优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺论文：响应面分析法优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺研究

优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺论文：响应面分析法优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺研究 优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺论文:响应面分析法优选生精汤中淫羊藿苷的提取工艺研究 【摘要】 目的优选生精汤中淫羊藿苷提取的工艺条件。采用响应面分析法，以提取物淫羊藿苷含量为指标进行实验，考察料液比、乙醇浓度、提取时间等因素对提取工艺的影响。结果优选出醇提淫羊藿苷的最佳工艺为:加30倍量70,乙醇，回流提取1.75 h，提取两次。生精汤中淫羊藿苷的含量为1.36 μg/g。结论该方法简便易行，稳定性好，适于工业化生产中应用。 【关键词】 响应面分析法; 淫羊藿苷; 提取工艺; Box-Benhnken中心组合实验 生精汤由菟丝子、淫羊藿、熟地、补骨脂、女贞子等11味中药组成。经动物实验,1,证明生精汤能显著降低模型大鼠血清雄激素含量，增加血清雌、孕激素含量促排卵。经多年临床应用,2,证实的生精汤为中医药补肾活血法治疗女性多囊卵巢综合征的有效组方。淫羊藿为处方中的君药，淫羊藿苷类黄酮化合物为其主要有效成分，此外含有生物碱、木脂素、多糖和微量元素等。现代药理实验研究表明,3，4,，淫羊藿总黄酮具有性激素样作用，可以使雌性小鼠子宫增 重、E2含量升高、雄性小鼠血清T含量升高。淫羊藿苷能延缓卵巢卵母细胞巢破裂，抑制原始卵泡的发育启动，减少卵泡的消耗，使处于静止期的原始卵泡数增多,5,。淫羊藿总黄酮为生精汤治疗女性多囊卵巢综合征的主要有效成分之一。响应面分析法,6,以回归方法作为函数估算的工具，将多因子试验中因子与试验结果的相互关系函数化，可研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系，并可进行优化。本文采用响应面分析法，以提取物淫羊藿苷含量为指标进行实验，考察药材的料液比、乙醇浓度、提取时间等因素对提取工艺的影响，优选淫羊藿苷的最佳提取工艺，以便提出更多的有效成分，提高治疗效果。 1 仪器与试药 1.1 仪器LC-10AD高效液相色谱仪(日本岛津公司)，CLASS-VP色谱工作站，GL-CQ-250S超声波清洗机(上海杰理科技有限公司)，AE-240电子天平(上海梅特勒一托利多仪器有限公司)。W一201B数显恒温水浴锅(上海申腾生物技术有限公司)，R-201旋转蒸发器 (上海申胜生物技术有限公司)。 1.2 材料与试剂生精汤中各药材(菟丝子、淫羊藿、熟地、补骨脂、女贞子、山药、鸡血藤、刘寄奴、王不留行、制香附、生麦芽)购自浙江中医药大学饮片厂，并经浙江中医药大学姚振生教授鉴定。 淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所，批号:110737-200312，乙腈、甲醇(供高效液相色谱测定用)为色谱纯，超纯水，其余为分析纯。 2 方法与结果 2.1 淫羊藿苷的含量测定,7, 2.1.1 色谱条件 色谱柱为phenomenex-Genmini-C18(4.6 mm×150 mm);流动相为甲醇,水(52,48);流速1.0 ml?min-1;检测波长270 nm;柱温30?;检测灵敏度0.02AUFS;进样量20 μl。 