蛋白溶解度测定

蛋白溶解度测定 1、大豆及其制品蛋白质溶解度测定 1 范围 本标准规定了大豆及其制品中蛋白质溶解度测定的原理、试剂、仪器设备和测定方法。 本标准适用于饲料检测单位、饲料企业、养殖场(户)、大中专院校对大豆及其制品的加工质量的检测和监控。 2 规范性引用文件 下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 601—88 化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备 GB/T 6432—1994 饲料中粗蛋白质的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 蛋白质溶解度 在一定的氢氧化钾溶液中溶解的蛋白质质量占试样中总蛋白质量的百分数。通常采用氮溶解指数(NSI)和蛋白质分散指数((PDI)来示。 4 原理 用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作 用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量;同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。 5 试剂 a) 氢氧化钾(分析纯)，无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵; b) 浓硫酸、盐酸(分析纯)、95%乙醇、蒸馏水。 6 仪器和设备 a) 感量为0.0001 g分析天平; b) 磁力搅拌器; c) 离心机; d) 样品粉碎机; e) 60目分析筛; f) 电炉; g) 100 mL或250 mL凯氏烧瓶; h) 凯氏蒸馏装置; i) 250 mL锥形瓶; j) 1000 mL容量瓶; k) 微量滴定管。 7 分析步骤 7.1 试剂 7.1.1 0.042 M氢氧化钾溶液 称取2.360 g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 7.1.2 混合催化剂 称取6 g硫酸钾和0.4 g硫酸铜，磨碎混匀。 7.1.3 氢氧化钠溶液 称取400 g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 7.1.4 硼酸溶液 称取20 g硼酸，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 7.1.5 0.1M盐酸标准溶液 量取8.3 mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀，按GB 601-88要求进行标定即可。 7.1.6 混合指示剂 称取1 g甲基红和5 g溴甲酚绿，加入乙醇溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度。 7.2 样品制备 取具有代表性的试样用四分法缩减至200 g，粉碎至60目，装入密封容器中。 7.3 操作步骤 7.3.1 试样处理 称取试样1.0 g(准确至0.0002 g)置于250 mL烧杯中，准确移入 0.042 M氢氧化钾溶液50 mL，磁力搅拌20 min，然后将试样转移至离心管中，以2700 r/min的速度离心10 min。 7.3.2 测定 吸取上清液 15 mL, 放入消化管中, 按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同时，按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中粗蛋白质的含量。 7.3.3 分析结果计算 试样中蛋白质溶解度按照下式进行计算: (1) 式中: C——盐酸标准溶液浓度，mol/L; V2 ——滴定试样时所需标准酸溶液体积(mL); V1 ——滴定空白时所需标准酸溶液体积(mL); V¢——吸取样液体积(mL); V——试样分解液蒸馏用体积(mL)。 7.3.4 重复性 7.3.4.1 每个样品应取2份平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果。 7.3.4.2 测定允许相对偏差不大于1%。 7.4 注意事项 7.4.1 不同样品的粒度应相同。 7.4.2 不同样品在氢氧化钾溶液中的搅拌时间应一致 2、蛋白质溶解度的测定方法 一、适用范围: 本方法适用于豆粕生熟度的检测。 二、原理: 加热不同程度的豆粕，用0.2%的氢氧化钾溶解度不同，由此根据氢氧化钾溶解后的豆粕含氮量与原样中含氮量的比值即可判断出豆粕的生熟度。 三、试剂: 本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水均为蒸馏水。 1 .氢氧化钾溶液:0.2% 相当于0.042mol/L,PH12.5。 2. 其它试剂为凯氏定氮所需的标准试剂。 3. 称取2.360gKOH于容量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml。注意 补充KOH试剂的纯度。(KOH纯度为82%时应称取量为2.878g) 四、测定步骤: 1 .称取1.0g(精确至0.0001g)过60目筛的豆粕，置于250ml 烧杯中，加入50ml0.2%的KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分 钟; 2. 之后，移入50ml溶液于离心管中，以2700转/分的速度离心10分钟; 3 .取15ml 上清液进行凯氏定氮 ，方法同粗蛋白质的测定; 4 .同时测定原样中粗蛋白质的含量。 五、测定结果的计算与分析: 1. 计算: 0.3g样品中粗蛋白质的含量 PS= *100 原样中粗蛋白质的含量 2、分析: PS>85%, 过生; PS<70% ,过熟。