茚地那韦血药浓度测定方法及其健康人体药动学

茚地那韦血药浓度测定方法及其健康人体药动学 茚地那韦血药浓度测定方法及其健康人体 药动学 药物杂志ChinJPharmAnal2006,26(5) 茚地那韦血药浓度测定方法及其健康人体药动学 贾琳静,田鑫,张莉蓉,谢敏,乔海灵 (郑州大学临床药理研究所,郑州450052) 摘要目的:建立高效液相色谱测定人血浆中茚地那韦药物浓度的方法,并研究了茚地那韦健康人体内的药动学.方法:采 用高效液相色谱法,色谱柱为HypersilC柱(4.6innl×200mm,5m),流动相为乙腈一10mmol?L磷酸盐缓冲液(pH5.5) (43:57);流速:1.0mL?min,,检测波长210nlTl,进样量:20.结果:茚地那韦在0.03,16.38峭?mL范围内线性良好 (r=0.9999),回收率及13内,13间差均符合生物样品分析要求.应用本法研究10名健康受试者口服茚地那韦胶囊800mg后 的药动学,结果表明,其体内过程符合一房室开放模型,主要药动学参数如下:c为(10.27?2.17)峭?mL,;t一为(0.79? 0.27)h;tl为(0.30?0.26)h;t1/2k为(1.31?0.22)h;V/F为(74.61?14.03)L;AUCo一.为(23.04?3.57)wg'h'mL,; AUC.一为(23.31?3.57)峭?h?mL,.结论:此方法便捷,准确,灵敏,适于茚地那韦血药浓度测定和药动学研究,本试验所 得药动学参数可为临床合理用药提供理论依据. 关键词:茚地那韦;HPLC;药动学;血药浓度 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254—1793(2006)05—0625—03 HPLCdeterminationandpharmacokineticsstudyof indinavirinhealthyvolunteers JIALin—jing,TIANXin,ZHANGLi—rong,XIEMin,QIAOHai—ling (InstituteofClinicalPharmacology,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China) Abstract0bjective:TodevelopanHPLCmethodfortheconcentrationdeterminationinhumanplasmaandinves— tigationthepharmacokineticsofindinavir.Methods:ThechromatographiccolumnwasHypersilCl8column(4.6mill× 200mm,5m).,I'hemobilephase,acetonitrile— pH5.5phosphatebuffer(43:57)wasusedataflowrateof 1.0mL?min 一.IThewavelengthwas210nm.Theinjectionvolumewas2OL.Results:1Thelinearcorrelationof indinavirWasobservedintherangeof0.03— 16.38Ixg?mL(r=0.9999).Precisionandaccuracyofthemethod werefine.Thepharmacokineticanalysisofindinavirwasstudiedinhealthyvolunteersafteroraladministrationof 800mgindinavircapsules.Findingrevealedthatthedataofindinavirwerefittedtoanopenone—.compartment mode1.,I'hemainpharmacokineticparametersofindinavirwereasfollow:Cwas(10.27? 2.17)g?mL一;, was(0.79?0.27)h;t1/2hWas(0.30?0.26)h;t1/2bwas(1.31?0.22)h;V/FWaS(74.61? 14.03)L;AUC0一 . was(23.04?3.57)g?h?mL一;AUC0一Was(23.3l? 3.57)Ixg?h?mL,.Conclusion:,I'hemethodiscon— venient,sensitive,accurateandreproducible,andcanbeappliedtodeterminethedrugplasmaindinavirconcentra- tionandstudyonpharmacokinetics. Keywords:indinavir;HPLC;pharmacokinetics;plasmaconcentration 茚地那韦(indinavir)是有效的HIV蛋白酶抑制 剂,在含有50%人血清和10%胎牛血清的系统内, 其IC90约为0.1g?mL一,在体内迅速被肝脏和胃 肠道的CYP3A4代谢,半衰期约1.8h,是有效的抗 艾滋病药物.