健脾消积口服液的研制.doc

健脾消积口服液的研制.doc 目录 摘要................................................................1 英文搞要............................................................2 1. 前言.............................................................3 2. 材料与仪器........................................................4 2.1药材..........................................................4 2.2仪器..........................................................4 3. 健脾消积口服液研究方法.......................................5 3.1药材制备及设定评价标准..........................................5 3.2对健脾消积口服液有影响的各单因素考察..............................6 3.3正交设计研究健脾消积口服液的工艺................................10 4. 健脾消积口服液质量标准初步研究.................................13 论............................................................16 5. 讨 结论...............................................................19 参考文献...........................................................20 致谢...............................................................22 健脾消积口服液的研制 摘要:目的 分析处方的的合理性与观察理气健脾汤临床治疗功能性消化不良患者疗效和安全性方法:利用百度查找处方的作用，再取体质量适合的一定数量的小白鼠随机分分组。结果:健脾消积口服液对利血平所致的“脾虚”症状有明显的改善作用。结论:健脾消积口服液(1ml含生药量1g)具有健脾助运、消食化积之功效, 关键词:消化不良;中医药疗法;理气健脾汤 doi:10(3969,j(issn(1003—8914(2010(09(074 文章编号:1003—8914(2010)一09(1445—02 - 1 - Clinical~ rvation on Efect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid in~eating 40 Patients、vitlI Hepatocarcinoma Stage?、llI for Supplementary II'ealment HUANG Zhi—fen，LI Han-zhong，SHI Zhi—yan， et al Department ofTraditional Chinese and Western Medicine，Tumor Hospital，Guangxi Medical University， Nanning(580021) objective~To study the clinical effect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid(JXOL)in treating patients with late stage hepatocarcinoma for supplementary treatment(M ethods:Seventy —five patients were randomly divided into the treated group(40 patients)and the control group(35 patients)(Both groups received the same western medical treatment，including the supporting therapy and analgesia，to the treated group JXOL was added(The