2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品2 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含有0.24 mg淫羊藿苷的溶液，作为对照品溶液。 2.1.3 供试品溶液的制备 按处方取生精汤各味药材，精密称定，回流提取两次，合并提取液，混匀，浓缩至100 ml，取1 ml用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.1.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液，倍半稀释后，分别注入液相色谱仪，淫羊藿苷峰的峰面积。以进样浓度C(μg/g)为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，回归方程为:A=2×106C+109 929，r=0.999 9。表明淫羊藿苷在4.8,0.15 μg范围内，线性关系良好。 2.1.5 精密度实验 精密吸取浓度为0.2 μg/μl的对照品溶液，重复进样5次，每次20 μl，测定峰面积，计算RSD=0.28%，表明仪器精密度良好。 2.1.6 加样回收实验取已知含量的生精胶囊样品0.25 g，共5份，分别加入0.2 μg/μl的淫羊藿苷对照品10 μl，其余同“2.1.3”供试品溶液的制备方法制备，按“2.1.1”色谱条件进样20 μl，测定峰面积，并计算回收率，结果平均回收率为100.4%，RSD=2.5%，表明本方法具有较好的加样回收率。 2.2 淫羊藿苷提取工艺研究 2.2.1 响应面分析法 因素的选取及分析按照处方分别称取生精汤各药材，共20.4 g，根据Box-Benhnken中心组合实验设计原理,6,，综合单因素试验的结果，选取料液比、提取时间、乙醇浓度3个因素，每个自变量的低、中、高水平分别以-1，0，1编码，以淫羊藿苷得率作为响应值(Y)。采用SAS9.1.3对实验结果进行回归分析。试验因素与水平见表1，实验方案及结果见表2。 表2 实验因素与水平(略)表2 响应面实验安排及结果(略) 2.2.2 实验结果分析采用SAS9.1.3软件对表2中不同试验条件下所得到的淫羊藿苷得率进行响应面回归分析，得拟合方程:Y1=0.808 7 + 0.291 65 X1 + 0.044 25 X2+ 0.059 575 X3+ 0.021 2 X12- 0.172 6 X1X2 + 0.0377 X1X3- 0.093 6 X22 - 0.003 25 X2X3- 0.348 2 X32。 表3 回归方程显著性及方差分析(略) 由表3可知，在置信区间95%时，方程线性相关系数R= 0.989 1。证明回归方程真实、可靠，具有统计学意义，可 用于替代实验点对实验结果进行分析。方程各自变量(Xn)方差分析表明，方程一次项、二次项和交互项对多糖提取得率具有显著性影响，因此各因素与响应值之间不是简单的一次关系。并进一步对回归方程各项作显著性检验。表4 回归方程各项的显著性检验分析(略) 由表,可知，液料比对淫羊藿苷提取得率具有显著性影响，而提取时间、醇浓度则无显著性影响。根据回归分析结果作出相应曲面图和等值线图，见图1,3。利用SAS软件，进行分析计算，得淫羊藿苷的最佳提取工艺条件为:液料比29.7?1，提取时间1.78 h，乙醇浓度71.8%，在此条件下淫羊藿苷的理论提取得率为1.14 μg/g。结合实际操作方便和方差分析结果，确定最佳提取工艺条件为:加药材30倍量的70%的乙醇提取1.75 h，共提取两次。 