发酵罐清洁验证方案(头孢菌素转庆大霉素和金霉素)

发酵罐清洁验证(头孢菌素转庆大霉素和金霉素) 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 1 of 17 发酵罐清洗的清洁验证方案 (头孢转产非头孢产品) 福建省福抗药业股份有限公司 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 2 of 17 目 录 1.文件批准 3 2.目的 4 3.验证范围 4 4.系统的清洁验证 4 4.1.清洁 4 4.2.设备的清洗 7 5.擦拭回收率试验 8 6.发酵罐最难清洁位置的确认 10 7.检验方法 11 8.验证方案相关的记录样张 12 9.方案实施 13 9.1.方案实施要求 13 9.2.方案实施责任者 13 10.方案偏差 13 10.1.偏差和修正一览表 14 10.2.偏差报告样张 15 11.方案修改记录表 16 12.参考文献 16 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 3 of 17 发酵罐清洗的清洁验证方案已由下列人员审查并批准: 文件责任 职位 签字 日期 起草者 审查者 审查者 批准者 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 4 of 17 1.目的 由于公司产品调整，决定701车间从2011年7月份全部停止头孢菌素发酵生产，计划将该车间的种子罐和发酵罐全部用于非头孢菌素发酵，本方案验证701车间种子罐和发酵罐经碱溶液破坏和自来水清洁后可用于非头孢菌素类发酵使用。 2.概述 333701车间用于头孢发酵的一级种子罐(20m)、二级种子罐(35m)、补料罐(35m)、 33三级种子罐(80m)、发酵罐(150m)，均是不锈钢材质，内表面经抛光处理。一级 3333种子罐(20m)、二级种子罐(35m)、补料罐(35m)、三级种子罐(80m)生产是种子培养阶段没有活性物质。头孢菌素活性物质(CPC)是在发酵罐中产生，故选取 3发酵罐(150m)设备做清洗验证。 清洗验证项目包括活性物质破坏、擦拭取样(擦拭回收率试验)、发酵罐最难清洁位置的确认、清洗剂选取、清洗方法。 3(验证范围 系统包括: 3一级种子罐(20m)8个:201、202、203、204、205、206、207、208 3二级种子罐(35m)8个:501、502、503、504、505、506、507、508 3补料罐(35m)4个:601、602、603、604 3三级种子罐(80m)10个:701、702、703、704、705、706、707、708、709、710 3发酵罐(150m)10个:801，801、803、804、805、806、807、808、809、810 合计共40个罐。 4. 系统的清洁验证 4.1.清洁标准 4.1.1. 清洁标准的制定原则 可接受标准基于以下原则。 以目测为依据的限度，如不得有可见的残留物。 生物活性的限度， 如CPC含量应低于10ppm。考虑到CPC是属于β-内酰胺 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 5 of 17 类，转生产非头孢菌素类，所以取10ppm的十分之一即1ppm作为清洁验证接受 限度的标准。 4.1.2.1. 洗罐水头孢菌素残留浓度 药品清洁验证时规定由上一批产品残留在设备中的活性物质全部溶解到下一批产品中所致的浓度不得高于1ppm即1µg/g，即下一批产品中含上一批产品活性物质的量应不超过1µg/g，因此头孢菌素发酵罐转产非头孢菌素时洗罐水头孢菌素残留浓度计算如下: 头孢菌素(CPC)允许残留高限为1µg/g, 庆大霉素最小生产量为100kg，金霉素最 3小生产量为2000kg，红霉素最小生产量800kg，最终淋洗水为3m， 按转产庆大霉素计算: 冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为: 3(1µg/g×100kg/3m )=0.03µg/ml 按转产金霉素计算 冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为: 3(1µg/g×2000kg/3m )=0.6µg/ml 按转产红霉素计算 冲洗水中允许最高头孢菌素残留量为: 3(1µg/g×800kg/3m )=0.26µg/ml 因此淋洗水中的头孢菌素残留量取两者中的更小值应?0.03µg/ml 4.1.2.2. 发酵罐擦拭取样残留限度的计算 33冲洗水中头孢菌素允许残留高限为0.03µg/ml， 最后淋洗用水为3m，150m罐 2622总内表面积约170m=1.7×10cm(罐体上下封头面积各19.78m，罐体高度(部包括上下封头高度)10m，罐体半径约2.1m，故总表面积2×2.1×3.14×10+19.78×1? 