short—term effect，quality of life，changes of TCM Syndrome and immunologic criteria were observed(Results: The complete remission(CR)rate in the treated group and the control group and 0 respectively(stable was 5, rate was 62(5, and 37(1, respectively，quality of lire:iiaproving rate was 47(5, and 25(7, ，TCM Syn— and 54(3, respectively(there was drome improving rate was 80, significant difference in co,-nparison of the two groups(P<0。01)(T—lymphocyte subset were not different significantly in the two groups before treatment (P>0(05)(After treatment，the criteria(CD3，CD4，CD4,CDs ratio)，except CDs，improued significantly in the treated group(P<0(05 or P<0(01)and were better than those in the control group(P<0(05 or P< 0(01)(Conclusion:JXOL could raise guality of life of hepatocarcinoma patients in the late stage，prolong their survival time and elevate their cellular immunity( Key words Jianpi Xiaoji Oral Liquid，hepatocarcinorna of stage 11，II I，quality of life，T-lym phocyte subsets - 2 - 《一》 前 言 健脾消积口服液(1 ml含生药量1 g)具有健脾助运、消食化积之功效，主治小儿“脾虚”消化不良;长时期见食不贪、食欲不振、厌恶进食、食量减少为特;同时也可以治疗小儿厌大肠癌(colorectal cancer，CRC):小儿厌大肠癌(是我国常见的消化道肿瘤之一。其发病率居恶性肿瘤的第4位?]，患者平均5 a生存率为20,~25,E 。化疗是晚期大肠癌治疗的主要手段(但其毒性反应往往影响化疗的如期执行，严重者导致死亡。我们根据晚期大肠癌患者正虚邪实的特点，采用自拟益气消积方配合化疗治疗本病，取得一定疗效。 - 3 - 《二》材料与仪器 2.1 药材 党参3 茯苓3 炒麦芽3 白扁豆2 炒山楂2白术2 莱孚子2 鸡内金2 甘草1 水仙子1陈皮0.6 砂仁0.6 以上处方量以kg计 2.2 仪器 MDF一3sZE 超低温冰箱( 日本SANY00 ); 电子、小白鼠、酒精 - 4 - 《三》健脾消积口服液研究方法设计 3.1 药材制备及设定评价标准 3.1.1健脾消积口服液药材提取物的制备 把所用到的药材加水浸过液面，浸泡1小时——提取，每次煮沸1小时(3次)——冷却合并滤液——浓缩——至10000水——调含至80%酒精(用95%调)——放冰箱，调ph8(用40%的NaOH)，放置过夜——过滤——回收酒精——加新鲜蒸馏水到40000——加防腐剂(0.01-0.03%)，白砂糖——分装 每支10ml_——灭菌(100度流通蒸汽)——包装 3.1.2口服液质量评价 健脾消积口服液(1 ml含生药量1 g)具有健脾助运、消食化积之功效，主治小儿“脾虚”消化不良。为证实本品的药理作用，本文对该药进行了药效学实验研究。 一 方法与结果 二 对胃功能的影响 三 对小白鼠胃排空的影响 取体质量20,22 g小白鼠60只，雌雄兼用，实验前禁食12 h，自由饮水。随机分为5组，每组12只，前3组分别灌服健脾消积口服液40、20及，阳性对照组灌服15%香砂养胃丸6 g/kg，空白对照组灌服等容量的蒸馏水0.4 ml/10 g。给药50 min后，各组分别灌服0.1,甲基橙溶液0.1 ml/10 g，20 min脱臼处死小白鼠，剖腹摘取胃置于小烧杯里，加入10 ml - 5 - 蒸馏水，用小剪刀沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用5,碳酸氢钠溶液调节pH值至6.0,6.5，倒入刻度离心管，以2000 r/min离心10 min，取上清液用722 s分光光度计，用蒸馏水调零，测量溶液的光密度为胃中甲基橙光密度。