2.2.3 验证性实验按照最佳提取工艺进行实验验证，提取3次，测得淫羊藿苷的平均得率为1.36 μg/g，RSD为3.51%。结果见表5。表明该工艺稳定可行，重复性好。表5 验证性试验结果(略) 3 讨论 本研究采用响应面分析法对淫羊藿苷提取工艺进行优 化，并得到回归方程。其最佳提取工艺条件为:加药材30倍量的70%乙醇提取两次，每次1.75h，结果淫羊藿苷得率为1.36 μg/g。 传统的数理统计往往采用正交设计或均匀设计,8,，寻求最佳的因素水平组合，但不能在给出的整个区域上找到因素和响应值之间的一个明确的函数表达式，从而无法找到整个区域上的因素的最佳组合和响应的最优值。响应面分析法是通过中心组合实验研究几种实验因素间相互作用的一种回归分析方法，具有周期短，实验次数少，回归方程精确度高等优点，并能从图形方面分析寻求最优实验考察因素。本实验利用响应面分析法所得淫羊藿苷提取最佳工艺，具有操作方便、重复性好、提取效率高等优点，稳定可行。 【参考文献】 ,1,周 璐，章巧萍，徐孝平，等(生精汤对雄激素致无排卵模型大鼠卵巢功能及形态学的影响,J,(浙江中医药大学学报，2006，30(6):621( ,2,章巧萍(浅谈补肾活血法治疗多囊卵巢综合征,J,(中医药信息杂志，2004，11(11):1014( ,3,黄 菊，罗丽莉，傅玉才，等(淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究,J,(中国现代医学杂志，2007，17(5):523( ,4,刘 娟，朱兆荣，汪江华，等(淫羊藿、补骨脂及其复方提取液的性激素样作用观察,J,(中国兽医杂志，2003，39(6) :33( ,5,叶海涌，刘 健，楼宜嘉(淫羊藿苷衍生物的制备及其雌激素样作用研究,J,(浙江大学学报(医学版)，2005，34(2):131( ,6,Carlson R?Designs forExplorative Experiments in Organic Synthetic Chemistry,J,(ChemoMetrics and lntelligent Labo-ratory Systems，2004，73(1):63-72，151( ,7,国家药典委员会(中国药典，?部,S,(北京:化学工业出版社，2005:205( ,8,孙振球(医学统计学,M,.北京:人民卫生出版社，2002:181( 下面的是2016年经典励志语录，需要的朋友可以欣赏，不需要的朋友下载后可以编辑删除～～谢谢～～ 1、有来路，没退路;留退路，是绝路。 2、为目标，晚卧夜半，梦别星辰，脚踏实地，凌云舍我其谁! 3、做一会一题，一题决定命运。 4、静下来，铸我实力;拼上去，亮我风采。 5、拼一载春秋，搏一生无悔。 6、狠抓基础是成功的基础，持之以恒是胜利的保证。 7、把汗水变成珍珠，把梦想变成现实! 8、拧成一股绳，搏尽一份力，狠下一条心，共圆一个梦。 9、每天都是一个起点，每天都有一点进步，每天都有一点收获! 10、22.对命运，对承诺负责 11、我自信，故我成功，我行，我一定能行。 12、不敢高声语，恐惊读书人。 13、高三高考高目标，苦学善学上好学。 14、争分夺秒巧复习，勤学苦练创佳绩、攀蟾折桂，舍我其谁。 15、眼泪不是我们的答案，拼搏才是我们的选择。 16、站在新起点，迎接新挑战，创造新成绩。 17、遇难心不慌，遇易心更细。 18、乐学实学，挑战高考;勤勉向上，成就自我。 19、努力造就实力，态度决定高度 20、忘时，忘物，忘我。诚实，朴实，踏实。 21、精神成人，知识成才，态度成全。 22、作业考试化，考试高考化，将平时考试当高考，高考考试当平时。 23、我高考我自信我成功! 24、23.