调经祛斑胶囊质量标准改进

调经祛斑胶囊质量标准改进 作者:谢志宏，何燕，倪庆纯，徐孟文，聂金媛，罗建春 【摘要】目的改进调经祛斑胶囊的质量标准。方法采用显微镜 法对处方中红花、手参、白芍进行显微鉴别;用薄层色谱法对女贞子、 当归、枸杞子、黄芪进行鉴别;用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷 的含量。结果显微鉴别、薄层色谱鉴别专属性强;建立的测定芍药苷 含量的HPLC法符合研究要求。结论该方法简便、准确、重现性好， 可作为控制调经祛斑胶囊质量标准的方法。 【关键词】调经祛斑胶囊手参当归枸杞子黄芪质量标准 ABstRact:OBjectiveToImPRovethequalitystandaRdofTiaojingquBancaPsules.MethodsSaffloweR,ConicgymnadeniaRhizome,RadixPaconiacAlBainthePRescRiPtionweReidentifiedundeRmicRoscoPe.LigustRumlucidumAit,ChineseAngelica,BaRBaRywolfBeRRyfRuit,RadixAstRagaliweReidentifiedByTLC.ThecontentofPaeonifloRinwasdeteRminedByHPLC.ResultsThechaRacteRisticidentifiedByTLCandmicRoscoPywasdistinctandhighlysPecific.ConclusionThemethodisconvenient,accuRateandRePRoduciBle.ItcanBeusedeffectivelyfoRthequalitycontRolofthecaPsules. KeywoRds:TiaojingquBancaPsules;ConicgymnadeniaRhizome;ChineseA ngelica;BaRBaRywolfBeRRyfRuit;RadixAstRagali;qualitystandaRd 调经祛斑胶囊由白芍等15味药材组成，用于治疗气血不足、气滞血瘀等证。研究发现原调经祛斑胶囊质量标准,1,中，当归显微鉴别特征不明显，当归和枸杞子TLC鉴别专属性和重现性较差，白芍含量限度低，且无主药黄芪的鉴别。根据组成药味的特点，本文采用显微鉴别对方中白芍、当归、手参及薄层色谱法对处方中女贞子、当归、枸杞子、黄芪进行定性鉴别，结果分离度好，专属性强;采用高效液相色谱法对白芍中芍药苷进行含量测定，测定结果可靠、准确、专属性强，可有效控制本品质量。 1仪器与材料 DIONEXP680高效液相色谱仪、HU 10260B超声清洗仪(戴安公司);调经祛斑胶囊、黄芪对照药材(广州白云山中药厂提供);阿魏酸(110773 991)、齐墩果酸(110709 200403)、芍药苷(110736 200422)等对照品及枸杞子(121072 200404)对照药材均购自中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯;乙醇等为分析纯。 2方法与结果 2.1定性鉴别 2.1.1白芍、红花,2,103、手参显微鉴别取本品，置显微镜下观察:花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起(红花);草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散 在，针晶长20,90μm(手参);草酸钙簇晶直径11,35μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行，或一个细胞中含数个簇晶(白芍)。结果见1。 2.1.2当归TLC鉴别,2,446-447取本品20粒，研细，加甲醇30mL，加热回流30min，放冷，滤过，滤器用5mL甲醇洗涤1次，合并滤液与洗液，蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次(20mL、20mL、15mL)，合并乙醚液，用质量分数5%碳酸氢钠溶液振摇提取3次，每次15mL，弃去乙醚液，碱液用醋酸乙酯15mL洗涤，弃去醋酸乙酯液，碱液用盐酸调节PH值至2,3，用甲苯15mL洗涤，弃去甲苯液，继用乙醚提取3次，每次15mL，挥去乙醚，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述2种溶液各5μL，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的同一硅胶G薄层板上，以甲苯 冰醋酸 甲醇(体积比30?1?3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点;阴性样品无干扰，见图2(A)。 2.1.3枸杞子TLC鉴别,2,508取除枸杞子以外的其他14味药材按处方比例制得的阴性样品，按“2.1.2”项下“供试品溶液的制备”方法制备阴性样品溶液。取枸杞子对照药材1g，同法制成对照溶液。吸取“2.1.2”项下供试品溶液与对照药材溶液、阴性样品溶液各2μL，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的同一硅胶G薄层板上，以甲 苯 乙醚 冰醋酸(体积比10?10?0.1)为展开剂，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点;阴性样品无干扰。见图2(B)。 2.1.4女贞子TLC鉴别按原标准,1,进行鉴别，色谱图见图2(C)。 2.1.5黄芪TLC鉴别取本品30粒，加水30mL，煮沸0.5h，加入5倍量乙醇过滤，滤液挥干，加水30mL微热使溶，冷却后移入分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20mL，正丁醇液合并，蒸干，用体积分数70,乙醇2mL溶解，作为供试品溶液。