茚地那韦血药浓度测定及药动学 }通讯作者Tel:(0371)665819O;E—mail:qiaohl@删.edu.en 国外已有报道引,但国内尚无相关研究.本试验 结合文献,建立了高效液相色谱法测定人血浆中茚 地那韦浓度,并进行硫酸茚地那韦胶囊健康人体药 动学研究,为临床进行药动学和生物等效性研究提 供方法和给药依据. ..—— 626.-——药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5) 1仪器与试药 HP1100系列高效液相色谱系统:紫外检测器, 全自动进样器,高效液相色谱化学工作站,美国安捷 伦公司;电子分析天平,德国Satofious公司;SK一1 型旋涡混合器,江苏金坛市节能分析仪器厂. 硫酸茚地那韦胶囊,Merck&Co.Inc生产,批号 C1331,规格每粒200mg,溶出度等符合要求.硫酸 茚地那韦对照品:厦门迈克制药有限公司提供,批号 020701.含量为99.8%.乙腈为色谱纯,磷酸二氢 铵等均为分析纯. 2色谱条件 色谱柱:Hype~ilCl8柱(4.6mm×200mm, 5m),流动相:乙腈一10mmol?L磷酸盐缓冲液 (精密称取磷酸二氢铵0.5751g,置500mL量瓶中, 重蒸水定容,氨水调pH5.5)(43:57);流速:1.0mL ?min,,检测波长:210nm,进样量:20L. 3对照品储备液的配制 精密称取硫酸茚地那韦对照品237.44mg于 50mL量瓶中,用重蒸水一乙腈(1:1)定容,得4095 g?mL对照品储备液,于4?冰箱中存放备用. 临用时配制所需浓度溶液. 4样品处理 抗凝全血离心(3000r?min)10min,精密 吸取血浆0.5mL,加入50mmol?L磷酸盐缓冲 液(精密称取磷酸二氢铵0.5751g,置500mL量 瓶中,重蒸水定容,氨水调pH9.0)300L,旋涡混 合30s,加入乙腈3mL,旋涡混合3min,离心10 min(3500r?min),吸取上清液2mL;于50? 水浴氮气吹干,用乙腈一水(43:57)100L溶解, 进样20L. 5专属性试验 在本实验条件下,血浆中杂质不干扰茚地那韦 峰.茚地那韦的保留时间为6.6min(图1).说明 该方法的专属性较高. 6血浆标准曲线制备 取血浆0.5mL,分别加入硫酸茚地那韦对照品 储备液,使其浓度分别为0.03,0.06,0.26,1.02, 4.10,8.19,16.38g?mL,,样品处理同上.记录 茚地那韦峰面积A,以茚地那韦峰面积A对茚地那 韦浓度C作回归,所得回归方程为: A=197.4C+14.90r=0.9999 05l0l5 A 05l0l505l015dmin BC 图1茚地那韦HPLC色谱图 Fig1HPLCehromatogramsofindinavirinhumanplasma A.空白血浆(blankplasma)B.空白血浆+对照品(blankplasnla+ indinavir)C.受试者用药3h后血浆(drugplasmaofvolunteersafter oraladministrationoftestingsamplefor3h) 1.茚地那韦(indinavir) 方法的最低检测限为0.02g?mL,,线性范围为 0.03,16.38g?mL,. 7稳定性试验 取肝素化血浆0.5mL,精密加入不同量的茚地 那韦对照品溶液,使其浓度分别为0.06,1.02,8.19 g?mL,,室温下放置24h后按"样品处理"项下 操作,所得结果与新配制样本所得结果相比较.结 果表明,高,中,低3种浓度的RSD变化均小于 5.23%,表明茚地那韦血浆样品室温下放置24h内 稳定.与文献报道相似. 8回收率,精密度试验 取肝素化血浆0.5mL,精密加入不同量的茚地 那韦对照品溶液,使其浓度分别为0.06.1.02.8.19 g?mL,,按"样品处理"项下操作,测得血浆中茚 地那韦方法回收率及Et内,Et间精密度.结果见表 1.方法回收率均大于99.9%,Et内,Et间RSD均小 于7.9%. 一=== ???????_,, ?_I____II?I?I??I__l_____?_'I?