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肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨

2017-11-22 37页 doc 59KB 26阅读

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肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨 肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探 讨 .一,?。’’誓毫 一虢蕊聊碑淞噬辩『弓日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已发表或撰写的研究 成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。 ::、?, 导师签章:杂第粒。. 研究生签名:秀、降 矽“年/月弓日『删四?四洲嗍 录 目 中文摘要英文摘要研究论文肝型脂肪酸结合蛋白与。...
肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨
肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨 肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探 讨 .一,?。’’誓毫 一虢蕊聊碑淞噬辩『弓日 河北医科大学 研究生学位独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已发或撰写的研究 成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。 ::、?, 导师签章:杂第粒。. 研究生签名:秀、降 矽“年/月弓日『删四?四洲嗍 录 目 中文摘要英文摘要研究论文肝型脂肪酸结合蛋白与。肾小管间质损伤之间关 系的探讨 前言一一““一?“ 刖舌??“一””一”?“一“”一””?一””一”??一一““一? “ 材料与? 结果? 附图??一?一附表? 讨论结论 参考文献综述肝型脂肪酸结合蛋白基础研究及临床特征 致调十? 个人简历?中文摘要 肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨 摘 要 目的:通过观察慢性肾脏病患者肾小管损伤、间质纤维化程度、血生 化指标及尿肝型脂肪酸结合蛋白?、尿蛋白、尿白蛋白的含量变 化,从而探讨慢性肾脏病临床指标之间的关系,检测尿?能否作为 反映慢性肾脏病肾小管间质损伤的有意义的指标,并对其可能的发病机制 做进一步探讨。 方法:选取在我院肾内科住院,以蛋白尿、血尿、高血压或水肿等为 临床表现,在我科首诊为慢性。肾脏病且同意接受肾穿刺活检术的 患者为入组标本,排除既往有心脏、肝脏等重要脏器疾病或服用过 或等降压药或激素者。记录其基本情况包括性别、年龄、血压等 并于肾穿当天采血、留尿,化学法检测血、、、、、 含量;尿标本离心后取上清并测尿蛋白、尿白蛋白、尿肌酐 的含量,试剂盒测尿?含量,尿蛋白、尿白蛋白、尿? 结果均除以尿肌酐值进行校正。肾穿标本经固定、脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片等制成 厚石蜡切片,行、在光学显微镜下观 察肾脏组织损伤情况及抗人?的免疫组化染色。染色后用 图像分析仪分析间质纤维化所占皮质面积百分比,染色后在光学显微 镜下观察肾小管损伤情况,肾小管损伤包括小管管腔扩张、刷状缘脱落、 小管萎缩、颗粒管型形成等;并计算肾小管损伤所占皮质面积百分比。根 据小管损伤面积将标本分为三组:、轻微受损组:兰%面积的小管受损; 、中等受损组:%~%面积的小管受损;、严重受损组:至%面积 的小管受损。此外, 厚石蜡切片经脱蜡、水化、抗原修复等步骤后, 滴加兔抗人?多克隆抗体及二抗,孵育后试剂显色,显微镜下 观察结果,观察?在肾脏中的表达部位及强弱程度。所有计量 数据采用?表示,三组间差异比较采用? 检验;临床指 标的对数值关系分析采用’检验;尿?与小管损伤及间质 纤维化程度之间的关系采用’检验,.有统计学意义, 所有数据均用.统计软件处理。中文摘要 结果:共收集了符合标准的例患者,按照肾小管损伤程度分组,轻 微受损组例,中等受损组例,严重受损组例。