两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较

两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较 . . 第 卷 第 期 器官移植. 年 月实验研究两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏 保护作用的比较 王淼 庞文帅 王洋 窦剑 【摘要】 目的 探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为 后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法。方法 制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝 脏灌注模型,分为实验组 经门静脉和腹主动脉灌注法, 只 ;对照组 经门静脉、腹主动脉及肝 动脉灌注法, 只 ,灌注后取出肝脏置于 ?威斯康星大学保存液保存, 后切取肝组织。行苏 木素一伊红 染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子 一 法 的表达情况。结果 经 冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示:肝脏小叶结构紊乱, 肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱 落,但两组之间无明显差别。两组之间 阳性表达率差异无统计学意义.。结论 经 门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大 鼠肝脏的保护作用无差 异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用。 【关键词】 肝脏灌注;肝脏保存;肝脏损伤;核因子一 ;大鼠 【中图分类号】【文献标志码】 【文章编号】 ? , ? , , . , ,,:, : 【 】 , . . , : ,, . , . . .,, , , .. ? .. . ,’ . 【 】; ;; ; : ./. . . . . 作者单位: 石家庄,河北医科大学第三医院肝胆外科 王淼、王洋、窦剑 ; 河北医科大学病理教研室 庞文帅为研究生 通讯作者:窦剑,:.? 器官移植 第 卷 肝移植是治疗终末期肝病的最佳方法,而供肝 韧带及镰状韧带,结扎并离断左膈静脉、下腔静 损伤是影响移植肝预后的重要因素,它可导致移植 脉、门静脉。两组取出肝脏后置于 ? 液中 肝失功能? 。适当的器官保存方法可最大限度地 保存。 减少缺血对离体器官造成的损伤,使移植器官在术 . 标本取样与检测 后迅速恢复功能 。移植器官的保存问题仍然是 . . 标本取样 两组大鼠的肝脏分别于 ?冷 一 大难题,如何降低供器官的缺血损伤备受学者关 保存 后,切取肝脏左叶 × / 大小组织, 注。目前有多种灌注方法,但各自存在利弊,故尚 置于 %多聚甲醛浸泡, 后 用石蜡包埋待检。 未形成统一的大鼠肝脏实验中肝脏的灌注方法标 . . 组织病理学检测 两组大鼠肝脏标本石蜡 准。本实验的意义在于研究不同的灌注方法,为进 块作横切面连续切片,厚度 ,常规行苏木素一 行器官保存实验提供较为简单且有效的灌注方法, 伊红 染色,观察肝组织病理损伤情况。 进而减少实验操作困难及操作步骤。 . . 核因子一 的检测 两组大鼠肝脏取经石 蜡包埋的肝组织切片行核因子 一 免疫组 材料及方法 织化学染色法 。严格按照 试剂盒 . 动 物 说明书步骤操作。以肝脏涂片细胞包浆着色呈棕黄 选用普通级 系雄性大鼠 只,鼠龄 ~ 色为阳性。计算 ? 阳性率,应用光学显微镜周,体质量 体重 ? ,由河 北医科 观察含阳性细胞最多的 个高倍视野 × , 大学实验动物饲养中心购进。将 只大鼠按随机 计算阳性百分比。 数字表法分为对照组和实验组各 只。动物实验 . 统计学方法 方法符合动物伦理学要求。 采用 . 软件进行统计处理。计数资料 . 保存液 采用.检验比较两样本频数资料。 威斯康星大学保存液, . 为差异有统计学意义。液 购自百时美施贵宝公司,产品标准编号结 果 / ,批号 ;离体肝保 存用枸橼酸盐嘌呤溶液 , . 组织病理学检测结果 液 购自上海长征医院,产品标准编号南制 两组大鼠肝脏组织病理示:肝脏小叶结构紊 字,批号。 乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央 . 动物模型的制备 静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并 制备两种不同大鼠肝脏单纯冷保存离体灌注模 脱落,但两组之间无明显差别 见图 。 型,分为实验组 经门静脉和腹主动脉灌注法 . 核因子一 的表达 和对照组 经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注 两组肝脏切片细胞包浆着色呈棕黄色为阳性 法 。实验组大鼠术前 禁食、不禁水、称重,术 见图 。冷保存 的 . 阳性表达率:对 前 经左下肢肌内注射肝素 / , 照组 % ~ %,中位数 %;实验组 %~%水合氯醛 . / 经腹腔麻醉,麻醉满 %,中位数 %。与对照组比较,实验组肝脏涂 意后,取腹部 “十”字形切口进入腹腔,分离腹 片 . 阳性表达率差异无统计学意义. 。 主动脉,经腹主动脉插管,灌注 ? 液 讨 论 ,游离门静脉,经门静脉插管,灌注 ? 肝移植作为治疗终末期肝病、急性肝衰竭、先液,同时打开流出道即剪开大鼠心脏,边灌注 边放血,至肝颜色变淡呈均匀土黄色,分离左右三 天性及代谢性肝病和部分肝脏肿瘤的最为有效手段 的地位已被公认 ,并已在全世界范围内广泛开 角韧带及镰状韧带,结扎并离断左膈静脉、肝动 脉、下腔静脉、门静脉,防止灌注液流失。离断胆 展。肝移植术后相关并发症仍在不断困扰着医务工 作者,而并发症的发生在一定程度上与供肝保存期 道,完整切取肝脏。对照组在打开流出道前由肝动 脉穿管灌注 ? 液,打开流出道,边灌注边 间组织缺血缺氧及移植后再灌注损伤之间存在着密 放血,至肝颜色变淡呈均匀土黄色,分离左右三角 不可分的联系 。