长期毒性病理报告

SD大鼠经口灌胃 4周及恢复期2周长期毒性试验 病理学检查报告 1. 研究目的 通过观察经口灌胃 4周及恢复期2周长期毒性试验对SD大鼠机体产生毒性病理性损伤的部位、程度和性质，以及经过恢复期病理性损伤的可逆程度，以确定经口灌胃给予 对SD大鼠产生毒性作用的靶器官或靶组织，为口服 的安全性评价提供形态学依据。 2. 试验设计与方法 SPF级SD大鼠80只，雌雄各半，开始试验时1～2月龄，体重120～150g。按体重分层将SD大鼠随机分为0.5%CMC-Na 溶媒对照组（10ml/kg）、低剂量组（0.5ml  原液/kg）、中剂量组（1.5ml  原液/kg）、高剂量组（0.5ml 原液/kg），每组20只，雌雄各半。每天上午经口灌胃给药1次，每周7次，连续给药28天，各试验组动物给药容积均为10ml/kg，灌胃操作均在1小时内完成，恢复期2周。 表1  SD大鼠经口灌胃 4周及恢复期2周长期毒性试验试验设计与方法 组别 供试品 剂量 给药体积 动物笼号及编号 解剖时间 ml原液/kg （ml/kg） 雄性 雌性 1 0.5% CMC-Na   10 1 1101～1105 3 1211～1215 给药结束 2 1106～1110 4 1216～1220 恢复期结束 2   0.5 10 5 2121～2125 7 2231～2235 给药结束 6 2126～2130 8 2236～2240 恢复期结束 3   1.5 10 9 3141～3145 11 3251～3255 给药结束 10 3146～3150 12 3256～3260 恢复期结束 4   3 10 13 4161～4165 15 4271～4275 给药结束 14 4166～4170 16 4276～4280 恢复期结束                   给药期末经腹腔注射戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉并腹主动脉采血后解剖动物，每组10只，雌雄各半；恢复期末解剖其余动物，每组10只，雌雄各半。解剖时检查动物体型、毛色、皮肤、外生殖器和腔道等；然后剖开动物胸腹部皮肤，观察皮下组织变化；并按照顺序打开腹腔、盆腔、胸腔、颅腔，检查各腔内脏器组织的在体位置、颜色、大小、质地，有无出血及粘连等。详细记录剖检所见。 最后，根据试验摘取动物脏器组织并用10%福尔马林固定液固定，取材、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，制作常规石蜡切片，经常规HE染色后进行组织病理学检查。 3. 结果 3.1大体剖检结果 本试验过程中未发生动物濒死或死亡情形。 给药期末剖检40只SD大鼠均未发现明显病变。结果见表2 恢复期末剖检其余40只SD大鼠均未发现明显病变。结果见表3 3.2组织病理学检查结果 给药期末SD大鼠脏器组织镜检发现： 心脏：低剂量组动物中2只雄性大鼠心肌组织中见小灶性坏死伴慢性炎细胞浸润。 肺脏：阴性对照组1只雄性大鼠、低剂量组雌性和雄性各2只大鼠、中剂量组3只雌性和1只雄性大鼠、高剂量组2只雌性和3只雄性大鼠见肺组织中灶性肺泡间隔增厚伴少量慢性炎细胞浸润，为间质性肺炎改变。阴性对照组1只雄性大鼠和中剂量组2只雌性大鼠见肺组织的肺泡腔内大量巨噬细胞聚集。 