取黄芪对照药材3g，同法制备成对照药材溶液。取除黄芪以外的其他14味药材按处方比例制得的阴性样品，同法制备成阴性样品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯 乙酸乙酯(体积比7?3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碳酸钠试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;阴性样品无干扰，见图2(D)。 A(当归):1.样品a;2.阿魏酸对照品;3.样品a;4.阴性B(枸杞子):1.阴性;2.枸杞子对照药材;3.样品a;4.样品BC(女贞子):1.阴性;2.样品a;3.女贞子对照药材4:样品BD(黄芪):1.阴性;2.样品a;3.样品B;4.黄芪对照药材 图2调经祛斑胶囊TLC鉴别图(略) FiguRe2TLCChRomatogRamsofTiaojingquBancaPsule 2.2含量测定 选择本品中白芍主要有效成分芍药苷为含量测定指标,3-4,。 2.2.1色谱条件色谱柱:DiamonsilC18(ID4.6mm×150mm，5μm);流动相:乙腈 0.1%磷酸溶液(体积比14?86);流速:1.0mL?min-1;检测波长:230nm;柱温:室温;进样量:10μL。 2.2.2测定方法取本品胶囊20粒，精密称定，研细，混匀，取0.9g精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超声(功率:240W，频率45kHz)30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇制成60μg?mL-1的溶液，得对照品溶液。 2.2.3线性关系考察精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品6.25mg置25mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，分别吸取1、2、4、6、8mL置10mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，进样10μL，色谱。以芍药苷浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作图。得回归方程式为Y=0.1956X-0.4767(R=0.9998，n=5)，芍药苷进样量在0.25,2.0μg之间线性关系良好。 2.2.4专属性按处方比例取除白芍外其他药材，按制法制得空白制剂，按供试品溶液制法制成空白溶液。将空白、对照溶液分别注入液相色谱仪，结果见图3，可知其他成分无干扰。 2.2.5精密度试验取对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，计算RSD值为0.4%。 2.2.6重复性试验取本品(批号041021)测定其芍药苷含量，平行操作6份。平均含量为1.08mg?胶囊-1，RSD值为1.0%。 2.2.7加样回收率试验取芍药苷对照品15.58mg置100mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为贮备液。取已知芍药苷含量的样品适量，分别加入贮备液10mL(相当于芍药苷对照品1.558mg)，置50mL量瓶中，测定含量，计算回收率为99.8%，RSD=1.5%(n=9)。 图3调经祛斑胶囊高效液相色谱图(略) FiguRe3HPLCchRomatogRamsofTiaojingquBancaPsules 2.2.8稳定性试验取本品供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h测定峰面积，计算RSD值为1.2,，表明供试品在24h稳定。 2.2.9含量限度和含量测定结果对10批样品的含量进行了测定，结果分别为0.80、1.12、0.86、0.93、1.09、1.04、0.78、0.86、0.91、1.15mg?胶囊-1。确定本品含白芍以芍药苷(C23H28O11)计不得少于0.75mg?胶囊-1。 3讨论 3.1显微鉴别 原质量标准中当归显微鉴别特征不明显，考虑该标准中已收载当归的TLC鉴别，故将当归显微鉴别删除，同时参考中国药典增加红花显微鉴别。 3.2当归的TLC鉴别 原质量标准中是通过检定当归中的挥发性物质来对当归进行鉴别的。实验发现，在与当归对照药材所显荧光点相同的位置上，阴性也有较明显荧光斑点，改换多种展开剂进行展开均无改进。经研究 发现，是胶囊剂中的女贞子药材对其存在干扰。阿魏酸为当归有效成分之一，参考中国药典方法改用阿魏酸进行鉴别试验，结果薄层板上杂斑较多，易对鉴别产生干扰。将方法中2,碳酸钠溶液改为5,碳酸氢钠溶液，得到了较满意的效果。 3.3枸杞子的TLC鉴别 原质量标准中枸杞子用水提取，乳化现象十分严重，难以分层，且阴性样品有干扰，对照药材的荧光斑点Rf值较大(约0.9左右)。将供试液制备方法和展开剂进行改进后，TLC图谱中对照药材溶液所显示斑点的数量与原方法相同，Rf值大大降低，阴性样品溶液无干扰。 3.4黄芪的TLC鉴别 本鉴别为增加项，黄芪含有黄芪甲苷,2,、多糖、皂苷、黄酮、氨基酸等多种有效成分，经过研究比较，确定以黄酮为鉴别特征成分进行鉴别。 【参考文献】 ,1,国家药品监督局.WS—10710(ZD—0710)—2002国家药品标准,S,. ,2,国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部,M,.北京:化学工业出版社,2005. ,3,杨秋虹,杨岗,蔡越秀.RP HPLC测定芍甘颗粒中芍药苷的含量,J,.中成药,2002,24(1):27-29. ,4,钟美霞，肖佳尚，劳海燕.HPLC法测定通络胶囊中芍药 苷的含量,J,.广东药学院学报,2007,23(3):252-253.