再取,甲基橙0.2 ml加入10 ml蒸馏水摇匀后测量其光密度作为基数甲基橙光密度，并按下列公式计算甲基橙胃残留率。 3.2 对健脾消积口服液有影响的各单因素考察 (3) 正交安排试验，见表1。 按表1设计的工艺条件，以处方比例称取药材 总量200 g投料，煎煮提取。合并煎液，浓缩至1000表1 因素水平表 2(2 考察指标的确定水提液中总固体物的多少多糖、黄酮类成分，且为主要的药理活性成分，故以总固体物、总多糖、总黄酮含量作为考察指标。 2、2(1 总固体物的测定:将煎煮所得1000 ml水提的蒸发皿中，水浴蒸干后置烘箱中105?烘干至恒重，取出冷却后称重，计算总固体物含量。 2(2、2 总多糖的测定u J:准确称取葡葡糖约20 mg，于250 ml容量瓶中定容，分别吸取0(4、0(6、0(8、1(0、1(2、1(4、1(6、1(8 ml，各加水补至2 ml，加入6, 苯酚1 ml，摇匀，加入5 ml浓硫酸，摇匀，室温放置20rain，于490 nin处测吸收度，以2(0 ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖 数，纵坐标为吸收度值， - 6 - 作回归方程，得标准曲线。精密吸取样品液 表2 正交试验结果 ? 90o ? 中药材第25卷第l2期2002年l2月 维普资讯 表3 方差分析表 2 ml，以中性氧化铝2 g吸附，移入离心管中用80,洗液，残渣用沸水提取3次，每次5 ml，合并水提液置250 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取O(4 ml，显色后测490 nln处吸收度，根据标准曲线确定多糖含量。 2(2(3 总黄酮的测定 J:准确称取芦丁对照品5O mg，置于250 ml容量瓶中，用60, 乙醇定容，精密吸 取对照品液1(O、2(O、3(O、4(O、5(0、6(0、7(0 ml，分别置于25 ml容量瓶中，分别加入5, 亚硝酸钠1(O ml，混匀，放置6 min，然后加入1O,硝酸铝1(O ml混匀，再放置6 min，加入1 mol,L氢氧化钠溶液1O(O ml，用60, 乙醇稀释至刻度，混匀，放置15 min。用显色剂作空白，于504 nln处测吸收度。以吸收度为纵坐标(对照品浓度为横坐标绘标准曲线。精密吸取样品液4 ml，加6(0 ml无水乙醇成1O ml，振摇混匀，2500 r,min离心9 min，取上清液。精密吸取3 ml于25 ml量瓶中，按对照品方法显色，于504 nln处测吸收度，以不显色的样品液为空白，依标准曲线求样品中黄酮含量。 3 结果 - 7 - 由表2直观分析可见:各指标受三个因素的影分析的结果具有一致性，其因素主次顺序和最优方优则为C3A B3。实验数据方差分析结果见表 3[3】性意义(P>0(05)，而C因素的差异仅对总黄酮指标总多糖和总黄酮为处方药材中的有效部位，药理作力。总固体物中既含有效成分又有无效成分，其作工艺条件为C3A2Bl，即加13倍水，煎煮三次，每次0(5 h。 4 讨论 正交试验结果显示:煎煮时间越长，有效成分含高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损失。故煎煮时间不宜过长，而宜短时间、多次煎煮。其原因可能是有效成分受温度的影响或是各化学成分之间的相互作用，有待进一步研究。 - 8 - 表二:正式实验结果 因素 实验号 总固体 总多醣 总黄铜 A B C D 1 1 1 1 177.776 76.72 2.2512 1 2 2 2 262.169 52.45 2.9376 1 3 3 3 308.387 66.49 3.2651 2 1 2 3 238.484 72.25 2.9298 2 2 3 1 318.771 92.90 3.7797 2 3 1 2 180.280 64.53 1.8769 3 1 3 3 267.678 80.22 3.0312 3 2 1 3 146.77 53.66 1.449 3 3 2 1 296.182 79.86 2.5086 - 9 - 3.3 正交设计健脾消积口服液研究的工艺 消食口服液中的黄芪、白术、甘草进行定性鉴别: 1. 含量测定 2. 总多糖的测定 3. 