肾脏：阴性对照组2只雄性大鼠见肾组织内少量慢性炎细胞浸润，伴或不伴局部间质组织纤维化，为间质性肾炎改变。另见阴性对照组1只雄性大鼠见灶性肾实质组织中肾小管上皮细胞胞浆溶解，核固缩，为溶解性坏死改变。 脾脏：阴性对照组雌雄各1只、低剂量组1只雄性、中剂量组雌雄各1只、高剂量组1只雌性和3只雄性大鼠见脾脏实质组织淤血改变，红髓髓窦充满大量红细胞，脾索变窄。 肝脏：阴性对照组2只雄性、低剂量组1只雌性、高剂量组1只雌性大鼠见小灶性肝细胞坏死伴少量慢性炎细胞浸润。另见阴性对照组雌雄性各2只、低剂量组雌雄各4只、中剂量组雌性4只和雄性5只、高剂量组雌性2只和雄性4只大鼠，见肝细胞内大量或少量脂滴空泡形成，为肝组织脂肪变性改变。 前列腺：阴性对照组1只雌性大鼠见前列腺组织中慢性炎细胞浸润，为慢性前列腺炎改变。 膀胱：低剂量组雌性和雄性大鼠各1只、中剂量组1只雄性大鼠见膀胱组织中少量慢性炎细胞浸润，为慢性膀胱炎改变。 甲状腺（含甲状旁腺）：阴性对照组1只雌性大鼠、低剂量组2只雌性和1只雄性大鼠、中剂量组雌雄性大鼠各1只、高剂量组2只雌性和1只雄性大鼠见甲状腺滤泡内无胶质或胶质稀薄，为发育欠佳表现。 所有动物的其他脏器组织镜检未发现明显病理改变。结果见表4 恢复期末Beagle犬脏器组织镜检发现， 心脏：低剂量组动物中1只雌性大鼠见心包膜内大量慢性炎细胞浸润并组织纤维化，少量含铁血黄素沉着，并有一小脓肿形成，部分外层心肌纤维出现变性、坏死，为心包炎改变。中剂量组1只雄性和高剂量组2只雄性大鼠均见心肌小灶性坏死伴少量慢性炎细胞浸润。 肺脏：阴性对照组雌性和雄性各1只、低剂量组3只雌性和1只雄性、中剂量组1只雌性和2只雄性大鼠、高剂量组2只雌性和1只雄性大鼠见肺组织中灶性肺泡间隔增厚伴少量慢性炎细胞浸润，即间质性肺炎改变。 肾脏：阴性对照组1只雌性、高剂量组2只雌性大鼠见肾组织内少量慢性炎细胞浸润，伴或不伴局部间质组织纤维化，为间质性肾炎改变。另见阴性对照组和高剂量组各1只雌性大鼠肾盂组织内钙化物沉积。 脾脏：阴性对照组2只雌性和1只雄性、低剂量组2只雌性和3只雄性、中剂量组2只雌性和1只雄性、高剂量组2只雌性和1只雄性大鼠，见脾脏实质组织淤血改变，红髓髓窦充满大量红细胞，脾索变窄。 肝脏：高剂量组1只雌性大鼠见小灶性肝细胞坏死伴少量慢性炎细胞浸润。另见阴性对照组雌雄性各4只、低剂量组4只雌性和3只雄性、中剂量组3只雌性和4只雄性、高剂量组雌雄性各3只大鼠肝细胞内大量或少量质地空泡形成，为肝组织脂肪变性改变。 胰腺：阴性对照组1只雄性大鼠见间质内少量慢性炎细胞浸润。另见阴性对照组2只雄性、低剂量组1只雄性、中剂量组雌雄性各2只、高剂量组1只雄性大鼠胰腺腺上皮细胞内大小不等的空泡形成，为胰腺组织空泡变性改变。阴性对照组和高剂量组各1只雄性大鼠胰腺间质组织内少量较大的脂滴空泡形成，为胰腺间质组织中脂质蓄积改变。 前列腺：低剂量组1只雌性大鼠见前列腺组织中慢性炎细胞浸润，为慢性前列腺炎改变。 膀胱：阴性对照组1只雄性、低剂量组2只雌性和1只雄性大鼠、中剂量组2只雄性、高剂量组1只雌性大鼠见膀胱组织中少量慢性炎细胞浸润，为慢性膀胱炎改变。 甲状腺（含甲状旁腺）：阴性对照组2只雌性大鼠、中剂量组1只雌性、高剂量组雌雄性大鼠各1只大鼠见甲状腺滤泡内无胶质或胶质稀薄，为发育欠佳表现。 所有动物的其他脏器组织镜检未发现明显病理改变。结果见表5 4. 