三组间血清生化 比较后得出,血、血、血在轻微组与严重组组间比较差异有统 计学意义.,中等组与严重组之间比较差异无统计学意义 .;血、血、血在轻微组与严重组组间比较、中等组 与严重组组间比较,差异均无统计学意义两组间比较结果均为.。 三组间尿生化指标比较得出,尿、尿、尿?轻微组与严重组 比较、中等组与严重组比较,差异均具有统计学意义。尿轻微组:. ?./ ,中等组:.?./ ,严重组:.?./ ; 轻微组与严重组比较.,中等组与严重组比较.;尿轻 微组:.?. ,中等组:.?. ,严重组:. / / ?. / ;轻微组与严重组比较.,中等组与严重组比较 .;尿?轻微组:.?. / ,中等组:.?. / ,严重组:.?. / ;轻微组与严重组比较., 中等组与严重组比较.。随着肾小管损伤程度加重,尿?水 平逐渐增多,尿?与肾小管损伤程度之间明显相关., .;随着肾间质纤维化程度加重,尿?水平逐渐增多,尿? 与肾间质纤维化程度之间明显相关.,.。尿? 水平与.,.、.,.、 .,.、.,.之间无明显相关性。尿 ?水习与.,.、.,. 之间有明显相关性。免疫组化染色结果显示,?弥漫性表达于近端 小管上皮细胞内,主要表达于细胞胞浆内,部分在细胞胞核上有表达。并 且在受损肾小管上皮细胞内表达量增多。随小管损伤程度加重,? 染色阳性面积增多且颜色加深。 结论:患者肾脏中?的表达量随肾脏慢性病变严重程度而 增加,从而由肾脏排泄到尿液中的?含量随之增加,尿?水平 随肾小管损伤及肾间质纤维化严重程度而升高。故尿液中的?含量 可以用来反映中肾小管间质损伤的程度并可以作为反映病变程度 的指标。尿蛋白、尿白蛋白水平也随肾小管损伤严重程度而升高,故尿蛋 白含量与慢性肾脏病损伤程度也具有相关性。?可以结合近端肾小中文摘要 管细胞胞内的游离脂肪酸,并参与其胞内转运、氧化及酯化,位于细胞内 胞核表面的过氧化物酶体增生物激活受体作为游离脂肪酸的核内 靶点,可能在发病机制中起到了重要作用。 关键词:慢性肾脏病;肾小管损伤;间质纤维化;肝型脂肪酸结合蛋 白:游离脂肪酸;尿蛋白;尿白蛋白英文摘要 ? : 巧 .庀】 , 臼恤,曲 仃 铲 . 砌? 池 、釉? . 巧 锄. 缸印 ; 啪 锄 . 叫 嬲 拶 也 ., ? 锄 ,、 行. 巧 、?锄匝 , 嬲锄 锄. 巧如 矽 . . :,, , “ 舶,触?, 咖. 英文摘要 , ,, .? , 巧眵 ,锄. .,,’, . 锄 秒 如,协 呵. ,, 甜 . 拶 ? 鲫 ? ? .嘶 ,,巧 . 曲 ,. 衔, ? 伍 锄. 觚? , .? ’ 、 ?镪,一. 卸嗲 蚓. 曲.?【 ,』锄 , , , . 伊 %锄: , 埘; %~%: ; :耋% 士. . . ?印黜? 玎 觚觚撕吐 乏 ’ . 嘶哪? 、? 吐哪? 锄 ‘英文摘要 . 锄’ ..响 脚 , .. 伊: 黟. , 锄:伊 . , 铲 , 曲 . , 曲 .: 伊.,帆 铲. 盟锄 , 嘶巧锄 巧 ? 嘶 曲 ,诚州啪 .巧 铲 .士./ .士./ ,.士./ 觚 , 伊 ,;. ;, ;. 掣’觚 ’.士. ‖ .士. /.士., / ,;.. ;?心 鲈;巧 .士. ‖ . , ,.士.眺,.士.儋 铲 ;. ,;. . 巧? 矗 玳纳.,. .,. . ,, 剐., 巧. .,. ,..证巧?巧?觚 锄, 巧. 拶产. ,’. 巧 ? 锄. .?,一王’ 伍英文摘要 , ”. 巧 , 唱 :?蛆 , ,? .舶 嘶.,面 锄.?? .叩舶 ..,. . 叭 唱印, 巧 . ,, 刊 . : ; ;; ?;时;巧;巧 研究论文 肝型脂肪酸结合蛋白与肾小管间质损伤之间关系的探讨 .“叁, 刖 罱 慢性。肾脏病在全球的发病率逐年上涨,最终均不可逆转地进展 为终末期肾病,故及时监测病情变化并尽早进行干预对于延 缓进展具有重要的意义。但目前尚无有效的手段可以明确反映 程度并监测其向的进展。尿蛋白、肾小管损伤、间质纤维化等是 的独立危险因素,且肾病理检查是评价肾小管间质损伤的主要手段,但肾 穿刺活检术操作过程繁琐而有创。目前临床上反映肾小管损伤的其他检测 指标如尿:微球蛋白、尿渗透压等只能反映肾小管受损后的变化情况, 而不能反映肾小管的损伤程度,故临床上急需能够反映肾小管间质损伤程 度的灵敏而又简便无创的生物学指标。 肝型脂肪酸结合蛋白?是脂肪酸结合蛋白超家族中的一员, 在动物实验中证实,尿?的含量可以反映游离脂肪酸超载引起的近 端肾小管应激所导致的肾小管间质损伤及程度,并用于监测临床用药疗 效。另有研究报道称其可作为反映早期急性肾损伤的指标,但在中的 研究目前国内外多数仅限于动物模型。