标准品溶液的制备:精密称取105 oC干燥至恒重的葡萄糖20.6 mg，加水溶解并定容在250 ml容量瓶中，摇匀即得( 3(1(2 供试品溶液的制备:精密吸取样品液2(0 ml于10 ml离心管中，以中性氧化铝2 g吸附，用80, 乙醇洗涤4次，每次8 ml，离心10 rain，弃去洗液，残渣用沸水提取5次，每次5 ml，合并水提液置250 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得。 3(1(3 标准曲线的制备:精密吸取标准品溶液0(0，0(2，0(4，0(6，0(8，1(0，1(2，1(4 ml，置20 ml试管中，分别加水补至2(0 ml，再分别加人6, 苯酚1(4 ml，摇匀，等充分混合后，再迅速滴加浓硫酸5(5 ml，摇匀，室温放置30 rnin，于紫外分光光度计在490 1-1111处测吸收度，以标准品溶液加人体积为横坐中药材第27卷第1 1期2004年1 1月。线的回归方程为:A =0(5405V 一0(0167(r=0(9994)。 4. 重现性试验:分别吸取标准品溶液1(0 ml5份于试管中，同前操作，结果RSD=2(78, 。 5. 样品含量测定:取同一批样品，同法制备供试品溶液5份，吸取0(4 m1分别置于20 ml试管中，按标准曲线的制备项下“分别加水补至2(0 ml”起操作，测其吸收度，再根据回归方程求得总多糖的 - 10 - 百分含量，结果见表1 样品中总多糖含量测定结果 6. 加样回收率试验:精密吸取已知葡萄糖含量的样品液2(0 ml，分别加人不同量的葡萄糖，以下按供试品溶液的制备和样品含量测定项下操作(n= 5)，结果平均回收率为95(17, ，RSD=2(26, 。 7. 总黄酮的测定 8. 标准品溶液的制备:精密称取105? 干燥至恒重的芦丁对照品39(86 mg于200 ml容量瓶中，加60, 乙醇适量水浴上微热溶解，再加60, 乙醇至刻度，摇匀即得。 9. 供试品溶液的制备:精密吸取样品液2(0 ml于10 ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，边加边振摇，等沉淀完全后，移至10 ml离心管中，离心10rain，取上清液即得。 10. 标准曲线的制备:精密吸取标准品溶液 0(0，1(0，2(0，3(0，4(0，5(0，6(0，7(0 ml于25 ml容量瓶中，分别加人5, 亚硝酸钠1(0 ml，混匀，放置6rain，然后加人10, 硝酸铝1(0 ml，混匀，再放置6rain，加入1 mol,L氢氧化钠溶液10(0 ml，用60, 乙醇稀释至刻度，混匀，放置15 rain，于510 Flnl处测吸收度，以标准品溶液加人体积为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，并求得标准曲线的回收方程为: 维普资讯 A=0(100357V一0(00757l(r=0(9999)。 11. 重现性试验:分别吸取对照品溶液3(0 ml5份置25 n l量瓶中，同前操作，结果RSD =0(623, 。 - 11 - 12. 样品含量测定:取同一批样品，同法制备供试品液5份，精密吸取4(0 ml于25 ml容量瓶中，按标准品方法显色，于510 nrn处测吸收度，再根据回归方程求得总黄酮的百分含量，结果见表2。 表2 样品中总黄酮含量测定结果 13. 加样回收率试验:精密吸取已知黄酮含量的样品液2(0 ml，分别加入不同量的芦丁对照品，以考证下按供试品溶液的制备和样品含量测定项下操作(n=5)，结果平均回收率为98(046, ，RSD =2(16, 《四》健脾消食口服液质量标准初步研 - 12 - 究 1 材料与方法 1(1 材料消食口服液由武汉市某保健品有限公司提供(产品批号20000111，规格250 ml,瓶。产品原料主要为鸡内金、麦芽、神曲、党参、黄芪、谷芽、陈皮、自术、厚朴、山楂、黄苓、黄莲、炒枳壳、甘草、木通等中药材。 1(2 试验动物 昆明种小鼠，体重18, 22 g，由湖北省医学实验动物中心提供，批准号为鄂动医管字第19一OO7号。Wistar大鼠，体重8O, 100 g，由湖北省医学实验动物中心提供，批准号为鄂动医管字第19一OO8号。 1(3 样品处理 受试物直接供急性毒性试验、精子畸形试验、微核试验、3O天喂养试验等灌胃使用。 1(4 检测仪器 血细胞分析仪、sABA一18全自动生化分析仪。 1(5 方法? 1(5(1 急性毒性实验 用体重18, 22 g的小白鼠2O只，雌雄各半。按15 ml,kg体重(O(15 ml,10 g体重)经口灌胃小鼠，灌胃前停食16小时，连续观察1周，并记录动物中毒症状及死亡情况。 1(5(2 骨髓嗜染红细胞微核实验选用昆明种小鼠(体重24,28 g，雌雄各35只。动物按体重随机分成7组(A 组为阴性对照组，G 组为环磷酰胺阳性对照组，B、c、D、E、F组为试验组。