高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱的含量

高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱的含量 高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱的含量 【摘要】 目的: 建立康妇灵胶囊的含量测定。方法: 采用高效液相色谱法。色谱柱: Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5μm，流动相: 乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)(16: 16:68)，流速: 1.0ml?min,1，检测波长: 220nm，柱温: 30?。结果: 苦参碱在0.02,0.40mg?ml,1范围内线性关系良好(r=0.9995);平均加样回收率为98.2%，RSD= 1.4%(n=6);氧化苦参碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内线性关系良好 (r=0.9997);平均加样回收率为97.6%，RSD=2.2%(n=6)。结论: 该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于康妇灵胶囊的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 康妇灵胶囊 苦参碱 氧化苦参碱 含量测定 Determination of Matrine Oxgmatrine content in Kangfuling capsules by HPLC 【Abstract objective】To set up a method for quality control of Fuyankang tablets. METHOD: HPLC method was developed to quantitative determination. The separation was -C18 4.6×250mm,5μm.The mobile performed on Agilent Technologies ZORBAX Extend phase was acetonitrile-methanol-phosphate buffer (pH=6.8) (16: 16: 68).The flow rate was 1.0ml?min-1 .The UV detection wavelength was 220nm. The column temperature was 30?.RESULTS: The linear range of Matrine and Oxgmatrine were at 0.02,0.40 mg?ml-1 (r=0.9995) and 0.01,0.20 mg?ml-1 (r=0.9997) respectively, the average recoveries(n=6) were 98.2% and 97.6% with RSD 1.4% and 2.2%. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of Kangfuling capsules. 【Key words】HPLC; Kangfuling capsules;Matrine;Oxgmatrine; Determination 康妇灵胶囊为《国家药品监督管理局(试行)》收载的品种，由苦参、杠板归、黄柏、益母草、鸡血藤、红花龙胆、土茯苓、当归等8种中药组成。具有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功效，为妇科常用中药[1]。苦参含有苦参碱、氧化苦参碱等成分，我们采用高效液相色谱法测定制剂中苦参碱、氧化苦参碱的含量，该项方法操作简便、快速、准确可靠，可用于康妇灵胶囊的质量控制。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LC-2017A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站。 1.2 试药 苦参碱对照品(批号: 100078-201714)，氧化苦参碱对照品(批号: 110780-201704)，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用;康妇灵胶囊为市售样品(贵州和仁堂药业有限公司，规格: 0.4g?粒,1，批号: 20171108，20171202，20171216)。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱: Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5μm，流动相: 乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)(16:16:68)，检测波长: 220nm，流速: 1.0ml/min，柱温: 30?。 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量，分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的对照品贮备液;再精密量取苦参碱对照品贮备液和氧化苦参碱对照品贮备液各适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.2mg、氧化苦参碱0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。 2.2.2 样品溶液的制备 取康妇灵胶囊10粒内容物，研细，取约 1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷(CHCl3)30ml，超声处理(功率250W，频率33KH2)20分钟，滤过，取滤液，再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次，每次5ml，滤过，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 取除苦参以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成片，再按样品制备方法，制成阴性对照溶液。 2.3 专属性试验 分别精密吸取样品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间(1氧化苦参碱: 6.866min;2苦参碱: 15.422min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。 2.4 线性范围考察 精密吸取对照品贮备液各适量，分别加甲醇配成浓度分别为苦参碱: 0.0 2、0.0 5、0. 10、0. 20、0.30、0.40mg?ml,1，氧化苦参碱: 0.0 1、0.0 3、0.0 5、0. 10、0. 15、0.20mg?ml,1的溶液，摇匀，滤过，精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，其浓度(C)为横坐标，线性回归，苦参碱回归方程为: A=4.34×105C，3.87×102，r=0.9995;氧化苦参碱回归方程为: A= 1.21×104C，8.07×102，r=0.9997。结果明，苦参碱在0.02,0.04mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系;氧化苦参碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。 2.5 精密度 取样品(贵州和仁堂药业有限公司，批号: 20171108)按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得苦参碱峰面积RSD为0.9%，氧化苦参碱峰面积RSD为 1.2%，表明精密度较好。