EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤免疫治疗研究进展

EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤免疫治疗研究进展 EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤 免疫治疗研究进展 ? 24O?国外医学兜疫学丹册捌年第卷第5期 【12]c口TW,RI?,KH,l'.岱,d.【JJ.1HImrm., 1997.岱:2145-2152. [13]如呷bU】.G0血从.B口J,dd.【J】.J呷,2O0O,164: 421玉H9. 【l4】Ylx,ld啊盯,hnnh血Rc.[J】.J口皿d,1996,156: 43384344. (1卯由曲JU.R,功,胁孵眦,d.【J].R笔/m.m.d, 1993,5:317-324. 【16]suH,c日IwdI皿.【J】.妇Imrm.,l螂.:3302_珊 【l7】M咂阻sG,ni蛐RP.[J].h—_.砌,68(5):287O- 2町9. [18]suH,H晰R,缸W,d.[J].J.1蜘,188:~O9- 818. 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LMP2B可能具有抑制LMP2A分子功能的作用.即 刻早期基因是病毒基因组从潜伏状态被活化后最早 表达的蛋白,主要有BZLF1和BRLF1,前者属于b- 转录激活因子家族的成员,现认为上述两种基因 的转录活化功能在病毒从潜伏期过渡进人增殖期起 到关键作用.大部分早期基因与病毒基因组的复制 有关,包括编码解旋酶,引物酶,DNA聚合酶等相应 基因.晚期基因主要编码属于结构蛋白的糖蛋白和 衣壳蛋白. 2EBV与人类肿瘤 EBV与多种人类肿瘤如鼻咽癌(Nasoph~ caI曲埘a,Npc),Buikin淋巴瘤(BL),霍奇金病 (Hod~in'sdisca~,HD)等的关系已引起人们的高度 重视.例如,未分化Npc与EBV感染的相关性极为 密切,在所有病例的癌组织中都有病毒基因组的存 收稿日期:2000一o6—12;修订日期:2ooi一06—15 怍者简介:姜华(1975一).男,山东藉.第二军医大学长征医院血液科住院医生.硕士 审校者:第二军医大学长征医院侯健 国外医学免疫学分册21301年第24卷第5期 在和表达;病人血清中有高效价的和lea抗 EBV抗原,且这种异常的特异抗体效价的升高常发 生在临床发现肿瘤之前同一病例的癌细胞中仅有 单一的非常局限的原位癌中无不例外地有EBV存 在,也是病毒参加癌形成过程的早期变化的证据之 一 .流行性BL的病例中有90%以上可到EBV 的存在,在散发性BL中这一比例为15%一20%. 西方国家大约40%的HD患者的肿瘤细胞即 Hodgkin-Reed.Steinberg(H.as)细胞中携带EBV,在这 些病例中,每个恶性细胞中均带有病毒的基因组,如 存在多个病灶,那么每处都会检测到相同的病毒… 我国HD患者携带EBV的情况与国外类似J.此 外,EBV基因组的存在及表达还可见于某些免疫缺 陷的患者如使用免疫抑制剂,接受器官移植及唧 感染的患者所发生的B淋巴细胞瘤,尤其是随着 AIDS患者带毒存活期的延长,AIDS相关淋巴瘤的 发生率明显增加.通过核酸杂交方法,在3o%一 50%的HIV感染者所患的系统性淋巴瘤中检测到 EBV基因组的存在.在异基因骨髓移植后EBV-LPD 的发生率可高达25%(3J,这与移植后长期应用免疫 抑制剂而导致的EBV感染有关. 3EBV特异性CTL与肿瘤的免疫治疗 由于临床上常规用于治疗肿瘤的化疗或放疗存 在着诸多问题,例如虽然80%甚至更多的HD患者 初次经常规的化疗或放疗可获得满意的疗效,但 50%以上的复发患者对常规疗法无效或再次出现复 发.