2151m)，保险因子为10。 单位表面积允许的残留物限度为: 3622[0.03×6×10 /(1.51×10)]，1/10=0.00001mg / cm=0.012,g / cm 2拟定取样面积为100 cm,溶解于100ml纯化水中,则擦拭取样残留浓度限度为: 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 6 of 17 22100 cm×0.012,g/ cm?100ml=0.012,g/ml 因此将头孢菌素发酵罐转产非头孢时擦拭取样头孢菌素残留浓度限度定为?0.012,g/ml 4.1.3 可接受的清洁标准为: 发酵罐内表面目测不得有可见的残留物。 洗罐水中头孢菌素C残留浓度?0.03µg/ml 擦拭取样头孢菌素残留浓度限度为?0.012,g/ml。 擦拭回收试验连续进行三次, 擦拭回收率?80%，RSD应?20%，以保证擦拭试验结果的可靠性。 4.1.4 取样 4.1.4.1洗罐水的取样 洗罐结束后，从放罐管道排水处用洁净带塞的100ml三角烧瓶取100ml洗罐 水送品管部测定头孢菌素残留含量。 4.1.4.2 擦拭取样 用市售的棉签在装有100ml纯化水的三角瓶中润湿,并靠在瓶壁上挤压以除 去多余的水。在确认取样位置(擦拭部位根据发酵罐最难清洁位置的确认结果确定) 2和面积(100 cm)后，将棉签头按在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢 地擦拭取样表面，在向前移动的同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整 个表面，翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直(见 图一 棉签擦拭取样示意图)后，将棉签放入三角瓶中，振摇浸泡10分钟，并在三 角瓶上注明有关取样信息后送品管部检测头孢菌素含量。 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 7 of 17 图一 棉签擦拭取样示意图 4.2.设备的清洗 4.2.1.设备清洗剂选择 , 头孢菌素易被氢氧化钠破坏，故选用NaOH水溶液作为清洗剂，根据《用NaOH溶液破坏CPC溶液中CPC的有效性试验》(FACVP-CPC-701-01)，采用0.1%NaOH对设备浸泡2小时以上。 4.2.2.设备清洗方法和步骤 4.2.2.1 清洗用的工具 3B型离心式水泵(型号3B57)，其技术参数为:扬程57m,流量45m/小时， 转速2900转/分钟，电机功率15kw。 加压水管 4.2.2.2清洗的地点 发酵罐内和放罐管道 4.2.2.3清洗操作程序 3333原来用于头孢菌素生产的20m、35m、80m、150m罐在停产时已经进行了清洗，本次验证时将按程序对这些罐进行以下的特殊处理和清洗。 4.2.2.3.1打开发酵罐罐底阀，关闭放罐管道末端阀门以及放罐管道排冷凝水阀门，设备清洗示意图见图二。 4.2.2.3.2在发酵罐内加入30%浓度的工业用液碱NaOH(具体加碱量见下)。然后打开罐的自来水阀门，开启自来水管路上的离心泵，加自来水至罐顶视镜处，浸泡2小时以上。 *发酵罐清洗液的加碱液量计算: 33150 m罐 V=150×10L×0.1%?22%=681L 3380 m罐 V=80×10L×0.1%?22%=364L 3335 m罐 V=35×10L×0.1%?22%=159L 3320 m罐 V=20×10L×0.1%?22%=91L * 加碱量计算根据《用NaOH溶液破坏CPC溶液中CPC的有效性试验》(FACVP-CPC-701-01) 见附件1。 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 8 of 17 4.2.2.3.3 两小时后，打开发酵罐罐底阀，打开放罐管道末端阀门，待罐内碱水全部流出后用水管加压至0.4—0.6MPa自来水冲洗下列各处:罐顶，罐壁，人孔及人孔盖;搅拌系统(包括搅拌轴，叶及固定架，三角架);视镜及视镜冲洗管;蛇形管;各个挡板;空气分布管。直至清洗水pH值降低到与自来水pH值一致，并目测无可见的残留物。 34.2.2.3.4关闭放罐管道末端阀门，再用水量约3m(用200L/min的流速冲洗15min)的水以加压至0.4—0.6MPa自来水冲洗下列各处:罐顶，罐壁，人孔及人孔盖;搅拌系统(包括搅拌轴，叶及固定架，三角架);视镜及视镜冲洗管;蛇形管;各个挡板;空气分布管。洗罐结束后，打开罐底排水管道排冷凝水阀门用洁净带塞的100ml三角烧瓶取100ml洗罐水送品管部测定头孢菌素含量。 4.2.2.3.5 按照已通过擦拭回收率试验的方法(擦拭取样见步骤“4.1.4.2擦拭取样”)对罐的最难清洗位置取样(最难清洗点确定见步骤“6.