讨论 根据表4可以看出，给药期末SD大鼠的心脏、肾脏、前列腺、膀胱、甲状腺等脏器组织的病变属于偶发现象，与给药不具有剂量-效应关系，表明与给药与否无关，不具有毒性病理学意义。肺脏、肝脏、脾脏等脏器组织病变的动物组别分布不具有特异性，性别差异也不明显，且与给药不具有剂量-效应关系，表明与给药与否无关，不具有毒性病理学意义。 根据表5可以看出，SD大鼠的心脏、肾脏、胰腺、前列腺等脏器组织的病变，病变动物组别分布不具有特异性，性别差异也不明显，病变属于偶发现象，与给药与否无关，不具有毒性病理学意义。肺脏、肝脏、脾脏、膀胱、甲状腺等脏器组织病变的动物组别分布不具有特异性，性别差异也不明显，且与给药不具有剂量-效应关系，表明与给药与否无关，不具有毒性病理学意义。 根据表4和5可以看出，给药期末和恢复期末SD大鼠的心脏、肺脏、肝脏、肾脏、前列腺、膀胱、甲状腺等脏器组织的病变动物数量和病变程度，不具有时间上的明显差异和组别分布的特异性，证实病变属于与给药无关的偶发病变。脾脏病变见恢复期末动物总数比给药期末增加，但各组内差异不明显，估计与恢复期动物解剖过程中人为放血操作有关，不具有毒性病理学意义。胰腺腺上皮细胞空泡变性改变和胰腺间质组织中脂质蓄积改变出现在恢复期而给药期末无，病变与动物年龄增加有关。 综上所述，镜检所见病变属于SD大鼠的自发病变或者动物解剖过程中的人为操作引起的改变，未发现与给药（经口灌胃）具有剂量-效应关系的毒性靶器官病变。 5. 结论 在本试验条件下：未发现经口灌胃对SD大鼠产生毒性病理病变。 6. 附件 6.1 附件Ⅰ：病理结果汇总 6.1.1 大体剖检结果汇总 表2  给药期末各组动物大体剖检结果汇总表 脏器名称 大体病变 检查动物数 每组动物数 溶媒组病变动物数 低剂量组病变动物数 中剂量组病变动物数 高剂量组病变动物数 心脏 无 40 10 0 0 0 0 主动脉 无 40 10 0 0 0 0 肺脏 无 40 10 0 0 0 0 肝脏 无 40 10 0 0 0 0 脾脏 无 40 10 0 0 0 0 胰腺 无 40 10 0 0 0 0 胃 无 40 10 0 0 0 0 小肠 无 40 10 0 0 0 0 大肠 无 40 10 0 0 0 0 肾脏 无 40 10 0 0 0 0 前列腺/宫颈 无 40 5 0 0 0 0 睾丸/卵巢 无 20/20 5 0 0 0 0 附睾/子宫角 无 20/20 5 0 0 0 0 肾上腺 无 20/20 10 0 0 0 0 胸腺 无 40 10 0 0 0 0 甲状腺（含甲状旁腺） 无 40 10 0 0 0 0 脑垂体 无 40 10 0 0 0 0 脑 无 40 10 0 0 0 0 脊髓 无 40 10 0 0 0 0                 表2  给药期末各组动物大体剖检结果汇总（续表） 脏器名称 大体病变 检查动物数 每组动物数 溶媒组病变动物数 低剂量组病变动物数 中剂量组病变动物数 高剂量组病变动物数 皮肤乳腺 无 40 10 0 0 0 0 坐骨神经肌肉 无 40 10 0 0 0 0 膀胱 无 40 10 0 0 0 0 唾液腺 无 40 10 0 0 0 0 肠系膜淋巴结 无 40 10 0 0 0 0 气管 无 40 10 0 0 0 0 食管 无 40 10 0 0 0 0 胸骨（骨髓） 无 40 10 0 0 0 0                 