【doc】活力素胶囊质量标准的研究

【doc】活力素胶囊质量标准的研究 活力素胶囊质量标准的研究 医药导报2004年6月第23卷第6期?4ll? ? 药品质量控制? 活力素胶囊质量标准的研究* 葛皓玲,阮金兰,钟家平 (1.华中科技大学同济医学院药学院,武汉430030;2.武汉莱奇尔中药现代化有限公司,430030) [摘要]目的:研究活力素胶囊的质量标准.方法:采用薄层色谱法对活力素胶囊进行定性鉴别;采用高效液相 色谱法(HPLC)对活力素中人参皂苷Re的含量进行测定.结果:人参皂苷Re的线性范围0.315,4.725,平均回收率 99.84%,RSD=0.73%.结论:该方法可行,重复性好,可作为活力素胶囊质量标准的重要指标. [关键词]活力素胶囊;人参皂苷;质量标准 [中图分类号]R286;R927.2[文献标识码]A[文章编号]1004-0781(2004)06-0411-03 AStudyoftheQuantyStandardofHuolisuCapsules GEHao—ling,RUANJin—lan,ZHONGJia—ping2(1CollegeofPharmacy ,Ton~iMedicalCollege,Huazhong UniversityofScienceandTechnology,凡 430030,China;2.NaturalTraditionalChineseMedicine ModernizationCo.Ltd,凡430030,China) B限 ACTObjective:Tostudythequalitystandardofhuolisucapsules.Methods:nlayerchromatography(TLC)was usedforthequalitativediscriminationofhuolisucapsulesandthecontentofginsenosideReinthecapsulesdeterminedwithhigh performanceliquidchromatography(HPLC).Results:ThehnearrangeofginsenosideRewas0.315,4.725andtheaverage recoveryrate,99,84%,RSD=0.73%.0m曲威 ?:emethodWasshowntobefeasible,withgoodreproducibility,andCanbe usedfortheeffectivequalitycontrolofhuolisucapsules. KEYWORDSHuolisucapsule;GinsenosideRe;Qualitystandard (Note:HuolisucapsuleWascomposedofradixgin~ngmbra,radixpolygonimultiflori,fructusschisandraeehinensisetc……) 活力素胶囊是华中科技大学同济医学院附属同济 医院中医科在多年临床应用经验的基础上,结合 国内外文献资料组方而成.经l临床应用证明,该方具 有补虚扶正,益气养阴,调和气血之功效,对因久虚导 致的慢性疲劳有很好的疗效该方由红参,何首乌,五 味子,怀牛膝,麦冬等组成,主治慢性疲劳综合征 (CFS).为有效控制其质量,笔者借鉴《中华人民共和 国药典}(2ooo年版)人参,何首乌,五味子项下的鉴别 和含量测定方法?],参考有关文献,笔者采用薄层色谱 法对活力素胶囊进行定性鉴别,采用高效液相色谱法 (HPLE)对其所含的人参皂苷Re进行含量测定. 1仪器与试剂 1.1仪器HP1100液相色谱仪;756分光光度仪(上 海精密仪器有限公司);超声波仪(Cole.pamer InstrmnentCompany);电子天平(MettlerAE160型, Switzerland);旋转蒸发器(Buchi110,Switzerland);微量 进样器(上海高欣玻璃仪器厂). 1.2试剂红参,何首乌,五味子药材(购自河北省 [收稿日期]2003—07—04[修回日期]2003—07—10 [基金项目]武汉市科技局科技攻关项目(基金编号: 2002780) [作者简介]葛皓玲(1980一),女,湖北武汉人,在读硕 士,主要从事天然药物活性成分研究. 