发酵罐最难清洁位置的确认”)，送至品管部测定头孢菌素含量。 碱水 发酵罐 自来水 离心泵发酵罐罐底阀 放罐管道末端阀门 放罐管道 放罐管道排冷凝水阀门(取样口) 图二 设备清洗示意图 5.擦拭回收率试验 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 9 of 17 5.1试验:头孢菌素C锌盐样品(批号:WS-CPC-1101 含量73.1%);喷雾器;电子天平;超声波仪。 5.2试验步骤 5.2.1将准备好的洁净干燥的喷雾器，称其空白喷雾器重Wc(g); 5.2.2准确称取头孢菌素C锌盐(CPC-Zn)，具体称取过程:在干净的称量滤纸上盛放大约0.1g的头孢菌素C锌盐，用天平称量其总重W(g)。 1 5.2.3将头孢菌素C锌盐倒入洁净干燥的喷雾器中，用天平称量滤纸重量W(g); 25.2.4实际称取的头孢菌素C锌盐重量Wa = W—W;头孢菌素C锌盐效价为K; 12 5.2.5 在喷雾器中，加入100ml纯化水置于超声波中使其完全溶解，振荡摇匀备用。 用天平称量其喷雾器与头孢菌素C锌盐溶液总重为Wb ( g); 头孢菌素C锌盐溶液重量浓度C(µg/g)计算: C= K×Wa/(Wb- Wc) 5.2.6 擦拭回收 5.2.6.1准备一块50cm×50cm的平整光洁的材质与发酵罐相同的不锈钢板。 在不锈钢板上用钢锥划出40cm×40cm的区域，每隔10cm划线，形成16块10cm×10cm的方块。 5.2.6.2用软管连接氮气出口和喷雾器进气口后，开启氮气总开关(氮气纯度?99.99%)， 缓慢调节送气量调节阀 ，使溶液均匀地喷在40cm×40cm的区域内; 5.2.6.3喷液完毕，关闭氮气总开关，排空软管内少量氮气后，关闭氮气调节阀。喷雾器用已校正的电子天平称重得We(g)。 5.2.6.4实际涂布的溶液重量为Wd = Wb–We(g)。 5.2.7用电吹风温和地吹干不锈钢板。用去离子水润湿棉签，按步骤(“4.1.4.2擦拭取 2样)擦拭钢板，每擦一个方块(100cm)换一根擦拭棒，共擦8个方块(见图三 回收率试验擦拭取样示意图)。 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 10 of 17 1 2 3 4 5 6 7 8 图三 回收率试验擦拭取样示意图 将擦拭过的棉签分别放回三角瓶中，振摇浸泡10分钟，使头孢菌素C锌盐溶出， 在三角瓶上注明有关信息后检测溶液的CPC-Zn含量。 5.2.8擦拭回收率的计算 C= Wa/(Wb- Wc) Wd= Wb- We A= C×Wd D= B/(A×1/16) B=E×100ml 擦拭回收率=回收量/涂布量×100% A: 总涂布量; B: 回收量; C: 样品溶液重量浓度; D: 擦拭回收率; Wa: 样品重量 ; Wb: 喷雾前总重量; Wc: 空白喷雾器重量 ; Wd:总涂布的溶液重量; We:喷雾后总重量 ; E:擦拭回收样品溶液中CPC-Zn含量。 5.2.9擦拭回收试验连续进行三次,计算回收率(回收率应?80%)和回收率的RSD(RSD 应?20%)。 6.发酵罐最难清洁位置的确认 6.1.擦拭取样位置的选择 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 11 of 17 以凡是死角、有物体遮挡的地方、在清洗发酵罐时，清洗水流不易冲到的地方为原则，在发酵罐罐内壁上选取六个位置(见如下示意图四)进行擦拭取样，将残留量最高的点确认为发酵罐内最难清洁部位，并进而确定发酵罐清洁验证的擦拭取样位置，因为发酵罐的结构都一样，所以选择在NaOH降解之前用801罐和802罐各进行一次确认。 EBC A F 图四 发酵罐最难清洁位置示意图 DA:发酵罐槽钢与罐壁连结处正下方 B:盘管支撑架与罐壁相连处下方 C:冷却盘管后方 D:罐底出料口边的罐壁上 E:搅拌轴上背对罐内扶梯的一面 F:与罐内扶梯相对的另一面罐壁上 6.2.擦拭取样同4.1.4.2 7.检验方法 7.1 清洗水的CPC-Zn含量检测方法参照CPC-Zn检验操作程序(FASOP-QC-933)，该测定方法已经过验证，文件号为FAMVP(R)-7ACA-QC-03(CPC-Zn含量及有关物质测定方法的验证)。 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 12 of 17 7.2. CPC-Zn检验操作程序 7.1.1(样品溶液 发酵罐的淋洗水和最难清洗点的擦试样 7.1.2(操作程序: 7.1.2.1测定色谱条件(使用HPLC法测定): 色谱柱:RP-8， 5μm，4.6×250mm,或类似柱;检测器及波长:紫外检测器，260 nm。 流速:约1.0ml/min. 进样量:5μl . 运行时间:所有峰出峰时间应在10分钟以内。 