食管鳞癌细胞周期调控基因CyclinD1蛋白和增殖细胞核抗原的表达

食管鳞癌细胞周期调控基因CyclinD1蛋白和增殖细胞核抗原的达 (渐形成混合血栓。 当颈动脉血管内因血栓形成而堵塞, 脑血康组能够明显延长血栓形成时间 P 对照组比较 ( ) < 0101, 脑康复冲剂中、大剂量组亦见明显作用 <血流时, 则血管远端温度突降。用温度传感器监测血管 P () )表面的变化, 通过仪器自动报警, 记录从刺激开始到温 0101 , 小剂量组也有显著作用 < 0105。 与脑血康 P () 度突降所需时间, 称堵塞时间 即 , 组比较, 脑康复冲剂三个剂量组和脑血康组比较无明 O T O cc lu sio n t im e 血栓形成时间, 以值作为判断药物作用的指标。与显差异。O T ()脑康复冲剂对大鼠实验性动脉血栓形成的影响 ? 表 4 X S ()组 别例 数剂 量值 O T S 10 生理盐水对照组809130?112170 ƒKg 10m l 1116140?3781573 3 脑血康组 脑康复2100ƒ10 gKg 小剂量组 939170?2671873 10 2170ƒk Kg 1024150?3251433 3 中剂量组 10 5140ƒgKg 大剂量组 1237170?3491493 3 10 10180ƒgKg 与对照组比较: 3 105 3 3 101< 0< 0P P 3 讨 论观察脑康复冲剂对血阏型动物血液流变性的影响, 实 现代医学认为, 脑血栓形成的病因为脑动脉粥样验结果表明, 脑康复冲剂具有降低血液粘度、抑制体外 硬化。 发病涉及三个重要因素, 包括血流动力学的改 血栓成、降低血小板聚集性的作用。体内血栓实验采用 变, 如低血压、心脏功能障碍, 引起血流流动缓慢; 血液 电连续刺激使血管内膜损伤, 激活血小板和疑血系统理化特性和血液成分改变, 如血液粘度增高或血液凝 活性, 同时损伤血管内皮细胞, 使血管内逐渐形成血 栓, 而脑康复冲剂能明显延长血栓形成时间。本实验证 固性异常等导致血栓形成; 血管壁的完整性, 如有血管 壁病变, 其表面常有血小板、纤维蛋白、胆固醇等沉积 明, 脑康复冲剂能明显延长血栓形成时间, 提示对脑血 而形成血栓。高血压、高血脂或糖尿病可加速动脉硬化 管疾病的治疗作用及抑制动脉血栓的形成与降低血液 的发展。 粘度改善血液流变性有关, 其次与活血化瘀药改善微 循环有关。实验结果表明该药具有活血化瘀的功效, 为 中医学认为中风病发病与“风”、“火”、“痰”、“瘀” 等因素有关, 气血失调、气虚血瘀是其的病机。 脑康复 进一步临床观察提供了良好的药理学基础。 冲剂由三棱、莪术、川芎组成。具有破血祛瘀, 行气止痛 参考文献: 1 翁维良, 廖福龙, 吴云鹏编著 1 血液流变学的研究方法和应的功效, 三棱、川芎为血中之气药, 三棱破血消积, 常与 用 []1 北京: 科学出版社, 199012341m 莪术合用, 以加强破血作用, 川芎行气活血上行颠顶, 2 刘剑刚, 许秀森 1 脑康复冲剂对大鼠软脑膜微循环作用的 下行血海。 脑组织缺血损伤的发生及其随后变化的主 () 实验研究 []1 中国微循环, 1998, 24: 2191J 要原因为低灌流状态, 药理学实验表明, 脑康复冲剂具 [ 2 ] 有改善大鼠的脑微循环状态, 增加脑血流量, 本试验 () 文章编号: 1006—6233 200001—0010—05 食管鳞癌细胞周期调控基因 1Cyc l inD 蛋白和增殖细胞核抗原的表达 1 2 3卢宝安, 韩英杰, 任秀宝 )( 301600 , 天津静海11 天津市静海县医院普外科 ( ) 303001 21 天 津 医 科 大 学 病 理 科, 天津 ( )31 天 津 肿 瘤 医 院 放 免 科, 天津300060 ( ) 摘 要: C yc 1 A 目的: 探讨 linD 和增殖细胞核抗原 PCN在食管鳞癌, 癌旁正常上皮和非典型 增生上皮的表达特点, 并了 1 在食管鳞癌发生, 发展中的作用及与临床病理特点的关系。C yc linD 方法: 应用免疫组织化学 —法对 82 例食管鳞癌, 33 例非典型增生上皮和 23 例正常粘膜上皮进行SP 了 1 和 检测。 