【doc】喉咽清水蜜丸质控标准的研究

【doc】喉咽清水蜜丸质控的研究 喉咽清水蜜丸质控标准的研究 l7喉咽清水蜜丸质控标准的研究 哈尔滨医科大学(150086)楚墨登-vl樊宏伟是琳华张慧君胡君茹尼上%-口 提要应用薄层扫描法对喉咽清水蜜丸中六味主药进行定性鉴剧,应用高效渣相色 谱法和 紫外分光光度法对其中主要成分五味子乙紊和橙皮甙进行古量测定结果证明,方 法准确,稳 定,重视性好.可作为其制荆的质量控制标准. 关键词;堕竺苎竺至:兰兰墼甙一薄层扫描法 喉咽清水蜜丸,主要由北豆根,陈皮t甘 草等组成.经多年临床应用.对喉炎,咽炎,扁 桃体炎等疗效明显.为了更好地控制产品质 量,采用薄层扫描法,高效液相色谱法和紫外 分光光度法对其组成和主要化学成分进行定 性鉴别和含量测定. 1,仪器与试药 美国Waters高效液相色谱仪;Nova- pakC1日柱(3.9X150ram);600E泵;7l2自动 进样器;810色谱工作站;486紫外检测器_日 本岛津cs一93o双光束薄层扫描仪;岛津 uv一19O紫外分光光度计;三用紫外线 仪;甲醇(色谱纯),其它试剂均为分析纯;五 睐子乙素,橙皮甙对照品,标准药材,中国药 品生物制品检定所;喉咽清水蜜丸自制三批; 硅胶G板青岛海洋化工厂分厂. 2.薄层扫描及鉴别分析 2.1干姜,陈皮和甘草的鉴别 2.L1样品液制备:取200粒水蜜丸,研 碎,水煎30min,煎液浓缩30ml左右t用乙醚 萃取2次(20m],20m1),合并萃取渡并浓缩 至2ml,备用. 2.1.2对照液制备;模拟制剂处方比例 称取标准药材,制成相当于200粒成药的阴 性,阳性对照品(阳性对照品为单昧标准药 材;阴性对照品为成方中减去相应一味标准 药材),分别按样品液制备制成阴,阳对 照渡,备用. 2.1.3薄层层析:薄层板:硅腔G(展开 前105?,活化30min);展开剂:正己烷一乙 酸乙酯一醋酸(8:2:1);展开方式:上行法; l994年尊16卷第7期 展距:15cm.展开后 喷5HSO.乙醇溶 4 ?烘,i,{min,在365nm紫外 灯下 214 . 薄层扫.::.:二J1...薄层扫,,L 薹.『\i7i::波长:365nm;发射滤一uuL, 光片3,反射式直线"' 扫描;灵敏度:低;狭一——一 缝2u. . 6X . 6n 扫 m 描. 215结果越..扫描结果.JJI.1^ 嚣/\7《:图1.峰2为陈皮特』I^征峰;峰3,峰4,峰5 . "? 萎毳篷:1.f\.:/I一为千姜特征峰}峰u, 为甘草和陈皮重叠圈1 峰._. 2.2北豆报的鉴别 2.2.l样品液制备:取200粒水蜜丸研 碎,用0.O3的硫酸水溶液浸泡24h,然后用 氨水调至pH值至9,用氯仿萃取2次t合并 萃取液并浓缩至2ml,备用. 2.2.2对照液制备:模拟制剂处方比例 称取标准药材,制成相当于200粒成药的阴, 阳对照品,按样品液制备方法制成阴,阳对照 液,备用. 2.2.3薄层层析:薄层板:硅腔G(展开 前105?活化30mio),展开剂:苯一乙酸乙酯 一 甲醇(8:8:1);展开方式:上行法}展距: 15cm}展开后于365nm紫外灯下定位. ^2.2.4薄层扫 薹 .f【l.射滤光片:3;其 ———,它同2.1.4项.j匕丘【ll1一. .. 从一一果及薯 圉2果见图2.峰1为 北豆根特征峰. 2.3薄荷的鉴别: 2.3.1样品液制备:取200粒蜜丸研碎, 用氯仿浸泡24h,浸泡液浓缩至2ml,备用. 2.3.2对照液制备:模拟制剂处方比例 称取标准药材+制成相当于200粒成药的阴, 阳对照品,按样品液制备方j主制成阴,阳对照 液,备用. 2.3.3薄层层析:同2.1.3项. 2.3.4薄层扫描:紫外检测器;ks 430nm.其它同2.1.4. . 2.3.5扫描结果 蔷黜躲见 峰1,峰2,峰3 — , 为薄荷的特征峰. ^2.4五味于的鉴———, 别 圉32.4.1样品液制 备:同2.1.1项. 2.4.2对照液制备:同2.1.2项. 2.4.3薄层层析:薄层板,展开方式,展 距及显色同2.1.3项.展开剂:甲苯一乙酸乙 酯一甲酸(6?4?0.25),可见光下定位. 2.4.4薄层扫描::'目. 紫外检测器;,』J\f\ 430nm.其它同2.1.4't 巩JU 2.4.5扫描结果if? 及分析:扫描结果见几一一—— 图4.峰l,峰2,峰3圉4 为五味子的特征峰. 3.