活血止痛膏有效成分经皮渗透性研究[Word文档]

活血止痛膏有效成分经皮渗透性研究[Word文档] 活血止痛膏有效成分经皮渗透性研究 关键字: 活血止痛膏有效成分经皮渗透性研究 本文为Word文档，感谢你的关注, [摘要] 建立透皮接收液中丹皮酚、丁香酚及胡椒碱的含量测定方法并对活血止痛橡胶膏剂经皮渗透性进行研究。利用HPLC测定透皮接收液中丹皮酚、丁香酚及胡椒碱的含量;以24 h累积透过量、经皮渗透速率及皮肤刺激性为指标，优选透皮接收液;采用Franz扩散池法考察活血止痛橡胶膏剂体外透皮特征及规律。结果明，以聚乙二醇-乙醇-生理盐水 3?3?4为透皮接收液，丹皮酚、丁香酚及胡椒碱的累积透过量和经皮渗透速率均较丙二醇-乙醇-生理盐水 3?3?4和乙醇-生理盐水 3?7作为接收液高，皮,w刺激性较丙二醇-乙醇-生理盐水 3?3?4作为接收液小;活血止痛橡胶膏剂中丹皮酚、丁香酚及胡椒碱 24 h累积透过量分别为2.84，19.9，0.753 μg?cm-2，三者经皮渗透速率分别为0.18，1.22，0.02 μg?cm-2?h-1。由此，活血止痛橡胶膏剂中丹皮酚、丁香酚及胡椒碱的透皮过程与其在膏中含量无关，且这一过程为扩散过程。 [关键词] 丹皮酚;丁香酚;胡椒碱;经皮渗透性;活血止痛膏 Transdermal permeation of effective components in Huoxue Zhitong patch YANG Chang， DU Shou-ying*， BAI Jie*， LI Peng-yue， CUI Ya-hua， YANG Bing (Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China) [Abstract] To establish a determination method for the contents of paeonol， eugenol and piperine in receptor liquid and to research the transdermal permeability of Huoxue Zhitong patch. The contents of paeonol， eugenol and piperine in receptor liquid were determined by high pressure liquid chromatography(HPLC); and the receptor liquid was optimized by taking accumulative amount penetrated within 24 hours， percutaneous permeation rate and skin irritation as indexes. In vitro Franz diffusion experiment was applied to assess the percutaneous penetration characteristics and regularity of Huoxue Zhitong patch. The results showed that the accumulative penetration amount and penetration rate by using PEG 400-ethanol-normal saline 3?3?4 as receptor liquid were higher than those by using propylene glycol?ethanol?normal saline 3?3?4 and ethanol-normal saline 3?7， the and skin irritation of PEG 400-ethanol-normal saline 3?3?4 was smaller than propylene glycol:ethanol: normal saline 3?3?4. Results of percutaneous permeability experiments displayed that the accumulative amount penetrated of paeonol， eugenol and piperine within 24 hours was 2.84， 19.9， and 0.753 μg?cm-2 