嗜酸性粒细胞直接计数

嗜酸性粒细胞直接计数 文件编号： DGCPH-CL-SOP-07-06 版序：2005-1 页码：第1 页，共2 页 血液中嗜酸性粒细胞在含有伊红的低渗溶液中被染成红色，而红细胞及其他白 细胞破裂或溶解。通过人工计数得到血液标本中的嗜酸性粒细胞含量。 1，器械： （1） 经校准的微量计数板。 （2） 一次性20 ul微量吸管。 2，试剂： 嗜酸性粒细胞直接计数的稀释液种类较多，各有一定的优缺点，尚待大家继 续实验，找出最佳配方。下列3种稀释液供参考。 1． Hinkelmann液 伊红 0.2g 95％石炭酸 0.5m1 40％甲醛 0.5ml 蒸馏水 加到 100m1 2．乙醇—伊红稀释液 90％乙醇 30ml 甘油 10ml 碳酸钾 lg 枸橼酸钠 0.5g 20g/L伊红液 10ml 蒸馏水 加至 100m1 本配方背景清晰，嗜酸性粒细胞着色鲜明，缺点是含10％甘油，比较粘稠， 细胞不易混匀，故计数前必须充分振摇。 3．伊红—丙酮稀释液 20g/L伊红液 5ml 丙酮 5ml 蒸馏水 90ml 新鲜配制效果好，每周配1次。 用EDTA-K2 0 .2ul抗凝静脉血1ml，轻轻摇动抗凝。凝集，溶血，血量小于0.5 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。 文件编号： DGCPH-CL-SOP-07-06 版序：2005-1 页码：第2 页，共2 页 1．小试管中加稀释液0.38ml。 2．常法取末梢血20μl，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。 3．静置3—5min，用低倍镜(必要时用高倍镜)镜下计数10个大方格内嗜酸 性粒细胞数。 10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×lO＝嗜酸性粒细胞/L 1，必须使经校准的微量吸管和微量计数板。 2，操作工作人员必须能熟练地掌握操作步骤。 3，试剂必需在有效期内使用。 [参考范围] (50-300)×10E6／L(50-300／μl) 1．直接计数主要用于观察传染病预后、手术和烧伤病人的预后及测定肾上腺 皮质功能。 2．其他变化的临床意义同白细胞分类计数中嗜酸性粒细胞的增减。 嗜酸性粒细胞增多：变态反应、寄生虫病、某些皮肤病、某些血液病、手 术后、烧伤等。 嗜酸性粒细胞减少：伤寒、副伤寒以及应用肾上腺皮质激素后。 l. 血液稀释后应于1h内计数完毕，否则嗜酸性粒细胞会逐渐被破坏，使结果 偏低或不易辨认。 2. 充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛，特别是使用含甘油的稀释液要适 当延长混匀时间。 3. 注意与中性粒细胞区别，以免误认，中性粒细胞一般不着色但也有着浅红 色的，其颗粒较小。 4．住院病人采标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。 5．用白细胞总数与分类百分率求得的绝对值不如直接计数结果准确。