再苦再累不掉队，再难再险不放弃 25、拼搏高考，今生无悔;越过高三，追求卓越! 26、挑战人生是我无悔的选择，决胜高考是我不懈的追求。 27、山高不厌攀，水深不厌潜，学精不厌苦:追求! 28、学练并举，成竹在胸，敢问逐鹿群雄今何在?师生同志，协力攻关，笑看燕赵魁首谁人得。 29、快马加鞭君为先，自古英雄出少年。 30、太阳每天都是新的，你是否每天都在努力。 31、把握现在、就是创造未来。 32、25.我因X班而自豪，X班因我而骄傲 33、我心飞翔，路在脚下。 34、人活着要呼吸。呼者，出一口气;吸者，争一口气 35、辛苦三年，幸福一生。 36、精神成就事业，态度决定一切。 2016年经典励志语录二 你一定要坚强，即使受过伤，流过泪，也能咬牙走下去。因为，人生，就是你一个人的人生。 竹子用了4年时间，仅仅长了3cm，从第五年开始，以每天30cm的速度疯狂的生长，仅仅用了六周时间就长到了15米。其实在前面的四年，竹子将根在土壤里延伸了数百平米。做人做事亦是如此，不要担心你此时的付出得不到回报，因为这些付出都是为了扎根。人生需要储备!多少人，没熬过那三厘米! 能够比跌倒的次数多一次站起来的次数，你就是强者! 开始，去做，这是最难的一步。往往，突破了最难的一步以后，或者说，破除了想像中的困难以外，其他的事，可能反而容易。尤其有些事情，上瘾以后，形成习惯，不继续反而不舒服。再好的方法，对于彻底的、不想上进的懒人是无效的，但既然，生命是属于自己的，愿意行动与否，也还是自己的事。 成功与不成功之间，有时距离是很短的，你只要后退一步或再向前几步。 想得再多不如行动一次;说得再好不如立刻就做!人与人的距离是说与做的差别;人与人的差别是信与愿的有无!凡事实行则无瑕忧虑，空想则寸步难行。无论要做什么立刻行动!马上行动!开始行动! 做一件事情，只有最初五分钟热情的，叫失败者;最后五分钟仍有热情的，叫成功者。 当你周围都是米的时候，你很安逸;当有一天米缸见底，才发现想跳出去已无能为力。有一种陷阱，名叫安逸!别在最能吃苦的年纪选择安逸!没有危机!是最大的危机!自己不上进，危机无处不在吞噬你的理想和灵魂，混下去很容易，混上去太难了! 为什么成功的不是你。年轻的你，迷茫又着急。你想要房子想要汽车，想要旅行想要高品质生活。你不断催促自己成长，却沉不下心来认真读一篇文章;你急切地期待成功，却每次在遇到挫折时提前退缩。既然没有过那些汗水和拼搏，又何必在旁观别人的荣耀与成功时愤愤不平呢?所以，努力吧，别抱怨。 如果你要做一件事，请只管安安静静的去做。因为那是你自己的事，别人不知道你的情况，也不可能帮你实现梦想。千万不要因为虚荣心而炫耀，也不要因为别人一句评价放弃自己的梦想。其实最好的状态，是坚持自己的梦想，听听前辈的建议，少错几步。值不值，时间是最好的证明。 你可以没有梦想，但不能不知道现在要做什么，你可以长相平凡丢到人群里就被淹没，但不能随波逐流成为没有个性的复制品，你可以被压力逼迫得痛 哭一百次，但哭完记得笑一千次给它看，你可以习惯为别人付出，但至少别忘了为自己而活，你可以学会假装，但最后不要变成你当初讨厌的那种人。 你比你想象中更勇敢，比你看起来更强大，也比你以为的更聪明。 2016年经典励志语录三 1、如果真的想活得悠闲，那么，为何不学着让自己释放心灵的重负，学着忘却，忘记那些无碍于个人原则的得失;无关大局的磕磕碰碰;无伤大雅的前嫌旧隙呢?学会让自己时时都轻装上阵，潇洒前行! 2、人格的完善是本，财富的确立是末。 3、古人云“隐忍不怒的人，胜于勇者”、“修己冶心的人胜于攻城掠地的将领”。生活中，宽容可以减少人与人之间的隔阂，可以让大家更好地沟通，彼此多一些体贴和关怀。 4、“一个人不能骑两匹马，骑上这匹，就要丢掉那匹，聪明人会把凡是分散精力的要求置之度外。”