提高黄牛胚胎移植妊娠率的几项技术措施

用黄牛做受体繁殖纯种奶牛和肉牛,是加快牛胚胎移植产业化进程的主要途径。目前,牛胚胎移植技术在我国正处于推广应用阶段,其技术操作程序已逐渐成熟,在小规模应用中的移植成功率已达畜牧业发达国家水平,但在大规模生产中,由于地方黄牛饲养技术落后,其生存条件和营养水平又各有差异,母牛体况和繁殖性能普遍较差,以至移植成功的总体效率较低。因此,改善和提高黄母牛的体况和繁殖性能,以提供足够合适的个体作受体,对提高牛胚胎移植率有着极其重要的意义。笔者通过对贵州本地黄牛进行胚胎移植生产实践结果表明,采取补饲,净化 生殖道,利用激素处理及加强受体牛移植后饲养管理的技术措施能显著提高农养黄母牛受体利用率和移植妊娠率。 1补饲 受体牛的营养状况直接影响其繁殖机能,对受体母牛加强饲养管理应以增加营养,恢复膘情为主。我国本地黄牛数量多,便宜,饲养成本低,选择面大,可为胚胎移植提供用之不尽的受体。但地方黄牛多以放牧为主,管理粗放,饲料单一,母牛带犊哺乳,体质瘦弱,多数呈现为营养不良,必须经过补饲培育,才能达到受体牛的选择标准。 李树静等报道,放牧补饲牛群胚胎移植的成功率为48.5%,显著高于放牧不补饲受体牛的35.6%[1]。申子平等(2004)报道,在胚胎移植前补饲100d,本地黄牛体况合格率、黄体合格可移植率和移植妊娠率提高了25.63个百分点[2]。可见,除其他影响因素外,补饲是提高农养本地黄牛受体利用率,也是提高胚胎移植妊娠率的关键性技术措施之一。因此,对放牧受体黄牛需进行补饲,增加饲料中营养含量,补充微量元素和维生素A、D及E等。下面的饲料配方可参考:玉米40%,豆粕20%,麦麸36.7%,磷酸氢钙2%,食盐1%,硫酸钠0.2%,微量元素添加剂0.1%。即饲料中能量、 蛋白和微量元素添加剂分别应达到6.8MJ/Kg,17.5%和0.1%为宜。 2生殖道净化处理 母牛生殖系统疾病是影响胚胎移植妊娠率的主要因素之一。据报道,地方黄牛约有70%患有各种生殖道疾病,其中某些疾病会导致母牛性周期紊乱,屡配不孕或流产。在农村,由于输精器械消毒不严,助产不当或本交不卫生等原因,有可能将致病菌带入宫腔使母牛患上各种生殖道疾病,可直接使精子、合子和胚胎致死。尤其是经产母牛, 其子宫自净和复旧能力随配种次数和妊娠次数的增加而下降,很易患上卵巢炎、子宫炎及炎等生殖道炎症,并以卡他型为多,症状不明显,易被忽视。据调查,母牛产后20~ 30d,其生殖道疾病发病率高达65.6%[3]。生产实践,在配种输精前或后,净化生殖道内环境是提高黄牛冷配受胎率的有效技术措施。孙耀华(2002)报道,对屡配不孕母牛,用7%葡萄糖加青霉素80万IU和链霉素100万IU,混匀后一次注入子宫,受胎率可提高27.5%;对患有子宫炎的母牛,配种一次子宫注入“宫得康”1~2支,均可治愈,且受胎率可提高28%以上[3]。在胚胎移植中,对选作受体 的黄牛,无论是否明显患有生殖道炎症,都可在移植前7~ 10d,选用广谱抗菌素,如红霉素100万IU或青霉素200万IU。链霉素100万IU加稀释液20~40ml或0.2%碘甘油50~100ml注入子宫,可起到防炎抗炎的双重效果,能有效提高胚胎移植妊娠率。 3利用生殖激素 生殖激素能直接作用于动物的生殖系统,并以调节生殖过程为其主要生理功能。而生殖激素分泌不平衡或分泌紊乱,常常是造成家畜不育的主要原因。例如雌激素或促 乳素分泌不足时,家畜发情就不明显甚至安静发情,而妊娠期孕酮分泌不足常常是造成家畜流产的主要原因。近年来,在应用各种生殖激素及其人工合成类似物控制母畜的繁殖活动方面,取得了实用性的进展。如利用PGF2α溶解黄体的功能,可促使母畜发情,FSH则能促使卵巢排卵,而孕酮则具有维持妊娠,防止母畜流产的功能。在牛胚胎移植中,生殖激素应用于受体母牛,一方面可以直接调节母牛的发情、排卵、胚胎在子宫内的附植、怀孕、分娩等功能,一方面还能进一步防治母牛生殖疾病。