结果: 82 例食管鳞癌中 57 例阳性表达, 阳性率为 6915% , 非典型增生组 C yc linD PCN A ( ) ( ) 阳性率为 3614% 12ƒ33, 正常粘膜上皮阳性率为 817% 2ƒ23, 的平均阳性率在三组分别为PCN A 7516% ?1315% , 3616% ?918% , 415% ?015% , 食管鳞癌中 1 和 表达有显著的正相C yc linD PCN A () () 关 < 0105, 1 和 的表达与组织学分级有关 < 0105, 而与其它临床病理特征无关。 P C yc A P linD PCN ( ) 结论: ?食管癌组 1 阳性率显著高于非癌组, 且非典型增生组亦明显高于正常组 < 0105,C yc linD P 提示 1 在食管鳞癌的发生, 发展中起重要作用。 ?1 可作为提示食管鳞癌预后的参考 C yc linD C yc linD 指标之一。 关键词: 食管鳞癌; 1; C yc linD PCN A 中图分类号: 73511文献标识码: B R 1 Expre ss ion of Cyc l inD an d pro l if era t in g ce ll n uc lear an t igen in e sophagea l carc in om a 1 2 3- , - , - L U B a oa n H AN Yin g j ieR EN X iu ba o (, , 11 D ep a r tm en t of G en e ra l S u rg e ry J in g h a i C ou n ty H osp ita l of T ia nj in J in g h a iC h i2 )301600n a ( )2. , , , 300100D ep a r tm en t of p a th ology T ia nj in M ed ica l U n iv e rs ity T ia nj in C h in a ()3. , 300060 O n coloy y H osp ita l ofT ia nj in C ity T ia nj in C h in a A bstra c t: O bjec t ive: T o stu dy th e exp re ssio n o f C yc linD 1 an d p ro life ra t in g ce ll n u c lea r an t igen () PCN A in e sop h agea l ca rc inom a an d it s co r re la t io n w ith c lin ic2p a tho lo g ic fea tu re s. M e thod: Imm u no 2 21 h isto ch e m ica l a ssay w a s p e rfo rm ed w ith a SP k it to de tec t th e exp re ssio n o f C yc lin dan d PCN A in 82 , 23 33 . ca se s o f e sop h agea l ca rc inom aca se s o f no rm a l ep ith e lium an d ca se s o f a typ ica l h yp e rp la sia : ?57 , 12 2 Re sultsca se s o f e sop h agea l ca rc inom a ca se s o f a typ ica l h yp e rp la sia an d ca se s o f no rm a l 1, 6915% , 3614% 817% ?ep ith e lium exp re ss C yc linD th e ir po sit ive ra te s a re an d re sp ec t ive ly a ll ca se s , 6714% ?o f e sop h agea l ca rc inom a exp re ss PCN A it s m ean po sit ive ra te is T h e sta t ist ica lly sign if ican t 1?a sso c ia t io n is fo u n d b e tw een th e exp re ssio n o f C yc linD & PCN A an d h isto lo g ica l g rade th e sta t ist i2 1 ca lly sign if ican t a sso c ia t io n