人的生命和精力是有限的，我们要学会将聚光镜一样，排除一切琐事的干扰，将所有的资料、精力、热情聚焦并锁定你的目标上。 5、一个能从别人的观念来看事情，能了解别人心灵活动的人，永远不必为自己的前途担心。一个人最大的破产是绝望，最大的资产是希望。不要等待机会，而要创造机会。 6、喜欢的最高境界是你可能为她去死，可爱的最高境界是你得为你爱的人好好活着。 7、如果人生需要一个完美的符号，没有比微笑更合适的了。微笑，它是甜美的歌声，能唱出生活的快乐;它是温暖的阳光，能驱散心头的阴影;它是无边的春风，能蓬勃事业的生机。 8、微笑可以减轻紧张的情绪和压力，不管面对多么愤怒或者冲动得人，只要微笑示之，都能坦然以对，微笑一把神奇的钥匙，可以打开别人心灵的窗户，传递心灵的善意，退一步，海阔天空;退一步，瞒天过海;冲动是魔鬼，只要心平气和静下心来，相对而笑，一切都能化干戈为玉帛。 9、很多人找女朋友或者男朋友，把学历当作指标之一，既希望对方能够给他/她伴侣的温暖与浪漫，又希望他/她知识丰富、学历相当或更高，在事业上能蒸蒸日上;我想说，你找的是伴侣，不是合作伙伴，更不是同事，生活就是生活，这个人适合你，即使你是博士他/她斗大字不识一个，那也无所谓，适合就会和谐融洽，人比文凭更重要 10、听着一首歌，反反复复，琢磨不透，自己在想什么?难道真的爱她么?可为什么说不出口呢，爱情就是买卖，看透就好。痴情的人不会有真爱、让这一切随风，吹到天涯海角。不要再让我见到，对你，既然说不出，那就模模糊糊。或许，这样最好，谁都不会太累。 11、一个能从别人的观念来看事情，能了解别人心灵活动的人，永远不必为自己的前途担心。 12、人要想树立自己的威信，就要不断进行自我完善和修养、严于律己。你要求别人怎么样，首先必须自己先做到那样，身教的效果总比言传更为快捷。严于律己能使自己成为一个最可信赖的人。 13、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。 14、选几个自认为能靠得住的人组成良好、稳固、有力的人际关系的核心。这首选的几个人可以包括自己的朋友、家庭成员和那些在你职业生涯中彼此联系紧密的人。他们构成你的影响力内圈，因为他们能让你发挥所长，而且彼此都希望对方成功。 15、我们现在做的工作，也许过于平淡，也许鸡毛蒜皮。但这就是工作，是生活，是成就人事的不可缺少的基础。对于敬业者来说，凡事无小事，简单不等于容易。 16、亲情是一种深度，友情是一种广度，而爱情是一种纯度。亲情是没有条件、不求回报的阳光沐浴，友情是浩荡巨大、可以随时安然栖息的堤岸;而爱情则是神秘无边、可以使歌至到忘情泪至潇洒的心灵照射。人生一世，亲情、友情、爱情;三者缺一，已为遗憾，三者缺二，实为可怜;三者皆缺，活而如亡。 17、如果你心中有阳光，就不会恐惧前方的坎坷;如果你心中有勇气，就不会畏缩不前;无论前方风多大，雨多大，闯过去就是一片海阔天空!孩子别忧伤，生命的美丽就是坚强的走过坎坷! 18、好心没有错，但也要分清是非，不分原则的善良，是“愚善”，就像东郭先生一样。因此，在没有搞清一件事是否值得做之前，要敢于说“不”，不要被他人利用，更不要一不小心成为他人的替罪羊。 19、其实路并没有错，错的是选择，爱并没有错，错的是缘分，所以无论何地，一路的风景总是有限的，终究会有美好的。生命不是一场赛跑，而是一次旅行。 20、什么是嫁得好?嫁得好并不是嫁富豪，而是嫁给一个能给你安全感的男人。住在别墅里天天流泪的，你进的不是天堂而是地狱。真正嫁得好的女人，是住在单元房里却被老公哄的像只傻鸟，爱你一时，宠你一世，骗你一辈子!其实日子过得好，真的不是有多少钱，而是无忧无虑无烦恼。 