本研究旨在通过观察?在 患者肾脏及尿中的表达及变化,探讨其与肾小管损伤、间质纤维化程度之 间的关系。 材料与方法 研究对象年月~年月在我院肾内科住院诊断为 且行肾穿刺活检的标本例表。?录入标准:以蛋白尿、血尿、高 血压或水肿等为临床表现,在我科首诊为且同意接受肾穿刺活检术的 患者;?排除标准:既往有心脏、肝脏等重要脏器疾病;既往服用过 或等降压药或激素者;?分组:将研究对象根据小管损伤程度分为 组:、轻微受损组:耋%面积的小管受损;、中等受损组:%~% 面积的小管受损;、严重受损组:茎%面积的小管受损?’。 试剂兔抗人?抗体用于免疫组化购自公司;兔超研究论文 ,用于免疫组化 敏二步法免疫组化检测试剂一,一 购自北京中杉金桥生物技术有限公司;一//,用于免 疫组织化学染色购自北京中杉金桥生物技术有限公司。尿?采用酶 姗 ,检测,试剂 联免疫吸附法 盒购自 公司。 血清标本的检测 患者肾穿前当天清晨采空腹血,化学法测量其血 、、、、、含量。 尿液标本的检测 肾穿前当天留取晨尿,将尿标本进行离心, ,取上清,于一?冰箱中保存,待一并检测: .尿蛋白:三氯乙酸法测尿蛋白; .尿白蛋白:液相平衡竞争放射免疫分析方法测尿白蛋 白。待测样品、校准品中的和碘【】一与限量的抗体竞争结合, 形成抗原抗体复合物,部分碘【】一呈游离态,加入分离剂,离心 使复合物部分与游离部分分离,测定沉淀物的放射性计数,含量与沉 淀物的放射性计数呈负相关的函数关系,并表现在剂量反应曲线上,以该 曲线为依据即可对样品进行定量; .尿肌酐:苦味酸化学法测尿肌酐。血清中的肌酐与碱性苦味酸 盐作用,生成黄红色的苦味酸肌酐复合物,其颜色的深浅与肌酐的浓度成 正比,在比色测定,计算出肌酐含量; .尿?:法测尿?含量。用抗人?单抗包被于酶 板上,标准品和样品中的人?与单抗结合,加入酶标记的抗人? 抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物,出现蓝色,加终止 液硫酸,颜色变黄,在处测值,人?浓度与值成正比, 通过绘制标准曲线求出标本中人?浓度。尿蛋白、尿白蛋白、尿 ?水平均以除以尿肌酐比值表示。 肾脏病理检查 。肾穿后所取肾脏标本立刻置于%中性甲醛固定液中固 定,经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、切片等步骤后制成 厚切片,行及染色,在光学显微镜下观察肾脏组织损伤情 况。及染色后将切片于×倍显微镜下观察个视野并连 续不重叠拍照张照片: . 染色者将每张照片分成个方格,计算肾小管损伤包括小管研究论文 管腔扩张、刷状缘脱落、小管萎缩、颗粒管型形成等所占方格数从而得 出肾小管损伤面积所占肾皮质面积百分比,将此张照片平均数作为该 肾脏标本的肾小管损伤程度的百分比。 将研究对象根据小管损伤程度分为组:、轻微受损组:兰 %面积的小管受损;、中等受损组:%~%面积的小管受损; 、严重受损组三%面积的小管受损。 . 染色者用图像分析仪 .数码医学图像分析系统 计算间质纤维化所占肾皮质面积百分比,将该照片所得平均数作为该 一 肾脏标本的间质纤维化程度的百分比。.肾脏免疫组化 肾组织经固定、石蜡 包埋、切片等步骤后制成 厚肾组织切片,脱蜡、水化组织切片,高压蒸汽法进行抗原修复,%:: 去离子水孵育以阻断内源性过氧化物酶活性,滴加兔抗人?多克隆 抗体浓度:,?孵育小时,滴加辣根过氧化物酶标记的 二抗,?孵育,试剂显色,显微镜下观察结果,主要观察? 在肾组织中表达的阳性部位,不同损伤部位之间表达强度有无差异。 步骤操作流程图见图. 统计学分析所有计量资料数据采用?表示,三组间差异比较采用 ? 检验;临床指标的对数值关系分析采用’检验; 尿?含量与肾小管损伤及间质纤维化程度之间的关系采用 ’检验,.有统计学意义,所有数据均用.统计 软件处理。 结 果 一般情况 共收集了符合标准的例患者,其中男性例,女性例;平均 年龄.?.岁~岁;平均血压:收缩压.?. ,舒张压.?.。按照肾小管损伤程度分组,轻微受损 组例,中等受损组例,严重受损组例。见附表。 三组间血清生化比较 .血咖/:轻微组与严重组比较,差异有统计学意义.;研究论文 中等组与严重组之间差异无统计学意义.。 .血/:轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较,差异均 无统计学意义两组间比较结果均为.。 .血/:轻微组与严重组比较,差异有统计学意义.; 中等组与严重组之间差异无统计学意义.。 .血姗/:轻微组与严重组比较,差异有统计学意义.; 中等组与严重组之间差异无统计学意义.。 .血/:轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较,差异均 无统计学意义两组间比较结果均为.。 .血/:轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较,差异均 无统计学意义两组间比较结果均为.。 三组间尿生化指标比较,见附表。 :轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较,差异 .尿/ 均具有统计学意义轻微组:.?./ ,中等组:.?./ ;轻微组与严重组比较.,中等组与 ,严重组:.?./ 严重组比较.。见图。 :轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较,差 .尿/ ,中等组:.?. 异均具有统计学意义轻微组:.?. / / ,严重组:.?. / ;轻微组与严重组比较., 中等组与严重组比较.。见图。 .尿? :轻微组与严重组比较、中等组与严重组比较, / ,中等组:.? 差异均具有统计学意义轻微组:.?. / . ‖ ,严重组:.?. / ;轻微组与严重组比较 .,中等组与严重组比较.。见图。 尿?与肾小管损伤程度及间质纤维化之间的关系 .随着肾小管损伤程度加重,尿?水平逐渐增多,尿?与肾 小管损伤程度之间明显相关.,.,见图。 .随着肾间质纤维化程度加重,尿?水平逐渐增多,尿?与 肾间质纤维化程度之间明显相关.,.,见图。 尿?水平与临床指标之间的关系 .尿?水平与血生化指标之间:研究论文 ..尿?水平与:之间无明显相关性.,.。 ..尿?水平与:之间无明显相关性.,.。 ..尿?水平与:之间无明显相关性.,.。 ..尿?水平与:之间无明显相关性.,.。 .尿?水平与尿生化指标之间: ..尿?水平与:之间有明显相关性.,., 见图。 ..尿?水平与:之间有明显相关性 .,.,见图。 肾脏组织损伤程度与肾组织病理染色及免疫组化结果关系 . 染色结果显示,肾小管损伤包括小管管腔扩张,刷状缘脱落,小 管萎缩等,并且在三组间损伤程度不同。见图。 . 染色结果显示,随着肾小管损伤程度加重,间质纤维化面积 染成蓝色也逐渐增多。见图。 .肾脏抗?免疫组化结果显示:?弥漫性表达于近端小管上 皮细胞内,主要表达于细胞胞浆内,部分在细胞胞核上有表达。并且 在受损肾小管上皮细胞内表达量增多。随小管损伤程度加重,? 染色阳性面积增多且颜色加深。见图。研究论文 附 图 . 尿水平与。肾小管损伤程度关系图 轻微受损组 中等受损组 严重受损组 肾小管损伤程度分组 盯 . 哪 .巧 也 曲 . 宰, ;, .伊 伊. 研究论文 。??????????????????????????????????????????????一 尿水平与肾小管损伤程度关系图 尿/ . 严重受损组 中等受损组 轻微受损组 肾小管损伤程度分组伊 叫 .曲 锄.巧劬 母,. 锄鲈也铲 ;群,. 伊. 尿? / 严重受损组 中度受损组 轻微受损组 肾小管损伤程度分组 尿?水平肾小管损伤程度关系图 ?巧 . ? 砌 曲 .铲 木, . ;群,. 伊 . 研究论文 。 护 名二。 咿。逸孵,%。 .饿?姗,咖??????????????四.?帕?咖? 肾小管损伤程度 玎 研 劬 锄 唧?. 培 讪 铲 锄 鲥 踟了?.,. . 咯 ? 。甜渺?喝。。 .?哪??.卸?姗 ?伽唧?.??嘲?.瓤日咖?.优日???? 肾问质纤雏化程度. . 巧 嘶 ?.产.,..研究论文 毋 自。护孑 。 。昭。。%。。 。《暑. 。。。 ?麓 。。 。。 。肿 盯 咖 . 乒一 哪 ? 科 觚 . . .,.暑‖, 车 ? ?. 乒一 . ? .锄 了 . 产. ,.研究论文 . .洲 翟 伊 ’ : 阳,把 , ; 雄皿:×.. ?【 、椭 甜 黟:,, ; :×.? . 脚 .印 ?气 : , ”,舯; :×. 研究论文 附 表 ’’ 变量 均数?标准差 .?. 年龄: 性别: % 男 % 女 平均血压: .?. 收缩压咖 .?. 舒张压咖? 血清生化指标: .?. / .?. / .?. / .?. 咖/ .?. ?/ .?. 姗/ .?. 姗/ 尿生化指标: .?. / .?. /.?. 厂/ 肾穿病理诊断: 垢 肾病 糖尿病肾病 加 期膜性肾病 丛 微小病变 淀粉样变 肥胖相关性肾小球病 局灶增生坏死性紫癜肾炎 研究论文 轻度系膜增生性肾小球肾炎 ’ 狼疮性肾炎 恐 ’ 眄 均数?标准差 ’ 分组 尿.