is fo u n d b e tw een th e exp re ssio n o f C yc linD an d th e exp re ssio n o f PC 2 1??: 1 N A Con c lus ionC yc linD m ay p lay an im po r tan t ro le in e sop h agea l ca rc inom a gen e sis Com b in a2 1 t io n o f C yc linD an d PCN A exp re ssio n seem s a re liab le p a ram e te r fo r ju dg in g m a lign an t deg ree o f .e sop h agea l ca rc inom a : ; 1; Key word sE sop h agea l ca rc inom a C yc linD P ro life ra t in g ce ll n u c lea r an t igen 1 1 是细胞周期素基因家族的成员之一, 在材料与方法C yc linD 调控细胞周期中起重要作用, 主要在细胞周期的 1 111 材料来源: 收集本院 1990 年存档蜡块 82 例, 均 G1 ( 期 表达, 与周期素依赖的蛋白激酶 主要是 和 4 经组织病理学检查证实为食管鳞状细胞癌, 其中高分 CD K ) 形成复合物并使 基因产物磷酸化而促进细 化 18 例, 中分化 41 例, 低分化 23 例; 男性 48 例, 女性 6CD K R b 胞从 期进入 期。由于在一些恶性肿瘤中发现 34 例, 年龄从 25 岁至 75 岁, 平均年龄 5613 岁, 82 例 G1 S C y2 基因存在过表达, 1 已被认为在肿瘤的 标本中存在癌旁组织材料的有 56 例, 其中 33 例有不 1 c linD C yc linD 1 发生, 发展中起作用。 同程度的非典型增生, 轻度非典型增生 11 例, 中度非 典型增生 14 例, 重度非典型增生 8 例。 本文应用免疫组织化学技术检测食管鳞癌及癌旁 正常和非典型增生上皮 的蛋白和增殖细胞 1 112 免疫组织化学染色: 所有组织材料均经 10% 中C yc linD () 核抗原 的表达, 并比较二者与临床病理特征性福尔马林固定, 石蜡包埋, 做 4厚连续切片, 备染 PCN A Λm 常规 及免疫组织化学染色。 —抗来源及工作浓度的关系, 探讨 在食管鳞癌发生, 发展中的可 1 H E C yc linD 能作用及其病理学意义。 见表 1, 免疫组织化学染色方法采用 SP 法, SP 试剂盒 系 San ta c ru z 公 司 产 品。 C yc linD 1 需 用 微 波 抗 原 修 PCN A 阳性指数也较高。 复。染色步骤如下: ?切片常规脱拉蜡至水, 充分水化。212 1 在食管鳞癌, 癌旁非典型增生及癌旁 C yc linD ()?洗 5’×3。?微波抗原修复 1 适用。? 正常粘膜上皮的表达 PB S C yc linD 洗 5’×3。?3% 过氧化氢甲醇溶液阻断 10’。 ? 82 例食管鳞状细胞癌有 25 例表达阴性, 其余 57PB S ( ) 洗 5’×3。 ?5% 猪血清封闭 30’室温。 ?倾 例为 阳 性 包 括 中 等 或 强 阳 性 和 弱 阳 性, 阳 性 率 为PB S ( ) 去血清, 加一抗 4?过夜。 ?洗 5’×3。 β滴加二6915% , 其中, 中等或强阳性表达 21 2157例, 弱阳 κƒPB S () () 性 36 3657例。在癌组织, 癌旁非典型增生1 ƒ抗 生物素化的 室温孵化 30’。 β洗 5’×3。λC yc linD IgGPB S () 上皮和正常上皮的表达规律见表 2, 由表 2 可知癌组 β 滴加三抗 室温孵育 30’。β 洗 5’µνS t rep tav id in PB S ( ×3。 β显色, 水洗 终止。 β’苏木素染 织 中 表 达 强 度 明 显 高 于 非 癌 组 织 <οπ1 DA B M ayo rs C yc linD P ) 0105, 而癌旁非典型增生上皮的表达强度也高于正常 核, 脱水透明, 中性树胶封片。 ()113 阳性染色结果判定: 在不知道任何临床和病理资 上皮组织 < 0105。