7.1.2.2 流动相配制: 7.1.2.2.1 0.1mol/L EDTA溶液:精确称取EDTA二钠37.22g加水溶解并稀释至1000ml。 7.1.2.2.2 pH4.0缓冲液:取0.5g硼酸，1.0ml冰醋酸，30ml 0.1mol/L的EDTA溶液于750ml水中，溶解后搅匀。用20%KOH溶液调pH至4.0;置于1000ml容量瓶中加水至刻度并摇匀，用0.45um滤膜过滤。 7.1.2.2.3 流动相:pH4.0缓冲液乙?腈=975:25 (V /V) 7.1.2.3溶液配制 7.1.2.3.1CPC-Zn对照品溶液:准确称取CPC-Zn标准品50mg，于50ml容量瓶中， 加纯化水振摇溶解后稀释至刻度，为贮备液，准确移取贮备液1.5ml于100ml容 量瓶中，加纯化水稀释至刻度，配制成约10µg/ml浓度的CPC-Zn溶液。 7.1.2.3.2样品溶液:发酵罐清洗后清洗水取样和擦拭取样即为样品溶液。 7.1.2.3.3空白溶液:水 7.1.2.4系统适用性试验: 7.1.2.4.1仪器基线稳定后，精密吸取空白溶液5,l注入液相色谱仪，记录色谱图;精密吸取对照品溶液5,l注入液相色谱仪，连续进样5次。以CPC峰校正因子的相对标准偏差应不大于5.0%。 7.1.2.4.2校正因子f = C/ A rr 式中: 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 13 of 17 C---对照品溶液的浓度，mg/ml; r A---对照品溶液中CPC峰面积。 r _ f,f 7.1.2.4.3相对偏差。:S= ，100%_ f 式中。: f------两份对照品溶液中任一份的校正因子; f-----各次测得的色谱峰平均校正因子。 7.1.2.5测定: 精密吸取样品溶液5.0μl，注入色谱仪，记录图谱。按外标法以平均校正因子计算出 样品中CPC的含量。 fCPC含量: P =×A T 式中: A---样品溶液中CPC峰面积， T f-----标准品溶液CPC峰的平均校正因子。 8. 验证方案相关的记录样张 该验证方案相关的记录样张见附件2 9.方案实施 9.1.方案实施要求 本方案实施前应对检查人员进行适当的培训，使其明确清洁确认的要求。检查人 员应首先阅读将要检查的设备的清洁确认程序，明确相关的技术规格，检查人员在完 成每一项检查后应在清洁确认表上签字并签上日期，复核人员应同时跟踪复核，并签 署姓名及日期。培训记录附后。 所有文件记录完成后立即交与品质管理部归档。 9.2.方案实施责任者 清洁验证实施过程中的项目工程师为雷相峰、林波。 清洁验证实施过程中的责任工程师为连兆程、林信清。 QC主任:李荔青 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 14 of 17 QA人员:廖丽 验证小组成员:林波、雷相峰、廖丽、李荔青、张贤亮、连兆程、林信清、郑琦 10.方案偏差报告 在执行本方案过程中发生任何偏差,不论是设备安装、管道循环系统、控制、 规格或工程图纸均应有文件记录,并在下面将所有与偏差相关的情况描述清楚,并 请罗列偏差纠正结果,特别要强调的是:不论如何,均应说明引起偏差的原因. 授权人应保证结论是适当的，并且完成程度令人满意。 项目工程师应对本系统中的所有偏差和纠正结果予以认可。 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 15 of 17 10.1.偏差和修正一览表(样张) 报告号 偏差性质 修正是否完成(是/否) 完成日期 申明: 项目工程师签字: 日期: 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 16 of 17 10.2.偏差报告(样张) 偏差报告号: 标: 例外情况: ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………... ……………………………………………………………………………………………………... ………………………….…………… ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ……………………….…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 结论: 责任工程师: 日期: 项目工程师: 日期: 文件名:发酵罐清洗的清洁验证方案(头孢转产非头孢产品) 文件号.:FACVP-CPC-701-02 页号: 17 of 17 11.方案修改记录表(样张) 在执行过程中，本方案若有必要修改，应由相关专业工程师提出，经项目工程师批准后方可执行，并记录在案。 修改章节 名称 修改结果 提出人 提出日期 批准人 批准日期 12.参考文献 《药品GMP指南》中国医药科技出版社 《设备清洁验证残留物限度标准的确定方法》 沈阳津昌制药有限公司 李 洪