respectively in Huoxue Zhitong patch and the penetration rate was 0.18， 1.22， and 0.02 μg?cm-2? h-1 respectively. Thus， the permeation of paeonol， eugenol and piperine through the skin was a diffusion process， which was irrelevant to their content in patch. [Key words] paeonol; eugenol; piperine; transdermal permeation; Huoxue Zhitong patch 活血止痛膏是安徽安科余良卿药业有限公司自主研发 的一种橡胶膏剂，现收载于2015年版《中国药典》一部 [1]。其由牡丹皮、胡椒、丁香等20多味药组成，能够活血止痛、舒筋通络，临床上广泛用于筋骨疼痛、肌肉麻等的治疗。作为外用给药剂型，有效成分穿过皮肤屏障(角质层)到达靶部位是发挥治疗作用的前提。通常认为，橡胶膏剂载药量小[2]，有效成分是否能到达皮下及皮下组织，将直接影响治疗效果，因此有必要对活血止痛膏有效成分的经皮渗透性进行研究。 体外透皮实验法操作简单、实验条件易于控制，在经皮给药制剂经皮渗透性研究中得到广泛的应用[4]。该方法通常采用人体皮肤、动物皮肤或人工膜模拟在体皮肤环境，以生理盐水作为接收液，用Franz扩散池来评价药物的释放和皮肤渗透性[3]。但由于活血止痛膏中存在大量的脂溶性成分，在生理盐水中的溶解度很小，难以满足漏槽条件，因此本课题对透皮接受液进行筛选，建立活血止痛膏透皮接受液中丹皮酚(paeonol，Pae)、丁香酚(eugenol，Eug)、胡椒碱(piperine，Pip)的HPLC，并对活血止痛膏的经皮渗透性进行研究，为其进一步研究与开发提供理论依据。 1 材料 LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津，含1690型柱温箱和SPD-20A型紫外检测器);BT125D型电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司);TK-20B型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司);KQ5200DA 数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);BSA2245电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);RE-539C雷瓦电动理发器(上海雷瓦电器有限公司);Quanta 250扫描,子显微镜(美国FEI 公司)。 丹皮酚对照品(成都曼斯特生物科技有限公司中国科学院成都生物研究所，批号MUST-15020401);丁香酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号110725-201414);胡椒碱对照品(成都曼斯特生物科技有限公司中国科学院成都生物研究所，批号MUST-15071310);活血止痛膏(安科余良卿药 业有限公司)。甲醇(Fisher公司，色谱纯);纯净水(娃哈哈集团有限公司);乙酸(Fisher公司，色谱纯);无水乙醇(北京化工厂，分析纯);聚乙二醇-400(国药集团化学试剂有限公司，分析纯);1，2-丙二醇(国药集团化学试剂有限公司，分析纯);戊二醛溶液25%(国药集团化学试剂有限公司);乙酸异戊酯(北京化工厂，分析纯)，其他试剂均为分析纯。 雄性KM小鼠，体重(20?1) g，由维通利华实验动物中心提供，合格证号SCXK(京)2012-0001。 2 方法 2.1 色谱条件 2.1.1 丁香酚和丹皮酚的色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);以甲醇为流动相A，以酸水(乙酸调节pH至2.8)为流动相B，梯度洗脱(0,20 min，55%,40% B;20,25 min，40%,20% B;25,30 min，20% B;30,35 min，20%,55% B)，流速1.0 mL?min-1;分别以274，280 nm 作为丹皮酚、丁香酚的检测波长;柱温30 ?。 