安国市长安药材有限公司,经本院生药系鉴定为正 品);人参皂苷Re(中国药品生物制品研究所,批号 754—200115);乙腈(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开 发中心);甲醇(色谱纯,天津科密欧化学试剂开发中 心);正丁醇(分析醇,武汉市研口区试验试剂厂);其他 试剂均为分析纯;薄层层析用硅胶预制板(青岛海洋化 工厂). 2定性鉴别 2.1红参的定性鉴别取活力素胶囊内容物1g,加 氯仿40mL,加热回流1h,弃去氯仿液,药渣挥干氯 仿,加水0.5mL拌匀润湿后,加水饱和的正丁醇100 mL超声处理30min,过滤,过滤液加3倍量的氨试液. 摇匀,放置分层,取上层液蒸干,残渣加甲醇10mL溶 解,定容,作为供试品溶液.并取缺红参的阴性提取物 1g,同法制备,得阴性对照品溶液.取人身皂苷Rb, Re及Rg对照品,加甲醇制成浓度均为2rng?mL的混 合溶液,作对照品溶液.照薄层色谱法实验,吸取对照 品溶液,阴性对照品溶液,供试品溶液各2/_tL,分别点 于同一硅胶G薄层板(厚500pan)上,以氯仿.醋酸乙酯 一 甲醇一水(15:40:22:l0)在温度<10?放置的下层溶液 为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液. 在105oC加热至斑点显色清晰,分别置日光及紫外光 灯(365啪)下检视.供试品色谱中,在与对照品相应 ?4l2?HeraldofMedicineVo1.23No.1June2004 的位置上,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点;阴性对 照品在相应的位置没有斑点.. 2.2何首乌的定性鉴别分别取制何首乌,活力素胶 囊内容物各1g,加乙醇50mL,加热回流1h,滤过,滤 液浓缩至3mL,作为对照品和供试品溶液.并取缺何 首乌的阴性提取物1g,同法制备,得阴性对照品溶液. 照薄层色谱法(2000年版《中华人民共和国药典》一部 附录?B)实验,吸取对照品溶液,阴性对照品溶液,样 品溶液各2血,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶H薄层板(厚500tan)上,以苯一乙醇(2:1) 为展开剂,展至约4cm,取出,晾干,再以苯一乙醇(4:1 为展开剂,展至约7cm,取出,晾干,置紫外灯(365DAD) 下检视.供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,分 别显相同颜色荧光斑点;再喷以磷钼酸硫酸溶液(取磷 钼酸2g,加水20mL使溶解,再缓缓加入硫酸30mL, 摇匀),稍加热,立即置紫外灯(365nin)下检视供试品 色谱中,在与对照品相应的位置上,分别显相同颜色斑 点,阴性对照品在相应的位置没有斑点…. 2.3五味子的定性鉴别分别取五味子,活力素胶囊 内容物各1g,加氯仿20mL,加热回流30min,滤过,滤 液蒸干,残渣加氯仿1mL使溶解,作对照品和样品溶 液.并取缺五味子的阴性提取物1g,同法制备,得阴 性对照品溶液.照薄层色谱法(2000年版《中华人民 共和国药典》一部附录?B)实验,吸取对照品溶液,阴 性对照品溶液,样品溶液各2btL,分别点于同一硅胶 GF254,以石油醚(30,60?)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1) 的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(254 am)下检视.供试品色谱中,在与对照品相应的位置 上,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点;阴性对照品在 相应的位置没有斑点…. 3含量测定 3.1色谱条件色谱柱:agilentZORBAXEclipseXDB. cl8色谱柱(4.6mln×250.0mln,5tan);流动相:乙腈一水 (1:3);检测波长:203nin;流速:1.0mL?rnin,;柱温:室 温.理论塔板数以人参皂苷Re计,应不低于4500. 3.2测定波长的选择取人参皂苷Re标准品12.6 lng加甲醇溶解并定容至l0mL,摇匀,精密量取5mL 稀释至l0mL,配制成0.63rng?mL的溶液.取适量于 紫外分光光度计中扫描,人参皂苷Re在203nin处有 最大吸收,故选用203nin作检测波长. 3.3线性关系考察精密称取减压干燥至恒重的人 参皂苷Re标准品6.3rng加甲醇溶解并定容至l0mL, 摇匀,精密量取5mL,置l0mL容量瓶中,加甲醇至刻 度摇匀.