表3  恢复期末各组动物大体剖检结果汇总表 脏器名称 大体病变 检查动物数 每组动物数 溶媒组病变动物数 低剂量组病变动物数 中剂量组病变动物数 高剂量组病变动物数 心脏 无 40 10 0 0 0 0 主动脉 无 40 10 0 0 0 0 肺脏 无 40 10 0 0 0 0 肝脏 无 40 10 0 0 0 0 脾脏 无 40 10 0 0 0 0 胰腺 无 40 10 0 0 0 0 胃 无 40 10 0 0 0 0 小肠 无 40 10 0 0 0 0 大肠 无 40 10 0 0 0 0 肾脏 无 40 10 0 0 0 0 前列腺/宫颈 无 40 5 0 0 0 0 睾丸/卵巢 无 20/20 5 0 0 0 0 附睾/子宫角 无 20/20 5 0 0 0 0 肾上腺 无 20/20 10 0 0 0 0 胸腺 无 40 10 0 0 0 0 甲状腺（含甲状旁腺） 无 40 10 0 0 0 0 脑垂体 无 40 10 0 0 0 0 脑 无 40 10 0 0 0 0 脊髓 无 40 10 0 0 0 0 皮肤乳腺 无 40 10 0 0 0 0 坐骨神经肌肉 无 40 10 0 0 0 0                 表3  恢复期末各组动物大体剖检结果汇总（续表） 脏器名称 大体病变 检查动物数 每组动物数 溶媒组病变动物数 低剂量组病变动物数 中剂量组病变动物数 高剂量组病变动物数 膀胱 无 40 10 0 0 0 0 唾液腺 无 40 10 0 0 0 0 肠系膜淋巴结 无 40 10 0 0 0 0 气管 无 40 10 0 0 0 0 食管 无 40 10 0 0 0 0 胸骨（骨髓） 无 40 10 0 0 0 0                 6.1.2 组织病理学检查结果汇总 表4  给药期末各组动物组织病理学检查结果汇总 脏器名称及镜检病变 检查动物数 阴性对照组病变动物数 低剂量组病变动物数 中剂量组病变动物数 高剂量组病变动物数 雌(20) 雄(20) 雌(5) 雄(5) 雌(5) 雄(5) 雌(5) 雄(5) 雌(5) 雄(5) 镜检病变脏器组织： 心脏 心肌小灶性坏死伴慢性炎细胞浸润 20 20 0 0 0 2 0 0 0 0 肺脏 肺泡间隔增厚和炎细胞浸润 20 20 0 1 2 2 3 1 2 3 肺泡内大量巨噬细胞聚集 20 20 0 1 0 0 2 0 0 0 肾脏 肾组织内慢性炎细胞浸润 伴或不伴纤维化 20 20 0 2 0 0 0 0 0 0 肾组织溶解坏死 20 20 0 1 0 0 0 0 0 0 脾脏 组织内淤血 20 20 1 1 0 1 1 1 1 3 肝脏 肝细胞坏死伴慢性炎细胞浸润 20 20 0 2 1 0 0 0 1 0 肝细胞内脂滴空泡形成 20 20 2 2 4 4 4 5 2 4 前列腺 组织中慢性炎细胞浸润 0 20 0 1 0 0 0 0 0 0 膀胱 组织中慢性炎细胞浸润 20 20 0 0 1 1 0 1 0 0 甲状腺（含甲状旁腺） 滤泡内无胶质或胶质稀薄 20 20 1 0 2 1 1 1 2 1 病变未见明显病变的脏器组织 胸腺、主动脉、胃、小肠、大肠、睾丸、附睾、胰腺、肾上腺、脑、脊髓（颈胸腹段）、脑垂体、宫颈、卵巢、子宫、皮肤、乳腺、坐骨神经、肌肉、唾液腺（颌下腺）、肠系膜淋巴结、气管、食管、胸骨（骨髓）