动物经口灌胃两次，间隔24小时，于第2次灌胃 - 13 - 6小时后(处死动物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色阅片。每只动物油镜下观察1 000个嗜多染红细胞，并记录微核形成率。 1(5(3 精子畸形试验选用昆明种雄性小鼠，体重25, 30g(共3O只。动物按体重随机分成5组，A 组为阴性 D组为受试物试对照组(E组为环磷酰胺阳性对照组(B、C、 验组。动物经口连续灌胃5天后，再继续喂养3O天，处死动物，取两侧副睾涂片，伊红染色。每只动物高倍镜下观察1 000个精子(记录畸形精子数。 1(5(4 Ames试验 采用经鉴定符合生物学要求的鼠伤寒作者单位:430079 武汉(湖北省卫生厅卫生监督局(尹章汉);湖北省疾病预防控制中心(许四元、樊柏林、蔚茂)沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验;采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外活化系统(+S9)。受试物分为3个剂量组，每皿加入量为0(5 ml。同时设置空白及阳性对照组。采用平板掺入法记录二次重复的平行样品结果。 1(5(5 30天喂养试验选用动物Wistar大鼠，体重8O,100 g，雌雄各半，共8O只。随机分为4组，即受试物低、中、高剂量组和空白阴性对照组;受试物采用经口灌胃，高剂量组分1日多次灌胃，对照组同时给予等量蒸馏水，连续灌胃3O天，然后观察一般临床症状，记录并计算体重和食物利用率， - 14 - 测定血液常规及血液生化指标，同时进行大体解剖检查，并对 心、肝、脾、肺、’肾等主要器官进行病理学检查，记录并计 算脏器称重和脏器系数。 1(5(6 统计方法采用 及t—test。 2 结果 2(1 急性毒性实验经1周观察，两种性别的老鼠无死亡，均未出现任何中毒症状(LD。。>15 mi,kg体重。按急性毒性分级(该受试物属无毒级类物质。 2(2 微核实验结果见表1。 表1 消食口服液微核试验结果 ?删 旒， 观 效 微 率由表1可见(各实验组与阴性对照组结果比较，差异无显著性;表明该受试物骨髓微核试验结果为阴性。 2(3 精子畸形试验结果见表2。 表2 消食口服液小鼠精子畸形率结果 ~-+-s 维普资讯 湖北预防医学杂志2003年第14卷第6期 由表2可见(各实验组与阴性对照组结果比较，差异无 显著性，表明该受试物精子畸形试验结果为阴性。 - 15 - 《五》讨论 5.1正交试验结果显示:煎煮时间越长，有效成分含量越低;煎煮次数越多，水提液中有效成分含量越量越低;煎煮次数越多，水提液中有效成分含量越高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损失。故煎煮时间不宜过长，而宜短时间、多次煎煮。其原因可能是有效成分受温度的影响或是各化学成分之间的相互作用，有待进一步研究。 基质种类选择 当聚乙二醉(PEG)的分子量大于1000时，呈固态，PEG4000与PEG6000的熔点分别为48~53?和55~60?，其本身无生理作用，化学稳定性好，易溶于水，可用以从中释放水溶性或油性药物，对药物有助溶作用，同时还能吸附部分液体，是目前较为理想的一类水溶性基质。PEG6000是常用的水溶性固态基质，因其熔点低，极易与药物熔融成固体分散体，故适于药物的溶解、熔融、滴制和成形。PEG6000还可使整个工艺简化，产品质量和药效得以优化。 在考察基质种类时，大量的文献都是研究PEG4000、PEG6000或两者的混合物对滴丸的影响。但对于葛根芩连滴丸，上述研究方向都会出现一个问题，就是会有一个较明显的小孔存在，而且在滴丸表面会有大量的裂纹状纹路。这会使得无法搽干净小孔里面的硅油，而且裂纹状纹路会使滴丸在一天以后裂碎成数块碎片。严重地影响了滴丸的质量，以及阻碍了葛根芩连滴丸的发展。 以PEG4000和PEG6000的混合物为基质，可向其中加入吐温,80、司班,80等乳化剂，加入后，滴丸小孔消失，裂纹状纹路也消失，但滴丸呈现不规则形状，稍压即扁，易于互相粘连;也可向其中加入少量水，随着水含量的增加，滴丸小孔逐渐变小变浅，碎裂期也逐渐延后，但当水量过多时，滴丸硬度下降，形状开始变得不规则，表面开始粘连，对加水量难以把握及控制;而当向其中加 - 16 - 入少量的PEG400时，裂纹状纹路消失，小孔变浅，是目前所得滴丸效果最好的一个，但PEG400是液体，加入后硬度会有所下降，因此，就以PEG400与PEG6000的混合物为基质，适当增加PEG6000的含量。 