另外难治性患者经常规治疗后的长期无病存活 率也低于30%_4J,而且大剂量放疗或化疗后发生二 次肿瘤及出现其它严重并发症的机会较多,因此有 必要寻找新的疗法.在上述几种与EBV密切相关 的人类肿瘤细胞上均有不同的病毒基因表达谱,这 些病毒蛋白可作为肿瘤免疫治疗的靶抗原. 3.1各种肿瘤中EBV基因的表达谱 不同的肿瘤中病毒基因的表达有所不同.在异 体干细胞移植受者中发生的B免疫母细胞淋巴瘤 中,肿瘤细胞表达6种潜伏期核抗原(EItNAI,2,3A, 3B,3c及.LP),3种潜伏期膜蛋白抗原(IaMPI,2A, 2B)和EBV编码的RNAs(耶ERI和EBER2),这与 EBV在体外感染静止B细胞产生的淋巴母细胞系 (LCL~)的病毒基因表达谱类似.在BL中肿瘤细胞 表达的潜伏期基因仅有EBNA1及EBERI,2.NPc 细胞表达EBNA1,EBERs和所有laMP,此外它还表达 某些功能尚未明确的潜伏期蛋白_5J,这种特殊形式 的潜伏期基因表达是否为NPc所特有还不清楚. ? 241 Deacon等研究发现HRS细胞表达的EBV基因限于 EBNAI,LMPI,2A,2B及其它某些潜伏期蛋白,这与 NPC类似.通过研究I~Ls,发现不同的EBNAs是由 相同的原始转录产物经不同的剪接方式形成的mR. 转录自BamtHC(cp)启动子或BamHIW NA编码, (Wp)启动子开始,而IMP的转录起始点位于EBV 基因组BamHIN区的不同启动子.BL中潜伏期抗 原表达主要限于EBNAI,原因为其mRNA是由位于 基因组F区的启动子(rp)开始抟录剪接的,Cp,唧 和LMP的启动子均不激活_6J.此外也有报道 EBNAs的不全表达是由BamHIO启动子(Qp)的激 活而产生,JAK/STAT通路对Qp活性有正调控作 用,BZLFI编码的z蛋白可增强Ps3基因的表达进 而干扰JAK/STAT对Qp的激活,这提示JAK/STAT 信号通路在EBV相关的肿瘤中发挥作用J 3.2肿瘤细胞表达的病毒抗原的免疫原性 一 般认为EBV抗原中EBNA3家族(EBNA3A, 3B,3C)具有较强的免疫原性,EBNA1所包含的重复 山氨基酸序列阻止了其与TAP转运蛋白结合从 而不能进入人类IliaI类抗原呈递途径,而其余的 潜伏期抗原免疫原性很弱.如前所述,免疫母细胞 瘤细胞表达所有的病毒潜伏期抗原,它们激活的 CTL主要针对核抗原EBNA3A,3B,3C,在体外激活 的这种CTL治疗EBV阳性的免疫母细胞瘤效果显 着,而HD,NPc,BL几种肿瘤细胞上均仅表达免疫 原性较弱的病毒蛋白,这可能为导致肿瘤细胞逃避 EBV特异性CTL免疫监督的原因.在某些HI)患者 的血中发现DdP特异性的记忆CTLE,但很显然它 们没有能够控制疾病,推测其原因为LMP特异性 CTL在EBV诱导产生的CTL中仅占小部分,如能增 强这种CTL反应不失为治疗HD的有效方法.但也 发现许多EBV相关肿瘤患者LMP1基因3'端存在 这进一步降低了IIVlP1的免疫原性甚至不能 突变, 被野生型IaMP1特异性CTL识别[~-gJ.Lee等通过研 究不同国家人群感染的EBV包括HD,NI:'C活检标 本中的EBV发现与皿A3A,3B,3C相比,LblV2表 位序列较为保守,提示它可作为EBV特异性CTL攻 击的目标",但其CLG表位免疫原性较弱,Maras. toni等报道采用某些短肽分子作为LaMF2表位的类 似物,与IKA-A2分子具有更强的亲和力,从而可增 强CTL反应(11j. 3.3IliaI类分子与病毒抗原的匹配 细胞表面必须有IliaI类分子的表达并能将 它及与之匹配的病毒抗原加工并呈现于细胞表面, 国外医学免疫学分册2001年第卷第5期 以供反应性的T细胞进行识别,这一过程中转运激 活蛋白,即TAP1/TAP2起重要作用.