____,__I_??Il_』 药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)一627— 9应用 10名男性健康自愿受试者,年龄(22.4?0.97) 岁,身高(171.1?3.93)cm,体重(61.5?6.08)kg, 在试验前进行体格检查,肝肾功能,心率,呼吸,血压 及心电图均正常.受试者试验前2周及试验期间未 服用过其他任何药物.受试者对试验过程及可能发 生的不良反应表示理解并签署知情同意书.试验经 郑州大学医学伦理委员会批准.10名受试者于试 验前日晚8时后禁食,给药当日晨用温开水200mL 送服硫酸茚地那韦800mg,服药后4h进相同低脂 肪,低蛋白标准餐.分别于给药前及给药后0.17, 0.33,0.67,1.0,1.5,2,3,4,5,6,8,10h取静脉血 4mL,肝素抗凝,3000r?min离心10min,取血浆 一 30?保存待测.药时数据采用3P97程序进行药 动学参数计算,峰浓度(c,),达峰时间(,,)为实 测值,采用梯形法计算曲线下面积(AUC). 10例受试者单剂量口服茚地那韦两制剂800 mg后平均血药浓度一时间曲线见图2.药时数据 用3P97软件经微机进行曲线拟合和模型识别,结果 显示,茚地那韦的体内过程符合一房室开放模型,其 主要药动学参数如下:c,为(10.27?2.17)g? mL,;,一为(0.79?0.27)h;tl/2为(0.30?0.26) h/如为(1.31?0.22)h;V/F为(74.61?14.03)L; AUCo一 为(23.044-3.57)ixg?h?mL,;AUC0一为 (23.31?3.57)g?h?mL一.受试者在试验期间 无明显不良反应出现. lO讨论 茚地那韦血药浓度测定及药动学研究国内尚无 报道,本试验结合文献[1,3,4],建立了一种灵敏, 准确的高效液相色谱外标法测定人血浆中茚地那韦 浓度,本方法检测波长为210nm,样品处理方法简 便,且成本低,重复性好,灵敏度和专属性高,日内, 日间RSD均小于7.87%,适用于体内茚地那韦血药 浓度测定及药动学的研究. ?mL- 12 8 4 0 048t/h 图210例健康受试者单剂量口服硫酸茚地那韦800mg后的平均 药时曲线(i?s,n=lO) Fig2Meandrugplasmaconcentration—timecurveofindinavirafter singleoraldose800mginhealthyvolunteers(i?s.n=10) 应用本法测定了10例健康志愿者单剂量口服 硫酸茚地那韦胶囊800mg后茚地那韦血药浓度,结 果表明,该药在健康人体内吸收迅速,与文献[1]相 比,tl/2t相似,而C,和AUC较文献报道大,是 否与本文受试者体重较轻,中国人体CYP3A4基因 多态性等因素有关,尚需进一步研究. 参考文献 1HsuA,GrannemanGR,CaoG,eta1.Pharmacokineticinteractionbe- tweenfitonavirandindinavirinhealthyvolunteers.AntimicrobAgents Chemother,1998,42(11):2784 2BalintGA.Antiretroviraltherapeuticpossibilitiesforhumanimmuno- deficiencyrims/acquiredimmunodeficiencysyndrome.Pharmacol Therapeut,2002,89:17 3JayewanteneAL,ZhuF,Aweekagr,a/.Simplehish—performance liquidchromatographicdeterminationoftheproteaseinhibitorindina- rinhumanplasma.JChroma~grB,1998,707:203 4JustesenUS,PedersenC,KlitgaardNA.Simultaneousquantitativede- terminationoftheHIVproteaseinhibitorsindinavir,amprenavir , fitonafir,lopinavir,saquninavir,nelflnavirandthenelfinaviractive metaboliteM8inplasmabyliquidchromatography..,ChromatogrB, 2003,783:491 5Kingm,GerberJG,Fletchercv,eta1.Indinavirprotein—freecon— centrationswhenusedinindinavir/ritonavircombinationtIlerapy. AIDS,2005,19(1O):1059 (本文于2005年3月2日收到)