生殖激素在生产实际中主要用于以下几方面: 母牛产后康复。可在母牛产后次日肌注氯前列烯醇0.2~0.4mg;或在母牛产后30d用氯前列烯醇0.2mg,间隔12d再重复1次;或在母牛产后40d左右肌注促排3号(LRH-A3)10ug,间隔6d肌注氯前列烯醇0.2mg,再间隔1d 肌注促排3号10ug。据戎再富(2001)报道,上述方法对促进乳汁分泌和子宫复旧效果明显,尤其对下胎繁殖具有较多的正面作用,且受胎率可显著提高20%以上[4]。②卵巢静止。可用GnRH肌注,每次400~500ug,连用2次,间隔10d;或用FSH(促卵泡素)200IU加LH(促黄体素)100IU,一次肌肉注射;或用PMSG(孕马血清)1000IU,一次肌肉注射, 一般于注射后3d内发情。③持久黄体。可用OT(催产素)400IU分2次肌肉注射,或用苯甲酸雌二醇20~30mg 肌注,每日2~4次,连用3d,以诱导黄体消退和发情。用上述方法处理后,受体母牛基本上能够恢复正常的繁殖生理状况,于第二情期即可进行统一同期发情处理。除此之外,因黄体产生的孕酮是决定子宫生理状态的主要激素,它对妊娠的建立和维持是必不可少的,故可采用补充孕酮或LH、HCG和促乳素的方法增加内源性孕酮的水平,生产中常用孕酮100~160mg于移植后10~15d肌注,以达到提高胚胎成活率的目的。 4加强移植后饲养管理 移植后,胚胎要在受体子宫内完成着床及生长发育直至分娩全过程。此时,受体母牛营养水平的高低都会影响胚胎的生存。因此,加强移植后受体母牛的饲养管理对于提高胚胎移植成功率起着极其重要的作用。生产中,对移植后受体母牛的饲养应根据妊娠母牛的营养需要,供给适宜的营养。由于高能量对胚胎质量有副作用,血糖浓度高会使胚胎发育能力降低,因而妊娠早期应加以限饲,妊娠的能量需要只在妊娠的最后4~8周才明显增加,一般从妊娠的第210d开始考虑妊娠需要[5]。妊娠的能量需要约为 维持能量需要的30%,具体数量按每千克代谢体重(W0.75)需要0.1MJ产奶净能计算。至于蛋白质的需要,因瘤胃微生物的作用,妊娠母牛对蛋白质的品质要求一般不高,但蛋白质的数量与繁殖性能指数明显相关,体重550kg的妊娠母牛,在妊娠最后的6~9月这4个月的饲粮中对粗蛋白质要求是分别含602g、669g、780g和928g。对于矿物质, 1头体重40kg的初生犊牛,体内约含540g钙,约有75%是妊娠最后2个月内沉积的。我国牛饲养标准规定,体重550kg妊娠母牛在妊娠最后4个月的饲粮中钙、磷含量分别为39g和27g,43g和29g,49g和31g及57g和34g,钙磷 比为1.44~1.68∶1。对于其他微量元素和维生素,锰、碘、锌、硒、铜的需要量按风干日粮(mg/kg)计分别为16mg/kg、0.4~0.8mg/kg、40.0mg/kg、0.13~0.15mg/kg和4~ 10mg/kg,维生素A、D、E的需要量分别为每日48263IU、19051IU和70IU。移植后,受体母牛应精心饲养。早期要限饲,以防止能量、蛋白质水平过高而引起胚胎早期死亡和流产,但日粮中应搭配营养全面的饲料。移植90d后进行妊娠检查,对确诊已妊娠的受体牛要加强管理,合理搭配日粮,增加能量和蛋白质水平,补充维生素A、D、E、B2和微量元素,保持中等以上膘情。同时应禁止使役、鞭打 和剧烈运动,做好保胎防流产等,并按预产期做好接产和仔畜护理。 5小结 母畜的繁殖生理状况要受到营养、内分泌激素水平、环境和生殖道疾病等多种因素的影响,其中以营养因素最为重要。在胚胎移植生产中,补饲对恢复受体母牛的体况和改善其生殖机能有显著的效果,尤其是对产后母牛和营养水平较差的母牛。但对患有生殖道疾病和生殖机能减退或紊乱的母牛,还必须进行清宫和激素处理以进一步改善 和恢复其正常的生殖生理机能,才能保证同期发情以取得好的效果,为移植胚胎创造良好的子宫内环境。除此之外,移植后的胚胎要在受体体内正常生长发育直到分娩,加强对移植后受体母牛的饲养管理就显得格外重要。