“‖ 尿‖ 尿‖ 矿 .?. .?. .?. 轻微受损组 .?. .?. .?. 中度受损组 .?. .?. .?. 严重受损组 .?. .?. .?. 合计 木髓 巧 巧,巧 恐 “ ,. 枷 . 研究论文 讨 论 慢性肾脏病在全球的发病率逐年上涨,目前尚无有效的手段可 以早期预防、早期诊断或延缓其向终末期肾病的进展。 已经成为心血管疾病发病的独立危险因素“?,早期诊断、治疗至关 重要。已有报道‘称反映进展最有意义的指标不是肾小球损伤,而 是尿蛋白的程度和小管间质损伤包括肾小管萎缩、间质纤维化和炎症细胞 的浸润等,故反映小管间质损伤的生物学指标可以用来反映的预后从 而监测临床用药疗效。然而目前临床上用于诊断肾小管间质损伤的方法较 为普遍的是肾穿刺活检术,根据病理结果诊断肾小管间质损伤程度。该种 检验方法较为直观,目前作为诊断小管间质损伤的金指标。但肾穿刺活检 术操作过程繁琐而有创,故临床上急需能够反映小管间质损伤的灵敏而又 简便无创的生物学指标。 脂肪酸结合蛋白 ,,是一类多源 性小分子胞内蛋白超家族,可以以非共价方式可逆性地结合疏水性配体 ‘,平均相对分子质量约为×左右,其功能主要是在细胞内 结合并转换疏水基脂肪酸,在细胞信号转导、基因表达调控、细胞生长与 分化中有重要作用。在不同器官和组织细胞内含有不同类型的,由 于具有不同的氨基酸排列顺序和不同的脂质结合特性而使其表现为不同 的亚型。迄今为止,已知包含有种亚型,并分别依据其组织分布 而命名:肝型脂肪酸结合蛋白 ,?;回肠型脂 肪酸结合蛋白订 ,?,主要分布于回肠;脑型 ,?脂肪酸结合蛋白,主要分布在脑、肾脏、心脏和内皮细胞, 其结合脂肪酸后多呈“型结构或高度弯曲,且均可在脑内表达;肠 型脂肪酸结合蛋白 ,?,主要分布在小肠;心 型脂肪酸结合蛋白 ,?;脂肪细胞型脂肪酸结合蛋 白 ,?;表皮型脂肪酸结合蛋白 ,?;髓磷脂型脂肪酸结合蛋白 ,?; 睾丸型脂肪酸结合蛋白 ,?“’?。肝型脂肪酸结合蛋 白?,属于第一类被发现的,又称为一,相对分子量约 为 ,主要在肝脏、小肠,肾脏中表达。脂酸 ,研究论文 是人及哺乳类动物的主要能源物质,在:供给充足的条件下,脂酸可在 体内分解成。和:并释放出大量能量,以形式供机体利用。当禁 食、饥饿或交感神经兴奋时,肾上腺素、去甲肾上腺素、胰高血糖素等分 泌增加,作用于脂肪细胞膜表面受体,激活脂肪分解途径。储存在脂肪细 胞中的脂肪进行脂肪动员,被脂肪酶逐步水解为游离脂酸 ,及甘油并释放入血,以供其他组织氧化利用。血清白蛋白具有 结合的能力,在细胞外,主要与白蛋白结合形成三聚体复合物共 同转运至全身各组织,主要由心、肝、骨骼肌等摄取利用并进行氧化。 与白蛋白结合后,可以随血液循环通过肾小球滤过,并在近端肾小管 被重吸收。?可以表达于近端肾小管细胞中,参与的胞内摄取、 转运及氧化等多种代谢途径。作为细胞内转输的最重要载体,? 能增加的溶解度和易化转运,从而进入相应区域如线粒体,过氧化物 酶体等进行脂肪酸的氧化,并进一步酯化形成三酰甘油或磷脂,进入细 胞核,从而发挥其调节功能。 目前研究发现?,?与多种疾病的发病相关,它可以通过调节细 胞的生长增殖而促进肿瘤细胞的增殖、抑制分化;通过参与脂肪酸代谢酶 的调控而与脂肪肝、肥胖‘”、糖尿病伯’等代谢类疾病相关;有报道‘’ 称?在急性肾损伤、麻醉和科室中具有独特的作用,可以用来 评价改善肾功能的新技术和新药物的疗效,监测治疗效果和药物毒性等; 等他的和 等“?均发现,在急性肾 损伤模型中,尿?可以作为监测和评价的潜在性指标。 此外,在的动物模型中发现?与蛋白超载有关,并具有一定的 肾脏保护作用心’。但是关于在人类中与肾小管间质损伤之间的关系尚 未完全明确。 锄? ‘’等报道,动物模型中尿?含量的增加主要 是因为近端小管?的排泄量增加,并且经,他汀类,钙离子拮 抗剂如贝尼地平、氨氯地平等药物治疗后尿?含量可以降低“’?。 所以在本实验中,入选标准排除了既往服用过、、钙离子拮抗剂、 他汀类等药物患者。 因为?主要在肝脏、肾脏和小肠中表达,所以不仅可以在肾脏 中检测到,也可以肝脏和小肠中被检测到,血清中的?随血液循环研究论文 通过肾小球滤过后可能影响尿中的?含量。但 等“’ 实验研究结果表明血清?水平不会影响尿?水平。 锄? 等也报道’在叶酸诱导的小鼠肾小管间质损伤模型中, 造模成功后测量血清中?没有表达,考虑尿?水平增加主要是 因为近端小管的表达量增加,从而排泄到尿中的水平增加,而并没有受血 清?水平的影响。本实验中,测得的血生化指标,等代表肝 功能的指标在三组间无明显差异,表明不会由于肝功能异常而引起血清 ?含量不同,进而不会影响尿?水平。 . 等?’报道在急性肾损伤模型中,尿?只反映肾脏病变而不会 反映肝脏病变情况。综上推断尿?水平的增加主要因为近端小管表 达?含量增加,从而使排泄到尿液中的含量增加,血清中? 含量对其影响不大。 该实验表明,尿?水平与血清甘油三酯无明显相关性,但在。肾 小管轻微受损组与严重受损组之间,血清胆固醇含量有明显差异。已有报 道‘?称高胆固醇血症可以导致肾间质炎症和纤维化,但 锄?等“”通过高脂饮食制备了高胆固醇血症模型,却没有发 现伴有肾小管间质损伤,考虑总胆固醇水平不影响小管间质损伤进展;并 且在?转基因型单侧输尿管梗阻模型组中发现,肾脏受损后 血清总胆固醇水平升高,同时对侧残肾中氧化应激因子表达升高, 说明在模型中早期损伤诱导的氧化应激抑制了动物的食物摄入,导致 了营养不良而加速了肝脏中总胆固醇代偿性的合成增多。本实验中,轻微 组与严重组的血清胆固醇含量的差异可能也是由于两组间患者饮食情况 与营养状况的差异所造成。 本实验结果显示,尿蛋白、白蛋白的排泄量与尿?含量有明显相 关性,并且可以随着肾小管间质损伤的严重程度逐渐升高,在一定程度上 表明尿蛋白、白蛋白含量也可以反映肾脏损伤程度。 等?’ 研究发现,大量尿蛋白可以诱导?基因表达上调并促进近端小管中 的?向尿液中的排泄量增加,尿蛋白与尿?之间有明显的相关 性,并提出假说:当大量蛋白尿、肾脏缺血等应激情况发生时,会导致近 端小管的超载,进而加重肾小管间质损害。 等“’等在 蛋白超载导致肾脏损伤的模型中也发现,尿蛋白含量的增加可以造成近端研 究论文 小管的蛋白超载从而导致?从近端小管向尿中的排泄量增加,尿 ?可以反映近端小管的尿蛋白超载所引起的应激。报道称‘”? 可以从近端小管胞浆中易位至小管管腔中,其易位机制可能与兆蛋白受体 介导的内吞作用紊乱相关。内吞作用紊乱后,?就会在管腔中聚集 而被检测到。另有研究阐述“”在单纯肾小管间质损伤而无小球损伤的动 物模型中,尿?可以反映肾脏的间质损害,尿蛋白却与间质损伤没 有关系,推测可能是因为人类的尿蛋白来源包括肾小球蛋白滤出和肾 小管的分泌,肾小管受损以后分泌的蛋白量减少,同时严重的小管间质损 伤又导致了肾小球的损伤从而不能滤过血液中的蛋白,在没有小球蛋白滤 过增加的同时受损肾小管分泌的蛋白又减少,因此造成了小管间质损伤模 型组的低蛋白。 等‘’在叶酸造成小管间质损伤的动物 模型中发现,叶酸导致小管间质的受损但却未影响到肾小球,同时发现在 肾脏损伤时尿白蛋白的含量增加,认为可能是因为肾小管受损后重吸收功 能障碍从而导致对白蛋白的重吸收减少,尿中白蛋白的含量增加。综上推 断,时肾脏发生长期慢性病变,包括肾小球、肾小管及间质等都会出 现不同程度的损伤,从而使肾小球滤过蛋白以及肾小管重吸收分泌蛋白含 量均发生变化,综合导致尿蛋白含量出现增多或减少的不同变化。但在临 床患者中,仅有单纯小管间质损伤而不伴有肾小球损伤的情况极为少 见,多数都会出现肾小球和肾小管间质同时病变的情况,使肾小球滤过蛋 白量增多及肾小管重吸收蛋白量减少而综合导致尿中蛋白含量的增多。 等提出‘?,由于在血液循环中结合血清白蛋白,通过肾小 球滤过,在近端小管与白蛋白一起被重吸收,所以当大量蛋白尿时 在近端肾小管一起被重吸收过量而造成超载,未氧化的通过其过 氧化作用而表现出细胞毒性并诱导炎症因子如巨噬细胞趋化因子 ,从而损伤肾小管间质,故蛋 白尿与肾小管间质病变相关。同时,由于?可以介导在胞质内 的代谢,故当超载时,?基因表达上调,通过把运转到线 粒体或过氧化物酶体以加速的代谢从而减轻胞内毒性,并且 ?可以通过结合后加速将其从近端小管向尿液中的排泄而维持 在胞质中的低含量“耵。 本实验中,除近端小管细胞胞浆中有?表达外,在细胞胞核上也研究论文 有阳性显示。 等。’发现在肾癌 , 组织中主要表达于胞浆、细胞膜,部分病例中胞核也有阳性表达。 近来报道‘’’称?将从胞质内转运到细胞核,并且?可以 与细胞核上的过氧化物酶体增生物激活受体 ? ,相互作用。’。肾组织发生损 伤时,位于近端小管胞质的溶酶体酶中出现自噬空泡而发生细胞的自噬作 用,从而使近端小管中过氧化物酶、过氧化氢酶以及参与脂肪酸氧化的 酶都明显减少,不能进行氧化,未酯化的和甘油三酯在肾组织 中聚集增多而进一步加重肾组织损伤。作为的核内靶点,可以 启动脂类代谢相关酶的基因表达,其中一亚型 可以通过促进过氧 化物酶体的表达以及线粒体氧化 ,而 减轻肾损伤。过氧化物酶体是一种由单层膜连接起来的细胞器,在多种脂 类如长链脂肪酸,支链脂肪酸等的代谢中起到重要作用。细胞核上的 激活后可以促进过氧化物酶体的表达。动物研究表明?”,肝脏中的? 