P 213 料的情况下, 对免疫组化染色进行观察判定, 以在肿瘤 在食管鳞癌, 癌旁非典型增生及癌旁正PCN A 细胞胞核出现棕黄色颗粒, 其着色强度高于背景非特 常粘膜上皮的表达 异染色者判定为阳性。 82 例食管鳞状细胞癌均表达 其平均阳性 , PCN A 率为 7516% ?1315% ; 癌旁非典型增生上皮亦均不同 114 对照: 以正常猪血清代替—抗作阴性对照, 以乳 腺癌作 和 的阳性对照。1 程度的表达 平均阳性率为 3616% ?918% ; 轻 , C yc linD PCN A PCN A 115 1 免疫组化染色结果评估: 采 用 C yc linD G ille t t度非典型增生上皮的阳性率为 1914% ?113% , 中度 2 . 等的评估办法, 即 的染色强度的判定依 1 非典型增生的阳性率为 2118 ?318% ; 而重度非典型CC yc linD 据多数着色细胞胞核的阳性着色强度而定, 在此基础 增生的阳性率达 6816% ?1011% ; 癌旁正常上皮 PC 2 阳性细胞较稀少, 且位于上皮的基底细胞层。上将全部病例分为三组: ?无着色, 即阴性; ?弱的细N A 214 食管鳞癌 表达与临床病理特征的关系 1 胞核着色: ?中等或强的细胞核着色, 提示 1C yc linD C yc linD 的过表达。尽管有的病例有时出现胞浆着色, 但未做评 食管鳞癌 表达与临床病理特征的关系1 C yc linD 估。 见表 3。 由表 3 可知 的表达强度与年龄, 性 1 C yc linD () 116 阳性指数 的确定: 用目镜网格测微 别, 肉眼类型, 临床病理分期和有无淋巴结转移无关, PCN A PL I 尺对每例的 免疫组化染色片在 400×视野下任而与组织学分级有关, 中低分化鳞癌 的表达 1 PCN A C yc linD ()强度明显高于高分化者 < 0105。 取 10 个不重复视野, 记数每个视野在网格内癌细胞总P () () 215 食管鳞癌 表达与临床病理特征的关系 食数 及 阳性癌细胞数 。 并计算出每例单PCN A N PCN A n 管鳞癌 表达与临床病理特征的关系见PCN A ( ) 位 网 格 内 癌 细 胞 总 数 及 阳 性 癌 细 胞 总 数6 N 表 4。 由表 4 可知 PCN A 表达强度与组织学分级有关( () 并用: 阳性指数 , 6n PCN A PCN A L ab e llin g() < 0105, 而与其它临床病理特征无关。P ( ( ) ) ) ƒ× 100% , 求 出 每 例 的216 食管鳞癌 表达与 表达间的关 , = 1 6 n 6 N In dex PL IC yc linD PCN A 阳性指数。PCN A 系结果见表 5。 117 统计学处理: 采用卡方检验。3 讨 论 2 结 果细胞周期素基因家族在细胞周期的调控中起重要 211 1 及 免疫组化染色的形态学特点(C yc linD PCN A 作用。其基因产物可以和周期素依赖的蛋白激酶 CD 2 ) 的阳性染色主要位于癌细胞的胞核, 有1 C yc linD K S 相结合形成复合物来调控细胞周期的演进。C y2些细胞的胞浆也存在着色。 高分化鳞状细胞癌阳性癌是在细胞周期 期表达的一种细胞周期素, 1 1 c linD G 细胞主要分布于癌巢的周边部, 即相当于基底细胞的 其基因产物可以和 及 相结合, 并使 4 6 CD K CD K R b 3 肿瘤细胞, 往往散在分布: 中分化和低分化的鳞癌其阳 基因产物磷酸化, 从而促使细胞由 期进入 期。1 GS 性细胞常弥漫分布, 部分呈散在分布。 肿瘤的发生是一多因素参与的多步骤的复杂生物 的阳性染色位于癌细胞的细胞核, 胞浆无 学过程, 已证实细胞周期失控是肿瘤发生的重要原因 PCN A 着色。 在对 阳性细胞分布特点的观察中, 发现之一, 而影响细胞周期失控的主要因素之一是正向调 PCN A 阳性细胞多密集分布于癌巢的周边部, 愈靠近节基因的失控表达, 1 即处在正向调节细胞周 PCN A C yc linD 间质, 则 表达愈强, 阳性细胞愈密集相反, 愈靠期的关键点处。由于在一些恶性肿瘤, 如乳腺癌, 肺癌, PCN A 4 , 6 近癌巢中央, 则 阳性细胞愈稀疏, 表达强度也膀胱癌中已发现 基因扩增, 所以有学者 1 PCN A C yc linD 阳 性 细 胞 分 布 较 均 匀, 且愈 弱。 较 小 的 癌 巢 将其归为一种癌基因。另外PCN A , 一些体外实验和动物实验 结果也支持这一观点。 