配成0.315rng?mL-的标准品溶液.精密吸 取1,2,5,10,15L进样,以人参皂苷Re的含量为横坐 标,以测得的峰面积为纵坐标,进行线性回归,线性方 程为Y=326696X+14878,r=0.9996,在0.3l5, 4.725g范围内呈线性关系. 3.4供试品溶液的制备取胶囊内容物10g,研细, 精密称定约5g,置于圆底烧瓶中用50mL氯仿回流3 h,放冷,过滤出氯仿,弃去氯仿,挥干药渣上的氯仿. 药渣加入100mL水饱和的正丁醇,超声提取2h,过 滤,滤液加3倍量的氨试液,摇匀,放置分层,取上层液 蒸干,残渣用甲醇溶解并于l0mL容量瓶中定容.用 0.45tan微孔滤膜滤过,即得. 3.5精密度试验精密吸取标准品溶液l0止,重复 进样5次,测定人参皂苷Re峰面积,RSD=1.82% (n=5). 3.6重复性试验取同一批号样品5份,每份约0.3 g,按供试品溶液的制备方法制备,精密吸取l0测 定人参皂苷Re的含量,RSD=1.43%(n=5). 3.7稳定性试验取同一批号样品1份,按供试品溶 液的制备方法制备,精密吸取l0止每隔2h进样一 次,共5次,测定人参皂苷Re的含量,RSD=1.51% (n=5).表明样品在10h内基本稳定. 3.8加样回收率精密称取已知人参皂苷Re的含量 的样品约1g,精密加入人参皂苷Re标准品1.25rng, 按供试品溶液的制备方法制备,按含量测定方法测定, 计算回收率,平均回收率为99.84%,RSD=0.73% (n=5). 3.9样品测定共测定l0批样品,每批平行取样3 份.结果l0批活力素胶囊中,人参皂苷Re的平均含 量为2.1951rng?g-’,最低为2.0917rng?g. 表l不同批次样品的含量测定结果 样品批次样品批次 200302092.259O2003O2l52.2154 200302l02.1826200302l62.2632 2003O2ll2.19742003O2l72.2499 2003O2l22.26972003O2l82.1328 20030I2l32.108520030I2l92.09l7 4讨论 本实验测定人参皂苷Re的含量时,先用氯仿回流 3h脱脂,将极性小的部分除掉,然后用正丁醇超声提 取样品中所含的人参皂苷Re.预实验证明正丁醇的 超声提取效率很高.过滤去残渣后,正丁醇部分加3 倍量的氨水,振荡后,取上层的正丁醇部分,可以将样 品中极性大的部分去掉.这样制备的样品所含的杂质 峰少,对样品峰无干扰. 医药导报2004年6月第23卷第6期?413? 笔者所建立的薄层色谱鉴别法,斑点清晰,重现性 好,方便,可作为该药的定性鉴别;所建立的含量测定 方法能够较快速测定活力素胶囊中人参皂苷Re的含 量,方法稳定,简单,重现性好且空白无干扰.所以该 质量标准可以作为活力素胶囊的质量控制方法. [参考文献] [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[z].北京: 化学工业出版社,2000.6,48,140,附录VIB. [2]庄向平,张来有,杨更生.含人参制剂的保健滋补口服液 中人参皂苷的测定[J].中成药,1991,13(10):10—11. 高效液相色谱法对氨苯蝶啶等7种利尿药的分离测定 蔡亚玲,CliveBarwell,阮金兰 (1.华中科技大学同济医学院药学院,武汉430030;2.universityofPortsmouth,Portsmouth,UK) [摘要]目的:建立分离测定氨苯蝶啶,阿米洛利,呋塞米,布美他尼,氯噻嗪,吲达帕胺,苄氟噻嗪等7种利尿药 的新方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),使用C8反相柱(SphensorbCss5,4.6mln×250.0rain,5,tun),流动相为不同 比例乙腈一水加0.5%甲酸,流速1.0mL?min-,检测波长280Ilnl结果:使用流动相乙腈一水(50:50)加0.5%甲酸时,7种 利尿药的色谱保留时间3.6,2O.3min.