表达也可以被过氧化物酶的增殖所调控,一些降脂药如贝特类可以通过 启动子调控区域诱导?基因转录“”。另有研究表明九’,? 在细胞内通过蛋白一蛋白连接与 和 相互作用,并通过激活 途径影响信号转导。总之,?可能通过与、过氧化物酶 等之间的相互作用从而在胞质稳态中起重要作用。 目前?在肾脏病中的具体生理病理机制尚未明确,但已有动物研 究表明‘一?肾脏高表达乙一在肾小管间质损伤的疾病中具有肾脏保 护作用,可以改善肾功能、减轻间质炎性反应和纤维化。另有学者研究发 现“’?可以通过促进脂肪酸代谢和调节脂肪酸相关基因的表达来防 止细胞内脂肪酸的过氧化,从而减轻肾病的氧化应激和抑制炎性介质 的表达,对肾脏起保护作用。炎症反应在。肾脏损伤中起到重要作用。研究 发现四’,大量蛋白尿引起的超载应激及肾脏受损初期,中性粒细胞、巨 噬细胞等炎症细胞在肾组织中浸润,诱导多种炎症因子如血小板活化因子 、巨噬细胞趋化因子、单核细胞趋化蛋白一 一,一的聚集从而产生多种细胞应答反应,包 括趋化作用、细胞脱颗粒等,并且活化中性粒细胞后通过氧化 酶催化超氧化物的产生从而增加活性氧成分含量“舯进而通过正反研究论文 馈效应产生更多的炎症因子和促纤维化分子从而导致‘肾脏损害。 锄等发现?’在模型中,?的表达上调并抑制?,, 一,一,,和一调控蛋白等蛋白的表达,并且可以减少巨噬 细胞的浸润以及型胶原的沉积。同时?与长链脂肪酸的氧化产物 有高亲和力和结合力。这些结果说明?可以减轻氧化应激,抑制炎 症因子的表达以及脂质过氧化作用,起到内源性的抗氧化剂的作用从而减 少肾小管间质损伤。 由此,通过抑制炎症反应、减少脂肪酸过氧化产物的聚集、上调? 的作用等可能可以减轻肾脏损伤,从而能够有效改善肾小管间质损伤程度 并延缓向的进展,这将可能成为治疗领域新的研究方向而具有 重大的发展前景。 结 论 患者肾脏中?的表达量随肾脏慢性病变严重程度主要包括 小管间质损伤程度而增加,从而由肾脏排泄到尿液中的?含量随 之增加。尿?水平随肾小管损伤严重程度而升高,并且与肾间质纤 维化的程度密切相关。故尿液中的?含量可以用来反映中肾小 管间质损伤的程度并可以作为反映病变程度的指标。 炎症反应、氧化应激以及脂肪酸代谢等在发病机制中起到重要作 用,?可以结合近端肾小管细胞胞内的游离脂肪酸,并参与其胞内转 运、氧化及酯化,从而减轻氧化应激,抑制炎症因子的表达以及脂质过氧 化作用而减少肾小管间质损伤。位于细胞内胞核表面的过氧化物酶体增生 物激活受体作为游离脂肪酸的核内靶点,可以启动脂类代谢相关 酶的基因表达,在发病机制中也起到了重要作用。 抑制炎症反应、减少脂肪酸过氧化产物的聚集、上调?的表达等 将可能成为治疗的新的治疗靶点。研究论文 参考文献 佐楠,李艳秋,王力宁等,肾小管肝型脂肪酸结合蛋白对小鼠肾 病的肾脏保护作用,中华肾脏病杂志,,:. 础 , 鲫冰 .唧 , 髀 锄 , :? , ? 锄 , , . 撕, ,:. ,乏墩 锄 , .哪 ,? , ,,:. 、?. : , .? ?睫 ,, :. . , , , 王 仕 .;沁 伽曙 呵 ,,:. 觚,舳 , , .姆 : , , :. .,科, 匈 玛巧:厅 , , ;:. ,圪?萄 , .巧 矾 州 讪, , ;:.研究论文 姗 : ,. ., , ;:, . 、矾 ,,:一 】. 邱晨红,赵中,董万利,心型脂肪酸结合蛋白与急性脑梗死,国际脑 血管病杂志,,:. , , , . : 仔, , , : ? ,,; 舡., . :? ,; 锄‰, ,沁 ?.巧? , 巧,, : 砸; :. 证 , , , , , :.?, . ., :巧: ? 仃,? ,, 李华,吕青,薛晖等,肝型脂肪酸结合蛋白和脂肪酸合成酶在乳腺浸润 性导管癌的表达变化及其意义,细胞与分子免疫学杂志,, :. , . , , 巧 仃哆,. ,,:? 研究论文 , , . , ? 妙,’,: 董金瑜,刘红,彭家和等,法尼酯受体可下调肝细胞中肝型脂肪酸 结合蛋白的表达,第三军医大学学报,,:.. ,强 , 印 ;: ,,.,? ., ., . .仕 帅 . 缸 咖 ,? ? . ,. ,. .叫 : 呵呔 ,,:? , . , ,??? , ,;:, , .?, ,觚: ,: 【,锄 , .搿狐 . 脚, ;:? 孙, . , ,加, 狮?】. , :. , , , 【, ,,:?锄 . 乙 , 乙 巧 .时 ,/硇刀厂仂?正 :: . 研究论文 , , . .丐矽嘞尸:玎正 ;:一 . ,?惦 ? 撕七 .如 ,, 口姗. ;:一 .丁, , .?? : 印 .;: ., , . , ,盯 :? 尺鲫.; . , , 狮 ? .