开放性实验血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法）

开放性实验血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法） 开放性实验 血红蛋白测定(氰化高铁血红蛋白测定法) 【要求】熟悉氰化高铁血红蛋白测定方法，掌握血红蛋白测定的参考值和临床意义。 【原理】高铁氰化钾能使血红蛋白中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白(Hi)。后者再与氰离子结合，形成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)。氰化高铁血红蛋白的最大吸收峰在波长540nm处，可用的高精度的分光光度计定量测定，其吸光度与血红蛋白浓度成正比。 【试剂】氰化高铁血红蛋白(HiCN)转化液: 氰化钾(KCN) 0.05g 高铁氰化[KFe(CN)] 0.20g 36 非离子表面活性剂(Triton X-100) 1.0ml 无水磷酸二氢钾(KHPO) 0.14g 24 蒸馏水加至 1000ml(纠正pH至7.0,7.4) 血红蛋白转化液为淡黄色透明溶液，配成后用滤纸过滤，置棕色瓶中，在室温中可保存数月，在冰箱中稳定时间更长，但勿使结冰。该液以HO为空白，2于540nm测其吸光度应,0.001。 【器材与仪器】试管、刻度吸管、微量吸管、分光光度计。 【操作】 1.血红蛋白转化 用微量吸管取末梢血24,l，加入5ml HiCN转化液另，充分混匀，静置5min，使充分反应。 2.比色 如果使光光度计比色，波长540nm，光径 1.0cm，以转化液或蒸馏水为空白，测定样本吸光度(A) 3.计算 如果使用符合WHO标准的分光光度计，可根据样本吸光度值(A)直接计算出血红蛋白浓度。 A(540HiCN)64458,计算公式为: Hgb(g/L),，，251,A，367.7441000 式中:64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为1mmol/L血红 蛋白的物质浓度，除以1000换算为g/L。 44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径，,540nm条件下的吸光系数。 251是稀释倍数。 4.当使用的分光光度计不符合WHO标准时，可先使用已知浓度的血红蛋白标准液制作，HiCN的标准曲线，然后根据样本吸光度在标准曲线上查取血红蛋白浓度。 【注意事项】 1.使用光电比色计之前须校正仪器。 2.采血用的血红蛋白吸管20,l的准确性?1%以内，5.0ml移液管的准确性应在?0.5%以内。当使用标准曲线时，应定期对标准曲线进行校正。 3.样吕在读数前应清晰，如发生混蚀，可能有以下几种情况: (1)血中白细胞过多，可离心后取上清比色。 (2)血中有异常球蛋白，可在溶液中加0.1g碳酸钾。 (3)有硫化血红蛋白或血红蛋白C时，则可用蒸馏水按1:1稀释，结果乘以2即可。 (4)氰化试剂是剧毒品，在配试剂时要严格按剧毒品操作。如发现变绿、弯混则不能使用，pH低于7.0时应进行调整。 - 4.血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中，否则CN浓度下降，致使结果偏低。 【参考值】成年男性 120,160g/L 成年女性 110,150g/L 新 生 儿 170,200g/L 【临床意义】血红蛋白减少和增多临床意义与红细胞计数相似。但在某些贫血时，由于红细胞平均血红蛋白含量不同，红细胞和血红蛋白减少程度可不一致，如小细胞低色素贫血时，血红蛋白减少比红细胞减少更为显著，而大细胞性贫血时红细胞的减少比血红蛋白减少为显著。因些同时测定红细胞和血红蛋白，对贫血类型的鉴别有重要意义。