结论:该方法简便,快捷,准确, 适用于该7种利尿药的HPLC分离检测. [关键词]氨苯蝶啶;阿米洛利;呋塞米;布美他尼;氯噻嗪;吲达帕胺;苄 氟噻嗪;高效液相色谱法 [中图分类号]R983.1;R927.2[文献标识码]A[文章编 号]1004-0781(2004)06-0413—02 SeoarationofTriamtereneandOtherSixDiureticswithHPLC CAIYa-ling,CliveBarwell2,RUANJin—laJ1(1.CollegeofPharmacy,ro~ji MedicalCollege,Huazhong UniversityofScienceandTechnology,n430030,China;2.Univemi@ofPortsmouth,Portsmouth,UK) AILqrRAcrObjective:Tosetupanewmethodfortheseparationof7diuretics:triamterene,amiloride,furosemide, bumetanide,chlorothiazide,indapamideandbendroflumethiazide.Methods:InanHPLCassay,aKontronSphensorbC8s5column (4.6mln×250.0mln,5tan)Wasused.ThemobilephaseWascomposedofacetonitrileandwaterindifferentproportionswiththe additionof0.5%Vfomaicacid.theflowratebeing1.0mL’min”.111ecolumntemperatureWas20~C,withthedetection wavelengthsetat280Iln1.Results:WhentheproportionofacetonitriletowaterinthemobilephaseWas50:50V|Vwiththeaddition of0.5%/Vformicacid.theretentiontimesofthesevendiureticsinchromatographyrangedfrom3.6to20.3min.Conclusion: Themethodprovedhandy,rapid,accurateandsuitablefortheseparationofthe 7diuretics. KEYWORDSTriamterene;Amiloride;Furosemide;Bumetanide;Chloroth iazide;Indapamide;Bendroflumethiazide;HPLC 氨苯蝶啶,阿米洛利,呋塞米,布美他尼,氯噻嗪, 吲达帕胺,苄氟噻嗪等7种药物是常用的利尿药,分别 属于留钾利尿药,袢利尿药和噻嗪类利尿药,它们是国 际奥林匹克委员会禁用物质,主要是在涉及重量级别 项目(如举重,拳击等)中用于减轻运动员体重,或用于 稀释尿液充作掩盖其他禁用药物的一种手段llj.笔者 建立了高效液相色谱法(HPLC)分离测定该7种利尿 药,报道如下. 1仪器与试剂 高效液相色谱仪:KONTRONPCHPLC;LINEAR UVIS200紫外检测器;电子天平(MettlerAE160型, Switzerland).氨苯蝶啶,阿米洛利,呋塞米,布美他尼, 氯噻嗪,吲达帕胺,苄氟噻嗪(SIGMA公司);乙腈,水(高 效液相纯,SIGMA公司);甲酸(分析纯,SIGMA公司). [收稿日期]2003—09—04[修回日期]2003—10-15 [作者简介]蔡亚玲(1973一),女,湖北云梦人,硕士,讲 师,主要从事天然药物化学生物活性成分研究工作. 2色谱条件 色谱柱:SphensorbC8s5(4.6mlTl×250.0mlTl,5 tun);流动相:不同比例乙腈.水(体积比)加0.5%甲 酸;流速:1.0mL?min’.;检测波长:280nm;柱温:20o【=; 进样量:10ttL. 3供试品溶液的配制 分别精密称取7种利尿药各10Ing,置100mL容 量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度.分别精密量取 氨苯蝶啶0.1mL,阿米洛利0.05mL,呋塞米0.02mL, 布美他尼0.1mL,氯噻嗪0.21mL,?gI达帕胺0.15mL, 苄氟噻嗪0.04mL,加0.33mL流动相稀释至1mL,摇 匀,即得供试品溶溶液. 4测定结果 吸取上述溶液10,注入高相液相色谱仪,采用 不同比例的乙腈流动相[乙腈.水(50:50)加0.5%甲 酸,乙腈.水(40:50)加0.5%甲酸,乙腈.水(30:50)加 0.5%甲酸].7种利尿药的保留时间为3.6,20.3