含量测定 3.1五味于乙素的HPLC法测定 3.1.1色谱条件:流动相:甲醇一水(80 :20);流速:1.0ml/min;检测波长:254nm, 灵敏度:0.1AUFS;分离图谱见图5,图6. ',mIntIn 圉5对照品色谱圉图6样品色谮图 1五味子己紊l五味子己紊 3.1.2标准曲线制备:准确称取干燥至 恒重的五味子乙素对照品10rag,置50ml容 量瓶中,加入甲醇溶懈并稀释至刻度.再分别 稀释成浓度为0.02,0.04.0.08.0.12,0.16, 0.20mg/ml的对照品溶液,各进样5l.以进 样量(ug)为纵坐标,峰面积为横坐标,进行 回归,得回归方程:y=8.19X10x一3.64X l0,,r=0.9998. 3.1.3样品测定:取喉咽清水蜜丸研碎, 准确称取35g,置圆底烧瓶中,加入100ml乙 醚,水浴回流4h,过滤,回收乙醚至干.残留 物用甲醇适量充分溶懈,转移至10ml容量 瓶中,用甲醇稀释至刻度,经0.45am微孔滤 膜过滤,进样5l,按以上色谱条件测定,计 算含量. 结果见1. 表1五味子乙素和橙皮甙含量测定结果 3.1.4回收率实验:准确称取已测得含 量的喉咽清水蜜丸,分别加入五味子乙素对 照品,同样品项下处理并测定. 结果见表2. 中成药 垭一 土, 表2五味子乙素和橙皮甙回收率结果 3.1.4稳定性实验:将同一样品液在不 同时间0h,2h,蛆,6h进样进行测定,结果 RSD=2.13,说明样品液在6h内稳定. 3.2橙皮甙的紫外分光光度法测定 00300t00 圉7陈皮紫外围8样品 扫描圉紫外扫描图 3.2.1对照品及 样品溶液的紫外光谱 测定:将对照品溶液 (制备方法见标准曲 线制备)和样品溶液 (制备万法见样品测 定)以溶剂作空白在 紫外分光光度计200 ,400nm范围内扫 描,扫描图谱见图7, 图8.橙皮甙在360 和385nm处有两个 吸收峰,样品液在 285nm处吸收峰明 显.另制备陈皮阴性 液扫描,在285nm处 无吸收,故285nm可 作为测定波长. 3.2.2标准曲线制备:准确称取干燥至 恒重的橙皮甙对照品2mg,置50ml量瓶中, 加入含0.1NaOH的75乙醇溶液(以下 简称碱醇液)溶解并稀释至刻度,再分别稀释 成浓度为4,16,24,32,40,ug/ml的对照品溶 液,放置lh后,以溶剂作空白,于紫外分光光 度计285nm波长处测定吸收度.以吸收度值 为横座标,溶液浓度(.ug/m1)为纵座标,线性 回归,得回归方程:y=".14x+0.108,r=0. 9997. 3.2.3样品测定:取喉咽清水蜜丸研碎, 准确称取15g,置圆底烧瓶中,加石油醚 200ml,水浴回流60min,过滤.弃去石油醚, 1994年第l6卷第7期 药渣加甲醇200ml,水浴回流蛆.回收甲醇 至干,加10ml水洗涤,过滤.弃去滤液,将残 渣用碱醇液适量溶解转移至100ml量瓶中, 用碱醇液稀释至刻度,摇匀.放置lh后,准确 取lml,置50ml量瓶中,用碱醇液稀释至刻 度,按以上方法进行测定,计算含量.结果见 表1. 3.2.4回收率实验:准确称取已澳f得含 量的样品,准确加入橙皮甙对照品,同样品测 定项下处理,测定,结果见表2. 3.2.5稳定性实验:将同一样品液分别 在不同时间Oh,2h,蛆,8h,进行测定,结果 RSD=1.15.说明样品液在8h内稳定. 4.讨论 4.1在薄层扫描定性时,有荧光斑点的 药材,尽量采用荧光检测.荧光检测较紫外检 测基线平稳,干扰峰,杂峰少.干姜本身无荧 光斑点,经5HsO.乙醇液显色后,产生明 显的荧光斑点}陈皮,薄荷,甘草等本身有荧 光斑点,经显色后,荧光加强,峰形好. "2通过对照薄层扫描匿谱,确定每味 药的特征色谱峰,即可鉴别每味药的存在.定 量点样后,通过峰的高低,还可达到相对定量 的目的. 4.3经反复摸索,选定甲醇一水(8O- 2O)为五味子乙素检测的流动相,此时五味子 素5min左右出峰,同时与邻近峰又很好 地分离,R>1.5,一个样品仅需lflmin即可 完成.经阴性对照测定,其它成分对其无干 扰. 4.4以上定性和定量方法,稳定,可靠, 重现性好,适用于喉咽清水蜜丸的质量控制. <中国药典》软件系统研制成功 据悉,卫生部药典委员舍和武汉科盾技术开发 中心联台开发,首次研制推出t中国药典}(现行版) 数据库管理系统.软件操作简单,不需要专门学习, 具有标准数据检索及打印8大功能.检索速度快.准 确率高. ?17? ,?, ??,????? ?? ,??J 一" 川