药后16h,摘眼球 取血,离心取血清,一20~C保存.取小鼠肝脏,0.9 氯化钠液冲洗,滤纸吸干,称体质量,然后分成2份, 1份以甲醛溶液固定;另一份置于一7O?冰箱保存. 848中国临床医学2010年12月第17卷第6期 1.4肝脏指数测定按照公式:脏器指数(%)=脏 器质量/体质量×100. 1.5生化指标测定采用由OlympusAU2700全 自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)及 天氡氨酸转氨酶(AST)水平.采用硫代巴比妥酸 比色法测定肝脏MDA含量;采用亚硝酸盐法测定 肝脏SOD活性;采用二硫代对硝基苯甲酸显色法测 定肝脏GSH—Px活性.操作按照试剂盒要求进行. 1.6病理组织学检查将甲醛固定的肝脏标本常 规脱水,石碚包埋,切片,HE染色,光镜下观察病理 变化. 1.7统计学分析采用SPSS11.0软件进行统计 计量数据均以均数?差表示,2组间比 分析. 较用t检验,P<O.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1一般情况实验期问模型组小鼠精神萎靡,体 重增长缓慢,毛发光泽度差.As干预组小鼠醒酒后 行动敏捷,毛发光泽度较好,体质量增长较快. 2.2血清ALT,AST活性及肝脏指数见表 表1各组大鼠血清ALT,AST水平及肝脏指数 变化(士s.n=10) 组别AIT(U?L)AST(U?L一')肝脏指数 对照组 模型组 As低剂量组 As高剂量组 21.3?1.316.5?1.52.01?0.24 151.6?12.4123.6?10.22.56?0.22# 92.6?9.8?75. 8?8.3#?2.24?0.19#? 71.3?7.2?54. 6?5.1?2.20?0.17#? 注:与对照组相比,P<0.05;与模型组相比,P<0.05;与低 剂量组相比,P<i0.01 2.3肝组织SOD,GSH_Px及MDA活性见表2. 表2各组小鼠肝组织S0D,GSH-Px及MDA 含量变化(士s,H=10) SODMDAGSHPx 组别(u .nlg1pr)(nm.1.mg1pr)(U.mgipr) 注:与对照组相比,P<().05;与模型组相比,P<0.05;与低 剂量组相比,P<O.05 2.4肝脏病理组织学变化对照组小鼠肝脏被膜 光滑,呈红褐色,边缘锐利,质地柔软.模型组小鼠 肝脏弥漫性肿大,边缘稍钝,有油腻感,色泽较黯淡, 质地稍硬.As干预组小鼠肝脏和对照组比较无明 显差别.HE染色显示,对照组小鼠肝小叶结构清 晰,肝细胞索排列整齐,呈放射状,胞质分布均匀. 模型组小鼠肝小叶界限不清,肝细胞索排列紊乱,胞 质出现大小不等空泡,部分呈气球样变,可见炎症细 胞浸润.As干预组肝小叶周边部少数肝细胞轻度 水肿及轻微脂肪变性,炎症细胞浸润不明显,肝脂肪 变性和炎症程度轻于模型组,不同剂量组间无明显 差异. 3讨论 血清转氨酶活性升高是肝细胞受损的敏感指 标.机体摄人大量乙醇,可导致肝细胞膜通透性增 加,细胞内转氨酶释放入血,使血中转氨酶活性升 高.本研究结果显示,与正常组相比,急性乙醇性肝 损伤小鼠血清AST及ALT活性明显升高.给予 As后,血清AST及ALT活性均明显降低,而且 ALT及AST的降低程度与剂量成正相关,As 可以通过稳定肝细胞膜来减轻肝细胞损伤. 乙醇在肝脏代谢过程中产生大量自由基,可导 致肝细胞的变性,坏死和炎症细胞浸润.MDA是 脂质过氧化反应的终产物,与蛋白质或脂类聚合,交 联形成无活性的脂褐素堆积在溶酶体中,破坏细胞 膜结构,引起细胞的衰老和死亡,因此MDA既能反 映机体内氧化反应水平,也能作为机体损伤的损害 因子.本研究的结果显示,与正常组相比,急性乙醇 性肝损伤小鼠MDA含量明显升高;给予As后,肝 组织中MDA含量明显减少,说明As可降低急性乙 醇性肝损伤小鼠的脂质过氧化产物的含量,但是As 不同剂量组之间无显着差异. 体内存在多种对抗活性氧(ROs)的保护系统, 在细胞的损伤和凋亡过程中起着重要作用_4]. SOD是体内重要的抗氧化酶之一,乙醇的摄入使其 活性减弱,引起不饱和脂肪酸氧化,使DNA,蛋白质 和酶等的结构改变,从而加速肝脏损伤.本研究结 果显示,与正常组相比,急性乙醇性肝损伤小鼠 SOD,GSH—Px活性明显降低;给予As后,肝脏组 织中SOD,GSH—Px活性均明显增强,而且其活性 程度与剂量成正相关,说明As可以清除自由基及 降低氧化应激水平. 综上所述,As通过减少脂质过氧化产物MDA 的含量及提高肝组织中SOD,GSH—Px活性,使活 性氧的生成和清除重新获得平衡,进而改善肝功能, 减轻肝细胞的脂肪堆积,可以有效防治乙醇对肝脏 的损伤. 参考文献 1周重楚,孙晓波,刘威.龙芽葱木总甙的抗炎作用[J].中国药理 学与毒理学杂志,1991,5(1):30—33. 2周重楚,师海波,李文亭.龙芽葱木总甙的抗缺氧作用EJ3.中草 药,1991,22(3):114—116. 3杜施霖,迟宝荣.龙芽葱木皂苷对大鼠酒精性肝病的防治作用 [J].吉林大学(医学版),2005,31(1):64—67. 4WuD.CederbaumAI.Oxidativestressandalcoholicliverdis, easeEJ].SeminLiverDis,2009,29(2):I41—154. 5CederbaumAI,LuY,WuD.Roleofoxidativestressina]co, hol—inducedliverinjury[J].ArchToxicol,2009,83(6):519一 48