本研究 82 例食管癌中有 57 例即高增殖活性的癌细胞并不一定具有很强的转移能 表达 阳性率达 6915% , 远远高于癌旁正常 力。1, C yc linD 本研究结果中有一点值得注意, 表达 1 的 粘膜上皮和癌旁非典型增生上皮。同时, 我们还观察到 C yc linD 癌旁非典型增生上皮 的表达强度高于正常 食管癌的 阳性指数明显高于 表达阴 1 1 C yc linD PCN A C yc linD 粘膜上皮。这些实验结果说明 在食管鳞癌的 1 性者, < 0105。此结果提示 的表达与癌细胞 1 C yc linD P C yc linD 发生, 发展中起到一定作用。 本实验还显示 的增殖活性有关。 总之, 我们认为 和 11 C yc linD C yc linD PCN A 的表达强度与有无淋巴结转移, 临床病理分期, 肉眼类表达均可作为判断肿瘤预后的辅助指标, 二者均为阳 型, 年龄和性别无关, 而与组织学分级有关, 这一结果 性提示预后不良。 提示食管癌中 表达可以作为判断患者预后1 C yc linD 表 1 一抗来源及工作浓度 的辅助指标之一。 () 增 殖细胞核抗原 是一种分子量为 36PCN A KD一抗名称来源工作浓度 的 酸 性 核 蛋 白, 是 多 聚 酶 的 辅 助 蛋 白, 起 调 节DN A ?251C yc linD 1 San tac ruz 多聚酶 活性的作用, 随细胞增殖周期的DN A ? PCN A ?1001PCN A San tac ruz 不同而变化, 1 后期开始增加, 期达高峰, 参G S PCN A 与 合成, 而 合成又是细胞分裂增殖的必要DN A DN A 表 2 不同组织 Cyc l inD 1 的表达 条件, 因此, PCN A 与细胞增殖关系密切, 可作为评价 肿瘤细胞增殖状态的重要指标, 也在某种程度上反映 C yc linD 1 表达 ()组织类型例数 阳性率 % 7 了肿瘤的恶性度。本研究表明, 表达强度与食PCN A + - 管癌的组织学分级有关, 而与有无淋巴结转移等其它 23 817# 正常粘膜上皮21 2 非典型增生 临床病理特征无关, 提示 表达强度可作为判断 PCN A 33 21 12 36143 癌组织 患者预后的一个辅助指标, 另外也提示我们食管癌癌 82 25 57 69153 细胞的增殖特性与转移特性在某种程度上是分离的,3 105# < 0v sP 表 3 Cyc l inD 1 表达与临床病理特征的关系 C yc linD 1 ()临床病理特征例数阳性率 % - + + + 组织学分级 高分化 中18 44143 10 4 4 分化 低分73123 3 41 11 19 11 化 临床分23 4 9 10 82163 3 期 早期 中期 晚期 6810 25 8 9 8 淋巴结转移 有 36 11 16 9 6914 无 肉眼类21 6 9 6 7114 型 髓质型 蕈伞型 溃14 6746 15 9 8 7 疡型 缩窄 36 10 10 16 7212 型 其他 6914 49 15 19 15 10 3 3 4 7010 6316 11 4 4 3 6010 5 2 1 2 7 2 3 2 7114 3 3 3 105< 0v sP 表 4 PCNA 阳性率与临床病理特征的关系 参考文献: ()临床病理特征例数% PCN A L I , , , , , 1 F an t l V Sm ith R B roo k e s SD ick so n C P e te r s GC h rom o 2 组织学分级 1113 [. som e qabno rm a lit ie s in h um an b rea st cance r J C an2 高分化 18 13?11123 44 , 9411993, 18: 77ce r Su rv 中分化 6711?3103 3 41 , , , . 1 2 G ille t t C Sm ith P G rego ry W e t a lC yc linD and p ro gno 2 低分化 7519?8123 3 23 () [. 