已发现包括与 EBV相关的BL在内的几种人类肿瘤细胞由于TAP 表达下降而减少了HLA分子在细胞表面的表达,因 此细胞呈递功能存在缺陷L,但也有报道H.Rs细 胞表面HIAI类分子的缺乏并不是因为TAP1或 TAP2表达减少(133,而可能另有原因.【?等对38 例HD活检标本进行检测,发现所有H.Rs细胞中均 有TAP1/TAF2表达,75%EBV阳性的RS细胞表达 有HLAI类分子"J.另有学者报道至少50%的 liD患者(无论EBV感染与否)R-S细胞表面有丰富 的HLAI类分子的表达.Moss等报道在NPC细胞 表面有正常水平的TAP1及TAP2和高水平的HLA I类分子的表达(14J.有人证实对IJdF2中5种表位 具有HLA限制性的等位基因为中国南方人群特别 是NI:'C患者共有,如HLA..42,A11,A24,B40的共有 率分别为50%,50%,30%及32%~10J,LMP2包含受 共同HLA限制的保守表位,因此增强对这些表位的 CTL反应可能会有利于改善免疫治疗的效果. 3.4EBV特异性CIL与HD的免疲治疗 目前有不少学者已将EBV-cIL用于EBV相关 肿瘤的免疫治疗并取得初步疗效.Roslax~等在 EBV阳性的复发HD患者中应用EBV特异性CTL 进行免疫治疗,首先收集患者外周血,在体外经转化 生成永生化的B淋巴细胞,再激活T细胞生成EBV }景异性CrL.与来自正常供者的EBV特异性CrL 相比,这种EBV特异性的cIL的增殖力较弱,原因 可能与其TCR-~ta链表达下降有关-1,但其对自身 来源的髓cv感染的B细胞系有正常的细胞毒活性; 为检验这些体外生成的EBV特异性CrL在体内的 活性,为3名多次复发的HD患者输人自身来源的 CrL,试验证明它们在体内持续存在超过3周并保 持有效的抗病毒活性,甚至在转移灶中检测到相当 于外周血中10倍浓度的cIL,输人后外周血中病毒 负荷明显下降,相应的患者的B期症状也明显改 善,如发热及多汗症状消失,食欲明显增加.上述结 果证明输人的CTL至少可识别一种肿瘤细胞表达 的EBV抗原(EBNA1,LMP1,?),EBV感染的H. RS细胞没有抑制输人的CrL的功能,提示将体外生 成的EBV特异性cIL输人体内治疗进展性HD具 有可行性[. 3.5EBV特异性cIL与EBV相关的淋巴增殖性疾 病防治, EBV相关的淋巴增殖性疾病(EBV.LPD)为器官 移植及HIV感染后常见的致死并发症R等 研究证实为EBV相关淋巴瘤患者输人EBV.CrL可 发挥抗病毒及抗肿瘤作用(173.他们就EBV特异性 cIL对EBV-LPD预防和治疗作用进行了深人的研 究,他们为42例接受剔除T细胞的异基因骨髓移植 患者输入自身来源的EBV特异性CFL预防EBV. LPD,无一例发生EBV.LPD,而53例未输人CTL的 对照者有8例患EBV.LPD;其中3例严重EBV.LPD 患者接受EBV特异性CTL进行治疗,在肿瘤组织中 特异性聚结了基因标记的EBV.cIL,2例患者的肿 瘤消退.输人的cIL在体内持续存在超过3年,并 很快建立起相当于正常人水平的EBV特异性的细 胞免疫反应,体内病毒滴度下降了23个对数级. 这提示我们在HIV感染早期及器官移植时在体外 建立EBV特异性CTL可用于预防和治疗EBV. LPDu.Heslop等亦证实EBV.cIL对EBV.LPD的 发生司起到明显的预防作用l】. 4问题与展望 虽然对于EBV特异性cIL治疗EBV相关疾病 已取得上述进展,但不能忽视的是EBV阳性的肿瘤 细胞可通过多种机制逃避免疫反应.除上述已提及 的几点以外,肿瘤细胞通过分泌IL-10抑制细胞毒 性T细胞反应可能也发挥重要作用.通常认为【L广 10是细胞因子合成抑制因子,它可阻止IFN和【L广 2的产生,直接抑制T细胞生长.IL-10由大多数B 淋巴母细胞及许多其它的EBV感染的细胞系产生, 可能通过自分泌调节环路促进细胞生长.很早就有 人发现在可检测到高滴度病毒的AIDS及Burkitt淋 巴瘤来源的B细胞系中也检测到高水平的人类 1O.