如, &刀 纪历枷. ;:一 觚., , , , .埘..?玎彳谢&己毽. :;:? . : 锄 .脚 . 一 ,,:., , 锄 ? . ,,:? 瞰..哆,,:? . 仔 ,锄 . 研究论文 仔 曲 , , :? .狮 . 嘶, ,?:? .一 一 眦, , 雠 ., ,: ?,叩. 母 眦., , :? 陈慧梅,陈慧萍,脂肪酸结合蛋白的基础与临床,肾脏病与透析肾 移植杂志,,:. 跏,幻, . ? ?; 锄 ,, 铷了 巧 ? .. ;: 锄, , ,? 行. 讯 .珏.. 沁. ? ? ;:. 的 ,;: . , 戤, ,叮.“ , ,,:?, 百, , . ? , , ., , ,巧巧 ? : ? 沁 , , 孤 :气,,.研究论文 , 啦 . 【】., ,:一 、厂 , , , .巧? :. 巧 啊 【】. , ,:一 综 述 综述 肝型脂肪酸结合蛋白基础研究及临床特征 肝型脂肪酸结合蛋白 ? ,? 是一类胞内分子蛋白,属于脂肪酸结合蛋白 ,家族成员之一。近年来研究发现其参与脂肪酸代谢、糖 类物质代谢、肾脏病发病及肿瘤发生机制等多种疾病的发病机制。对其研 究方法涉及从体外到体内,从细胞分子水平到基因水平。本文主要对 ?的基本特征、基因及蛋白结构、疾病中的作用、体内研究现状及 可能的发病机制作一综述。 一基本特征: 脂肪酸结合蛋白,是一类多源性小分子胞内蛋白超家族,以非 共价方式可逆性地结合疏水性配体,平均相对分子质量约为× 左右,由于具有不同的氨基酸排列顺序和不同的脂质结合特性 而使其表现为不同的亚型。不同类型的具有各自不同的抗原决定簇, 可通过免疫学测量方法同其他组织产生的进行鉴别。迄今为止,已 知包含有个亚家族共种亚型,并分别依据其组织分布而命名: 肝型脂肪酸结合蛋白 ,?;回肠型脂肪酸结合蛋白 ,?,主要分布于回肠;脑型 ,?脂肪酸 结合蛋白,主要分布在脑、肾脏、心脏和内皮细胞,其结合脂肪酸后多呈 “型结构或高度弯曲,且均可在脑内表达;肠型脂肪酸结合蛋白 ,?,主要分布在小肠脂肪酸结合蛋白;心型脂肪酸 结合蛋白,?;脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白 ,?;表皮型脂肪酸结合蛋白,?; 髓磷脂型脂肪酸结合蛋白,?;睾丸型脂肪酸结 合蛋白 ,?比’。 肝型脂肪酸结合蛋白?,属于第一类被发现的,又称为 一,主要在肝脏、小肠,肾脏中表达。其在细胞中的表达量非常高, 道尔顿。 约占细胞内蛋白含量的%~%“,相对分子量约为 二?的基因结构:综 述 系统进化分析表明,在脊椎动物中,胞内脂质结合蛋白 ,基因的共同祖先可能编码一通用疏水的配体结合 蛋白,目前所有已知的家族成员基因结构都是保守的,由个外显 子和个内含子组成,尽管内含子的长度具有较大变异性,但外显子与内 含子的相对位置是相似的。首例的基因重组产生于大约.亿年前,在随 后发生的基因重组产生了目前所有已知的类型,.包括,其最早 是从真菌和植物中分离出来,而后在动物中被发现的。 三?的蛋白结构: 不同类型氨基酸序列有%~%的同源性,在空间结构上也 有相似之处。在蛋白质序列上存在差异,其二三级结构高度保守。 ? 每个都由个反向平行的链 形成了一个折叠桶结 构,桶腔内排列着极化且疏水的氨基酸,每条链末端为一个小的螺旋一 转角一螺旋基序,围绕着疏水核心,决定内部充水腔的体积和结合分子的 特异性。腔内分子有序排列并一一对应于相应高度保守的蛋白,与脂肪酸 ,交换并维持腔内的静电作用,从而实现对的转运作 用‘钉。 四?与物质代谢: 研究发现,?不仅能够直接结合从而参与脂肪酸代谢,同 时能够参与脂肪酸代谢酶的调控,从而在营养物质代谢中发挥重要作用。 ?与脂酸代谢 脂酸 ,是人及哺乳类动物的主要能源物质,大多数 真核细胞能够摄取长链脂肪酸用于各种细胞代谢。在:供给充足的条件 下,脂酸可在体内分解成。和:并释放出大量能量,以形式供机 体利用。当禁食、饥饿或交感神经兴奋时,肾上腺素、去甲肾上腺素、胰 高血糖素等分泌增加,作用于脂肪细胞膜表面受体,激活脂肪分解途径。 储存在脂肪细胞中的脂肪进行脂肪动员,被脂肪酶逐步水解为游离脂酸 ,及甘油并释放入血,以供其他组织氧化利用。 血浆白蛋白具有结合的能力,每分子白蛋白可结合分子。 不溶于水,在细胞外,主要与白蛋白形成三聚体复合物共同转运,与 白蛋白结合后由血液运送至全身各组织,主要由心、肝、骨骼肌等摄取利 用。通过两种方式进入真核细胞,即单纯被动扩散和以载体蛋白为介
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