1996, 69:sis in h um an cance r J In t J C ance r P red O nco l 临床病理分期 92, 99早期 , , , , 1 3 B a r tko va J L uk a s J S t rau s M B a r tek J C yc linD o nco 2 25 6013?314 中期 晚期 6517?211 p ro te in abe r ran t ly accum u la te s in m a lignanc ie s o f d ive r se 淋巴结转移 36 7512?1213 [. 1995, 10: 775, 778h isto gene sisJ O nco gene 有 21 , . 1 4 C h e t ty R C h e t ty SC yc linD and re t ino b la stm a p ro te in ex2 无 肉眼类 1[ ] p re ssio n in o e sop h agea l squam o u s ce ll ca rc inom a J C lin 型 髓质型 46 6713?214 1997, 50: 257, 262蕈伞型 溃p a tho l 7013?1315 36 疡型 缩窄,. , 53 5 Kw a HB M ich a lide s R JP ro gno st ic va lue o f N CM P and 型 其他 1 [, 1996, 14:cyc lindin re sec ted no n sm a ll ce ll lung cance r J 49 6018?1113 207, 210 7011?1014 10 , , , . L ee CCR Yam am o to SM o r im u ra K e t a lS ign if icance o f 6 5919?512 1 cyc linD o ve rexp re ssio n in t ran sit io na l ce ll ca rc inom a o f 11 5813?413 th e u r ina ry b ladde r and it s co r re la t io n w ith h istop a tho lo g ic 5 7613?215 [. , 1997, 79: 780, 786 fea tu re sJ C ance r 7 , C a rm en C U p da te o n p ro life ra t io n a sso c ia ted an t ibo d ie s 7 3 3 3 105 < 0v sP 2app licab le to fo rm a linf ixed p a r raff inem bedded t issue and 表 51 表达与 表达的关系Cyc l inD PCNA [ . 1993, 25: 843, th e irc lin ica l app lica t io n s J H isto ch em J ()()例数 = 82 % C yc linD 1 表达 848 n PCN A L I () 收稿: 1999—09—21; 修回: 1999—10—07- 25 13?1011 50 ( 作者简介: 卢宝安, 男, 34 岁, 天津蓟县人, 1987 年毕业于+ —+ + 8012?817 57 )天津医科大学, 现为天津蓟县医院普外科主任医师 < 0105P () 文章编号: 1006—6233 200001—0014—04 大白鼠闭合性脑损伤后神经细胞的凋亡 1 2 2杨静, 蔡宏伟, 谭秀娟 )( 100730 北京11 北 京 同 仁 医 院 麻 醉 科, ( )21 湖南医科大学附属湘雅医院麻醉科,湖南长沙410008 摘: 目的: 本实验在改良前脑局部闭合性脑硬膜外占位性颅脑损伤的创伤性模型基础上研要 究神经元细胞调亡。方法: 56 只W is ta r 大白鼠, 采用球囊注水在脑硬膜外造成占位及持续时间不同所 () 形成的分级脑外伤, 饲养 2后脑标本采用原位末端标记 法进行 阳性细胞的检测。 结 d TU N EL PCD 果: 40 只存活鼠中, 实验组损伤周围有 阳性细胞的表达, 在对侧及未损伤区几乎无表达。本实TU N EL 验造成脑损伤的机制中除直接受压区的坏死外受损周围区域有凋亡的参与。 提示凋亡可能是脑创伤 后脑损伤中神经元细胞死亡的方式之一。 关键词: 细胞凋亡; 脑损伤; 硬膜外球囊扩张; TU N EL 中图分类号: 32912 R 文献标识码: A The ev iden ce of n euron apop to s is in