21、想取得成功，不仅要吃“苦中苦”，也要相关条件的配合支持，那些光知道吃苦的人，那些吃了不值得吃的苦的人，那些把吃苦当成解决一切问题法宝的人，恐怕只能继续在“苦中苦”的怪圈里徘徊。 22、人往往是失去之后才懂得珍惜，可是为时已晚，即使是哭干眼泪也换不回曾经的拥有。多少人都是这样的感叹:拥有时不知道珍惜，失去时已无可挽回。 23、从不犯错的孩子长大后要么成为庸才，要么早晚要犯大错。因此，我们要适度降低对孩子的期望与要求，鼓励他们真实地面对自己的缺点和错误，鼓励他们在尝试中不怕犯错误，注重过程的体验和收获，摘掉“好孩子”的面具。 24、成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累积而成。 25、人生的最大遗憾莫过于错误地坚持了不该坚持的东西，轻易地放弃了不该放弃的东西，每一个人都有自己的理想，都有那个期望达到的目标，或许有这么一天我恩男狗狗成为一名教师，或许有那么一天我能实现自己的理想，达到自己的目标!生活还在继续!不要忘记微笑的对待每一天，不要忘记珍惜余下的每一天! 26、要始终保持敬畏之心。对时光，对美，对痛楚。仿佛我们的活，也只是一棵春天中洁白花树的简单生涯。不管是竭力盛放，还是静默颓败，都如此甘愿和珍重。 27、我们缺少的不是机遇，而是对机遇的把握;我们缺欠的不是财富，而是创造财富的本领;我们缺乏的不是知识，而是学而不厌的态度;我们缺少的不是理想，而是身体力行的实践。 28、只有一条路不能选择——那就是放弃的路;只有一条路不能拒绝——那就是成长的路。 29、积极的人在每一次忧患中都看到一个机会，而消极的人则在每个机会都看到某种忧患。莫找借口失败，只找理由成功。 30、能够刚正批评、指责我们缺点和错误的人是我们难得的诤友，善意的批评就像是一壶美酒，当我们开怀陶醉在这种朋友同事间畅饮的世界里，批评的因子仿佛蕴藏在每个直观的感觉细胞中。 31、没有人愿意和总是虚伪、圆滑的人打交道，但是一味的诚实，却也容易伤害人。所以，生意人讲究的是大诚实，即在适当的时候，对适当人，说适当的话。如果坦率无忌是一种伤害，那么，请选择机智的“谎言”。 32、只要你有能力去做的事就一定要去做，不要给自己留下任何遗憾，人生最重要的不是所站的位置，而是所朝的方向。路就在你脚下，只要走，就能到达远方。 33、做对的事情比把事情做对重要。 34、生命的奖赏远在旅途终点，而非起点附近。我不知道要走多少步才能达到目标，踏上第一千步的时候，仍然可能遭到失败。但我不会因此放弃，我会坚持不懈，直至成功! 35、以前喜欢一个人，可以任由招之即来，挥之即去。现在喜欢一个人，仍可以招之即来，但不再接受挥之即去。因为我现在知道，我很好，所以你爱我，也只有一次机会。 36、水的心是平静的，水的心是轻灵的，你看，水，一平如镜，云月其中，怡然自乐。水，怀着平静而轻灵的心，缓和的一淌而去，遇一些阻隔且轻轻的绕过，何必那么多计较，心平而轻流自畅;如一路顺直，那更好了，我也可以尽情的奔流，一望千里，波涛澎湃，我也会挥洒我的潇洒，我的纵情。 37、日子不动声色奴役我们疲于奔命，而我们还要为之稽首敛眉。 38、不要等待机会，而要创造机会。 39、没有一种不通过蔑视、忍受和奋斗就可以征服的命运。 40、夫事未有不生于微而成于着，圣人之虑远，故能谨其微而治之，众人之识近，故必待其着而后救之;治其微则用力寡而功多，就其着则竭力而不能及也。人见识短浅，所以必等弊端闹大才来设法挽救。 41、人性最可怜的就是:我们总是梦想着天边的一座奇妙的玫瑰园，而不去欣赏今天就开在我们窗口的玫瑰。 42、古人说:“少成若天性，习惯如自然。”坏习惯是我们打不开的心锁;坏习惯是我们转不过的弯;坏习惯是我们看不见的障碍„„好习惯要保持，坏习惯要改正，永远别让坏习惯左右我们的未来。