2.1.2 胡椒碱的色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);以甲醇-酸水(乙酸调节pH至2.8)(77?23)为流动相，流速1.0 mL?min-1;检测波长343 nm;柱温30 ?。 2.2 对照品溶液的制备 分别精密称定丹皮酚、胡椒碱及丁香酚适量，置于10 mL 量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，分别制备成质量浓度为 0.593，0.983，1.056 g?L-1的对照品母液。 2.3 曲线的制备 用无水乙醇将上述对照品母液制备成不同浓度的混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件检测。以待测成分质量浓度C (mg?L-1)为横坐标，以待测成分峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得到Pae，Eug，Pip的标准曲线。Pae在 0.094 85,9.485 mg?L-1线性关系良好，标准曲线回归方程为A=48 607C-1 233.9，r=0.999 8;Eug在0.08 448,8.448 mg?L-1线性关系良好，标准曲线回归方程为A=10 177C-903.7，r=0.999 2;Pip在0.039 31,3.931 mg?L-1线性关系良好，标准曲线回归方程为A=75 507C-4 529.6，r=0.999 3。 2.4 离体皮肤的制备 取雄性KM小鼠，断颈椎处死，除去腹部鼠毛，确保角质层完好，分离腹部皮肤，用脱脂棉擦去脂肪组织和结缔组织，生理盐水冲洗干净。用铝箔包裹后-20 ?冷冻保存，1周内用完。 2.5 Franz 扩散池法[5] 将2.4所制备的离体皮肤自然解冻，备用。将鼠皮固定在渗透扩散装置的供给室与接收室之间，角质层朝向供给室(有效扩散面积3.46 cm2)，分别加入20 mL透皮接收液，池内置磁力搅拌子，转速350 r?min-1，温度(32.5?0.2) ?下平衡30 min，排尽皮肤下的空气，滤纸吸干皮肤表面的液体。将剪好的活血止痛膏置于离体皮肤上方，使其与皮肤紧密接触。分别于不同时间点取样0.4 mL，同时补加等体积同温度的新鲜接收液。所取接收液经0.22 μm微孔滤膜过滤，按上述色谱方法进行HPLC测定，按下述公式计算相应时间丹皮酚、丁香酚及胡椒碱的累计透过量(Qn)和透皮速率(Jss)。 Qn=(VCn+1.0×?n-1i-1Ci)/S 公式中Qn为第n个时间点的单位面积累积透过量(μg)，V为接收液的体积(20 mL)，Cn为取样点接收液的质量浓度(mg?L-1)，S为扩散池的有效面积(3.46 cm2)。 以累计透过量Qn纵坐标，t为横坐标，绘制累积透过量-时间曲线，其斜率为透皮速率Jss[6]。 2.6 皮肤标本的制备[7] 按2.4所述方法制备离体皮肤，随机分成4组，按2.5所述方法将其固定于渗透扩散装置的供给室与接收室之间，分别将30%聚乙二醇400-30%乙醇-40%生理盐水(PEG-Et-NS)、30%丙二醇-30%乙醇-40%生理盐水(PG-Et-NS)以及30%乙醇-生理盐水(Et-NS)作为透皮接收液。12 h后用眼科剪迅速将不同组离体皮肤于相同部位剪下面积为0.5 cm×0.5 cm的小块，迅速置于2.5%戊二醛溶液中固定。12 h 后用去离子水清洗3次，乙醇梯度脱水，CO2临界点干燥，真空溅射仪喷金，扫描电子显微镜观察超微结构。 3 结果 3.1 透皮接收液的筛选 3.1.1 不同接收液渗透量、渗透速率比较研究 分别以PEG-Et-NS，PG-Et-NS，Et-NS作为透皮接收液，活血止痛膏中丹皮酚、胡椒碱及丁香酚透皮吸收情况见图1，2。 由图可知，以PEG400-Et-NS 3?3?4为接收液，丹皮酚的Q24和Jss略大于以PG-Et-NS 3?3?4为接收液，明显高于以Et-NS 3?7为接收液;丁香酚的Q24和Jss明显高于以PG-Et-NS 3?3?4，Et-NS 3?7为接收液;胡椒碱的Q24略大于以Et-NS 3?7为接收液，明显高于以PG-Et-NS 3?3?4为接收液，但3种接收液条件下Jss无明显差异。 3.1.2 不同接收液皮肤刺激性比较研究 取2.6项下皮肤样本，于扫描电镜下观察不同接收液条件下，小鼠皮肤下表面微,^结构变化情况，结果见图3。 NS组:皮肤下表面胶原纤维丰满，呈紧密堆积排列;Et-NS组:皮肤下表面胶原纤维较丰满，排列整齐;PG-Et-NS组:皮肤下表面胶原纤维稀疏，排列紊乱，纤维较细，能看到纤维下皮肤有明显的褶皱;PEG400-Et-NS组:皮肤下表面胶原纤维较稀疏，排列紊乱，纤维较细。 