还原痹痛宁胶囊的抗炎作用及机理研究

还原痹痛宁胶囊的抗炎作用及机理研究 本文来至诺亚舟学习机: 中药复方制剂还原痹痛宁胶囊由天山雪莲、藏红花、透骨草、穿山甲、鸡血藤、天麻、威灵仙、牛膝、三七等组成，具有祛风散寒、温经通络、活血化淤的功效，临床上主要用于治疗风湿、类风湿性关节炎、风湿寒性关节痛、痛风、强直性脊柱炎等疾病。该方多年应用于临床，疗效明显。本研究为进一步为临床提供安全有效的实验证据，对还原痹痛宁胶囊的抗炎作用及对炎性组织中前列腺素2(PGE2)含量的影响进行了实验研究。 1 材料 1. 1 药物及试剂 还原痹痛宁胶囊，北京还原常生物科技有限公司产品，批号070105 ;万通筋骨片，通化万通药业股份有限公司产品，批号070422F;阿司匹林片，桂林南药股份有限公司产品，批号070201;醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司产品，批号070304;角叉菜胶，辽宁省药物研究所提供，批号050703。 1. 2 动物NIH系小鼠，合格证号:2007A004，体重18,22 g;SD系大鼠，合格证号: 2007A003，体重量180,220 g ，均由广东省医学实验动物中心提供。 2 与结果 2.1 抗炎作用,1,3, 2.1.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响健康昆明种小鼠60只，体重20,24 g，雌雄各半，随机分为空白组，阿司匹林组，万通筋骨片组，还原痹痛宁胶囊低、中、高剂量组，10只/组。以0.2 ml/10 g剂量灌胃给药，1次/d，空白组给予等容积蒸馏水，连续3 d。末次给药后30 min，将二甲苯50 μl涂于小鼠右耳前后两面，左耳不涂做对照，2 h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8 mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重、记录，以左、右耳片重量之差作为肿胀度(见表1)。实验结果表明，还原痹痛宁胶囊低、中、高剂量均可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.01或P<0.05)。 2.1.2 对大鼠角叉菜胶所致足肿胀的影响健康SD大鼠60只，体重180,220 g，雌雄各半，随机分为空白组，阿司匹林组，万通筋片组，还原痹痛宁胶囊低、中、高剂组。实验前每鼠右后足踝关节处用记号笔作一清晰横线，排水法测鼠足正常体积(致炎前足跖体积)。以0.2 ml/10 g剂量灌胃给药，连续3 d，末次给药后30 min，每鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶混悬液0.1 ml/只，随后，每隔1 h均按上法测一次足跖容积，连续3次，计算足肿胀率(见表2)，实验结果表明，还原痹痛宁胶囊高剂量可降低大鼠角叉菜胶1 h足肿胀率(P<0.01); 还原痹痛宁胶囊中、高剂量均可降低大鼠角叉菜胶2，3 h足肿胀率(P<0.05或P<0.01);还原痹痛宁胶囊低剂量对大鼠角叉菜胶足肿胀率无明显影响(P>0.05)。 足肿胀率(%)=致炎后足跖体积-致炎前足跖体积致炎前足跖体积×100% 表1 还原痹痛宁胶囊对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(略) 与空白组比较， *P<0.05，**P<0.01;n=10 表2 还原痹痛宁胶囊对大鼠角叉菜胶足肿胀的影响(略) 与空白组比较，*P,0.05，**P,0.01;n=10 2.1.3 对大鼠棉球肉芽肿的影响SD雄性大鼠60只，体重180,220 g，随机分为空白组，万通筋骨片组，地塞米松组，还原痹痛宁胶囊低、中、高剂量组。实验时，10%水合氯醛麻醉，剪除大鼠胸毛，碘酒消毒，切开胸部皮肤，从切口向两前肢腋下分别塞入25 mg无菌棉球各一个(棉球经高压灭菌，并以青霉素和链霉素混合液浸泡后植入)，缝合皮肤。术后1 h以0.2 ml/10 g剂量灌胃给药，1次/d，对照组给予等容积蒸馏水，连续7 d，于第8天颈椎脱臼处死大鼠，剥离棉球肉芽组织，于90?烘箱中干燥1 h，于电子天平精密称重(1/1 000 g)，将称得的肉芽组织重量减去棉球原重即得肉芽肿重量(见表3)。实验结果表明，还原痹痛宁胶囊中、高剂量组均可显著减轻棉球肉芽肿模型大鼠肉芽肿重量(P<0.01或P<0.05)。 表3 还原痹痛宁胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响(略) 与空白组比较，*P,0.05，**P,0.01;n=10 2.2 对炎性组织中PGE2含量的影响,4，5,角叉菜胶模型大鼠于末次测量之后，颈椎脱臼处死，于大鼠踝关节上0.5 cm处剪下炎性肿胀足，称重，置5 ml生理盐水中浸泡1 h，1 500×g离心10 min浸泡液，取上清液0，5 ml，加0，5 mol,L KOH一甲醇溶液2 ml，在50?下异构化20 min，用甲醇稀释至20 ml，用紫外分光光度计在278 nm处测吸光度(A)，以每克炎症组织相当的吸光度值表示PGE2的含量，并按下述公式计算PGE2含量(见表4)。实验结果表明，还原痹痛宁胶囊中、高剂量均可降低炎性组织中PGE2的含量(P<0.01);还原痹痛宁胶囊低剂量对炎性组织中PGE2的含量无明显影响(P>0.05)。 PGE2含量(μg?g -1) = ( E278×13(13×Vt×D),W (注:Vt=PGE2浸泡液的总体积;D=稀释倍数;W=右下肢重量(g);E278= 278 nm处的吸光值) 表4 还原痹痛宁胶囊对大鼠炎性组织中PGE2含量的影响(略) 与空白组比较，*P,0.05，**P,0.01;n=10 3 讨论 还原痹痛宁胶囊运用平衡阴阳、补益肝肾等法扶正，加强单元神经细胞组织营养，提高人体的免疫能力 ;运用祛风、清热、逐湿、活血等法祛邪，杀死和阻断类风湿因子再生，达到标本兼治，专门针对各类风湿疾病，治疗效果独特。其对二甲苯致小鼠耳廓肿胀性炎症有明显的抑制作用、对角叉菜胶致大鼠足肿胀有一定的抑制作用且能明显减少炎症模型中炎性组织PGE2的含量，抗炎作用与其抑制炎症介质PGE的产生有关。PGE 是膜磷脂在环氧酶系作用下形成的酸性脂类，是主要的炎症介质之一，具有扩血管、致热和致痛等作用。PGE 是强烈的血管扩张剂，其本身不能引起血管通透性升高，也不具趋化作用，但能明显 加强组胺和缓激肽的效应而引起血管通透性升高，也能加强其它趋化因子的作用，使白细胞向炎区集中。前列腺素特别是PGE2在急性炎症后期出现并起主要作用。所以在炎症组织中PGE2含量越多，表明炎症越严重。在本实验中，还原痹痛宁胶囊组的PGE2含量明显低于对照组，其原因为其具有良好的抗炎作用。抗炎研究结果表明，，还原痹痛宁胶囊对急性、亚急性和慢性增生性炎症均有显著的抑制作用，其作用机理主要与其抑制炎性组织中PGE2的含量有关