5.2 不同滴丸间的比较 为了考察自制滴丸与市售滴丸之间的差别，特从市场上购回一丹参滴丸进行考察，所得结果如表所示。由表可见，两滴丸的硬度差别不大，丹参滴丸由于早已批量生产，技术及仪器或其他方面较成熟，圆整度较好;但也因其为大批量生产，相对于科研的少量制备，对每粒滴丸重量的控制不及后者，故丹参滴丸的丸重变异系数较大;丹参滴丸的平均丸重较小，所以其溶散时限较小。从总体观察，自制葛根芩连滴丸与市售丹参滴丸的差别不大，可达到生产要求。 表11 两批滴丸外观质量检查 圆整平均丸重丸重变异溶散时限硬 批次 度 (mg) 系数 (min) 度 葛根芩连33 9.3 1.5 6.7 2.5 滴丸 丹参滴丸 9.6 27 2.6 5.1 2.6 5.3 TLC鉴定中提取方法的确定 2005版药典葛根芩连片中有关葛根及黄连项下提取方法并不适合滴丸中相关成分的提取，PEG400的水溶性及脂溶性均较好，极易溶于水和甲醇中，所得的供试品很粘稠，展开距离变短，各成分难以分开。因此，得另行选择提取方法。 药典中对葛根使用乙酸乙酯超声提取，但在现实操作中，此方法得到的供试品葛根素含量很低，斑点亮度不明显，改用甲醇提杂质较多。参考其他文献后确定了4.1.2项的提取方法。 根据盐酸小檗碱不溶于水的性质，可向水中加入适量的盐酸，并分离沉淀物， - 17 - 用含氨水的甲醇再次溶解。如此就可把PEG400溶于水中过滤弃去，很大程度上地减少了杂质的干扰，有利于薄层鉴定。 而对于黄芩苷的提取，药典上使用乙酸乙酯超声提取，且PEG400等基本不溶于乙酸乙酯，因此提取液中杂质含量低，所得到的供试品展开效果较好。 5.4 存在问题与解决方法 就目前最优工艺所制备的滴丸，因使用了液态基质PEG400，且结合南方潮湿的天气，使滴丸暴露在空气中时极易吸潮，不利于滴丸的生产、运输、携带与服用，对葛根芩连滴丸的推广起到了极大的阻碍作用。对此，在生产上，除了各个工序要保持环境干燥外，最有效的方法就是在滴丸的表面包上一层防水薄膜，并定量小量干燥密封包装，以期避免滴丸长时间地暴露在空气而影响疗效和口服效果。 结论 健脾消积口服液能改善儿胃肠道功能，促进消化吸收同时对 肝癌患者细胞免疫功能的恢复有促进作用。治疗组治疗后患者的IgA、IgG明显改善,NK细胞活性增高,与治疗前比较差异均有显著性,而对 - 18 - 照组上述指标则有恶化趋势。能改善患者的临床症状,提高生活质量,延长生存期,并有稳定瘤体的作用,有效地控制及延缓病情发展。经鉴定委员会评审认为该课题研究成果达到国内同类研究先进水平。健脾消积口服液广泛应用于肝癌、胃癌、食管癌、结(直肠)癌、胰腺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等恶性肿瘤的辅助治疗,取得了良好的临床疗效。 可见，该剂型和相应的生产工艺具有广泛的开发前景和利用价值，值得综合利用和加强资源开发。 参考文献 1 朱丹妮，等(生血增髓颗粒剂的质量标准研究(中成 药，2000，22(8):546 2 冯汉鸽，等(小儿健脾口服液质量标准的制定(中国医 - 19 - 院药学杂志，2001，21(1):55 3 吕武清，等(中成药中的药材薄层色谱鉴别(北京:人 民卫生出版社，1997:168 4 李平(比色法测定维尔康口服液中总黄酮的含量(兰 州医学院学报，1997，17(3):58 ( 5 李俊，等(茯苓多糖的提取及含量测定(中国现代应用 药学，2000，17(1):49 (200l4—06—24收稿) 6 张惟杰(复合多糖生化研究技术(上海:上海科学技术 出版社，1987:6 7 魏璐雪(中药制剂分析(上海:上海科学技术出版社， 1997:155 8 黄海，1 阴健，等(中药现代研究与临床应用(北京:学苑出版 社，1993:242，328 9周本杰，等(d,JL健脾消食口服液提取工艺研究(中药 材，2002，25(12):900 10张惟杰(复合多糖生化研究技术(上海:上海科学技术 出版社，1987:6 11 魏璐雪(中药制剂分析(上海:上海科学技术出版社， 1997:155 12 魏毅，等(用多指标试验全概率评分法研究茶多酚颗粒 - 20 - 制备工艺(中国中药杂志，1999，24(5):279 13黄海，等(SPSS 10(0 for Windows统计分析(北京:人民 邮电出版社，2001:141 (2003—06—24收稿) 中药材第26卷第10期2003年10月等(SPSSIO(0 forWindows 致 谢 本论文是在指导老师的悉心指导和同学的帮助下完成的，在实验过程中，他们给予了我耐心的指导和热情的帮助～他们 - 21 - 渊博的学识，高尚的人品，严谨求实的作风，都对我产生了极 大的影响。在此我对他们表示由衷的敬意和至深的感谢～ - 22 -