综上所述，以PEG400-Et-NS 3?3?4为活血止痛膏经皮透过研究的透皮接收液。 3.2 活血止痛膏经皮渗透性研究 以PEG400-Et-NS 3?3?4为透皮接受液，活血止痛膏24 h累计经皮渗透量随时间变化规律见图4，表1。分别采用零级模型、一级模型、Higuchi 模型、Hixson-Crowell 模型对活血止痛膏经皮渗透曲线进行回归分析，结果见表2。 4 讨论 本课题组通过预实验发现，以生理盐水作为活血止痛膏透皮接收液，所收集的样品中Pae，Eug，Pip的浓度均不能达到HPLC的定量限。结合前期研究对微透析灌流液的筛选，以30%乙醇生理盐水作为灌流液，微透析探针对Pae，Eug，Pip均无明显吸附[8]，同时参考于娟等[9]活血止痛凝胶体外释放和经皮渗透性研究中的透皮接收液，选择30%乙醇生理盐水作为透皮接收液。又因为该3个成分尤其是Pip 的脂溶性较强，为增加三者在透皮接收液中的溶解度，对透皮接收液进行进一步的筛选。 本研究所制备的离体皮肤下缘处于真皮深层的网状层，与透皮接收液接触的下表面主要由各种纤维构成，以胶原纤维为主。本研究主要以纤维的排列规则度、稀疏程度、粗细为指标对透皮接收液的皮肤刺激性进行评判。由结果可知，Et-NS组皮肤下表面纤维更饱满，排列更规则，更接近生理盐水组;PG-Et-NS组皮肤下表面纤维细，稀疏，排列紊乱，最偏离皮肤正常结构。因此，透皮接收液皮肤刺激性由大到小为:PG-Et-NS 3?3?4>PEG-Et-NS 3?3?4> Et-NS 3?7。结合累计透过量和透过速率两指标，最终选择PEG-Et-NS 3?3?4为透皮接收液。 由透皮接收液的筛选结果可以看出，同比例的PEG400和丙二醇，PEG400对3种成分的溶解作用更强。经分析，PEG400同丙二醇均可与生理盐水、乙醇组成潜溶剂，从而增加脂溶性成分在透皮接收液中的溶解度。但PEG400作为一种非离子表面活性剂，除有潜溶作用外，还可以与脂溶性化合物形成胶束[10]，因此增溶作用更强。 由方程模型拟合结果可以看出，接收液中Pae，Eug，Pip的浓度变化规律均符合零级模型，药物的透皮过程与膏中药物浓度无关;又因为三者Higuchi模型的相关系数r均大于Hixson-Crowell模型，因此可以推测3种成分是从活血止痛膏中扩散到达皮肤表面的。因活血止痛橡胶膏剂基质主要是橡胶、松香等，要经过混炼的步骤将基质和中药浸膏进行均匀混合，随后经历精炼、烘胶等步骤使药物被严密的包裹在以橡胶为骨架的混合基质中[11]。因为橡胶、松香等均不宜溶于水中，不会出现凝胶(膏)剂中药物在扩散和骨架溶蚀双重作用[12]下释放的现象。 由活血止痛膏橡胶膏剂经皮渗透性研究结果可以看出，3种成分24 h累积透过量较低、渗透速度较慢，尤其是胡椒碱Q24为0.753 μg?cm-2，Jss为0.02 μg?cm-2?h-1。同时与于娟等[9]研究结果相比，丹皮酚的Jss约为凝胶膏剂中丹皮酚Jss的1/10，这与其他研究[13-14]所得橡胶膏剂透皮性能较差相一致。另外，橡胶膏剂还存在皮肤刺激性、皮肤残留性等缺点，提示为提高活血止痛膏的生物利用度及药效，可寻找新型、安全、高效的载药体系。 [参考文献] [1] 中国药典.一部[S].2015:1294. 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[责任编辑 曹阳阳] 文档资料:活血止痛膏有效成分经皮渗透性研究 完整下载 完整阅读 全文下载 全文阅读 免费阅读及下载 阅读相关文档:中药白及的化学成分研究 3种温阳健脾汤药对非酒精性脂肪肝细胞增殖与凋亡的影响 2―氨基磷酸茚处理对新疆紫草悬浮细胞次生代谢物积累的影响 基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究 采用在体单向肠灌流模型研究荷叶多成分整体的肠渗透性 桂枝茯苓胶囊丸治疗慢性盆腔炎性疾病临床随机对照试验的系统评价 中医药临床实践中“共识”形成的方法和流程 针对中国B2C出口型跨境电商的加拿大市场分析 新常态下河北省低碳经济发展策略研究 毽球运动在高校教学中的现状与对策研究 让标志设计课乐趣横生 简析高中英语课程的互动教学模式 高中体育教学策略创新的探究 信息时代下高职辅导员工作 感谢你的阅读和下载 *资源、信息来源于网络。本文若侵犯了您的权益，请留言或者发站内信息。我将尽快删除。*