最近有人报道IL-10的表达与liD和AIDS相关 的恶性非霍奇金淋巴瘤(ARL)中的EBV感染密切相 关,EBV-IMP1似乎可增加IL-IO的表达【知J. Schultze等研究发现IL-10可抑制B细胞产生LL-12, 而后者在诱导T细胞增殖及增强Th细胞的分化和 扩增中起重要作用,因此K,-10抑制了细胞毒活 性'2".Hayes等在鼻咽癌及口腔粘膜白斑病中研究 几种EBV转录编码的与人类有同源性的蛋白,如与 Bcl-2有同源性的BHRF1,与ICAM.1有同源性的 BARF1,与细胞周期素B1有同源性的BDIF2及与 IL-10有同源性的B(:RF1等,认为vIL-10似乎在EBV 相关恶性肿瘤的发生中并不重要,丽在病毒潜伏感 染状态优势表达的BARF1可能在细胞恶性转化中 起重要作用L. 综上所述,EBV特异性的cIL在治疗EBV相关 国外医学免疫学分册?阻年第甜卷第5期 肿瘤方面的前景令人鼓舞,但也存在着不少问题. 为此,不少实验室正在对有关工作进行改进,如我室 利用体外合成的I3dP2A的mflNA激发树突状细胞 后再刺激T淋巴细胞,能够有效地诱导特异性ffrL 的产生.这些cIL的诱导不受?A型别的限 制】.此外,还有人设想用IL-IOR/IL-21t嵌合基因 转染体外建系的EBV特异性CTL后再输入体内,使 肿瘤细胞产生的抑制T细胞功能的dL-lO转而激活 回输的CTL,从而增强免疫治疗的效果.相信在不 久的将来,这一领域将会有新的突破. 参考文献 [i]NurrayPc.&m日ldi?C,N.KerrDJ.etll(J].m.1999.舛: 442.. [2]xc.1-I,~lllliltanDutoit.Y卸QH,etllfJ]_IraJc日n,1993, 55:359. [3]lIIleT,}hd8删,Iz,d.[J]Blood.200o.95:l502. [4]^P.^mbRF.H0ngIll,el.[J]瑚,1997,89:1978. [51S[nel~^J.FhlM,DEms.d.【J].}?日阿1一llIl|1998, 13:461. [6]TaoQ.R0ber【蛐KD,hA.dm1.[.Jv,】998,72~71/75 [7]0唧H.1ee删,wY.d.[".P:NA0日dUSA,1999, 969339-9344. [8]hhis,It&T,T(h?1M,el.[J].Jvi,1999,57:152. 243? 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[23]侯健.姜华.【.上海免疫学杂志,2咖.2D:329. 098多发性硬化中Fas.FasL介导细胞凋亡研究进展 陈兴国 (上海第二医科大学.上海市免疫学研究所.上海21X~25) 摘要:F和FasL结合后,通过信号传导可以诱导细胞凋亡.在多发性硬化中,Fl廿F 蛔L介导了自身反应 性T细胞的凋亡,也介导了其它非T细胞的凋亡,如少突胶质细胞,星形细胞等.不 少学者从多发性硬化的 动物模型一实验性变态反应性脑脊髓膜炎(EAE)到病人进行了大量的研究,本文综述近年来这方面的最新 研究进展 关键词:Fas;n8L;凋亡;多发性硬化 文章编号:1?1—103X(2001)05一I)243—03中圈分类号:1t24.1-.5?文献标识码:A 多发性硬化(Ms)是一种中枢神经系统脱髓鞘 病变,其特征为局灶性发作,视神经,脊髓及大脑等 部位易感,缓解与复发交替出现,并伴以组织损伤. 临床上可分为缓解复发型,原发型,继发进展型,导 致青壮年严重致残.尽管进行了深人的研究,但其 病因及病理机制尚未明了.下列四方面证据推断 收稿日期:200o一07—21;恬订日期:?叭一08—07 基金项目:上海市教育委员会重点学科资助项目(s龇) 作者简介:陈兴国(1967一).男.江苏南京人,上海第二医科大学免疫学疆士研究生 审拉者:上海第二医科大学,上海市免疫学研究所张冬青周光炎