HPLC法测定小儿智力糖浆中远志酸的含量

HPLC法测定小儿智力糖浆中远志酸的含量 潘君 (安徽中医学院，安徽 合肥 230038) [摘要] 目的:建立小儿智力糖浆中远志酸的HPLC测定方法。方法:采用Elite Hypersil ODS-2色谱柱:(4.6mm×250mm，5μm);流动相:乙腈-0.2%磷酸(40: ,,60);流速:1.0ml.min;检测波长:210nm;柱温:30?;峰面积外标法定量。结果:远志酸在10.575211.5μg范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为~ 98.58%,RSD为1.52% (n=6)。结论:该方法测定样品分离度佳,灵敏度高,重现性好,结果准确可靠。 [关键词] 远志;远志酸;高效液相色谱法 小儿智力糖浆是由远志、石菖蒲、雄鸡、龙骨、龟甲五味药材经提取加工制成的中药复方制剂，具有开窍益智，调补心肾，滋养安神等作用。临床用于心肾不足，痰浊阻窍所致小儿多动，少语，烦躁不安，神思涣散，少寐健忘，潮热盗汗;儿童多动症见上述证候者的治疗，疗效确切。远志为该制剂处方的主药，并作为一味安神益智、祛痰、消肿的传统中药, 收载于《中国药典》2005年版(一 [1]部)。该制剂中没有含量测定项，而现在文献中没有其含量测定方法，为了有效的控制该制剂质量,参照中国药典的方法摸索建立了HPLC法测定远志酸含量的方法,以便有效控制其质量，并为以后其他相关研究提供借鉴。 1 材料 1.1 仪器 LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津制作所)，SPD-10A VP紫外检测器(浙江大学N2000工作站);CP225D电子分析天平(德国赛多利斯);AS3120超声处理器。 1.2 试药 远志酸对照品(中国药品生物制品检定所);小儿智力糖浆(规格:10ml/支，由安庆汇达丰药业有限公司提供，批号);乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱: Elite Hypersil ODS-2 (4.6mm×250mm, 5μm);流动相: ,,乙腈-0.2%磷酸(40:60);检测波长: 210nm;流速: 1.0mL(min;灵敏度:0.01AUFS;柱温:30?;进样量:20μL。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的远志酸对照品4.23mg置 10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品储备液。精密量取 对照品储备液适量制成每1mL含远志酸105μg的对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品3支，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次 (30、20、15mL)，取正丁醇层于水浴上蒸干，于残渣中加入10%HCL60mL , 置水 浴中水解2h，滤过，沉淀以蒸馏水洗至中性。将沉淀以甲醇溶解并转移至50 mL 量 瓶中, 漏斗及抽滤瓶以少量甲醇洗涤数次并入容量瓶, 加甲醇至刻度, 摇匀，即 得供试品溶液。 2.4 线性关系考察 分别精密量取对照品储备液置10mL容量瓶中制成系列浓度 的对照品溶液。在选定的色谱条件下，进样20μL,以峰面积对对照液浓度进行线 性回归，回归方程为y=0.0001x+0.093，r=0.9997，结果表明，远志酸在 211.5μg范围内线性关系良好。 10.575~ -12.5 精密度试验 精密吸取远志酸(105.75μg.mL)对照品溶液，按上述色谱条 件重复进样6次，结果远志酸峰面积的RSD为0.53%(n=6)。 2.6 稳定性试验 对同一供试品，在1、2、4、8、12、24h进样，RSD为1.02%， 可知供试品溶液在24h内基本稳定(n=6)。 2.7 重复性试验 取同一批号小儿智力糖浆6份，每份30mL，分别按供试品溶液 的制备方法制备，分别进样20μL, 依法测定远志酸含量, RSD为0.62% (n=6)。 2.8 加样回收率试验 精密吸取已知含量的样品(取重复性项下的小儿智力糖 浆，批号:061215)6份，每份15mL，各精密加入远志酸对照品适量，按供试品溶液 制备方法制备，定容，依法测定。结果见表l，本法的平均回收率98.58%，RSD为 1.52%。 表1 回收率试验测定结果 (n=6) Tab 1 Results of recovery(n=6) 取样量 样品含量 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD (mL) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%) 15 1.461 1.487 2.937 99.26 15 1.461 1.487 2.940 99.46 15 1.461 1.487 2.883 95.63 15 1.461 1.487 2.939 99.39 98.58 1.52 15 1.461 1.487 2.924 98.39 15 1.461 1.487 2.938 99.33 2.9 样品测定 取不同批次样品，按供试品溶液制备方法处理后依法测定，以外标法计算样品中远志酸的含量，结果3批样品含量分别为110.7、103.8、107.0(μ -1)。 g(mL 图1 远志酸和小儿智力糖浆样品的HPLC图 A(对照品;B.样品;1.远志酸 3 讨论 供试品直接蒸干水解制备的供试液，经HPLC 色谱图显示含成分较多, 被测成分受干扰较大;根据远志皂苷的性质，选用水饱和正丁醇提取皂苷并以大孔树脂分离纯化制备的供试液, HPLC 色谱图显示分离度较好, 但由于上柱皂苷损失过多, 致使测定结果偏低;而选用水饱和正丁醇提取皂苷，经水解制备的供试液，其HPLC 色谱图显示分离度较好，提取更完全，振摇萃取试验证明，以水饱和正丁醇为溶剂，振摇提取3次，能将样品中的远志皂苷基本提取完全。 远志皂苷水解后的皂苷元有2种，一是温和条件下用过碘酸钠水解得前远志皂 [2]苷元;二是剧烈条件下用盐酸水解得远志皂苷元，前者水解步骤较多，得到的产品量少。相比较而言，后者产量大，操作简便，因此，我们选用后者置沸水浴中回流水解。 经试验对甲醇-水、甲醇-水(含磷酸)、乙腈-水、乙腈-水(含磷酸)等流动相的系统组成和比例进行了研究比较，综合分离情况，最终选择乙腈-0.2%磷酸 (40:60)的流动相，分离效果较好。 对小儿智力糖浆中远志酸，用HPLC法测定，该方法简便可靠，快速准确，稳定性、重复性、回收率均符合要求，结果准确可靠。 参考文献: [1] 中国药典[S].一部.2005:107-108. Miyase T，Iwata Y，Ueno A(Tenuifolioses A - F，oligosaccharide multi- esters [2] from the roots of Polygala tenuifolia Willd[J](Chem Pharm Bull，1991，39 (11):3082( Determination of polygalacic acid in xiaoerzhili syrup by HPLC PAN Jun (Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Anhui 230038，China) [Abstract] Objective:To establish an HPLC method for the determination of xierzhili Syrup(Method:Elite Hypersil ODS-2(4.6mm×250mm，5μm) was used with -1 acetonitrile-0.2%HPO(40:60) as the mobile phase;flow rate was 1.0mL(min34 detected at 210nm and column temperature at 30?(The external standard method was adopted for the assay(Results:The injection quantity of polygalacic acid presented a good linear range of 10.575~211.5μg(r=0.9997)(The average recovery was 98.58%， RSD=1.52% (n=6)(Conclusion:The method is good in terms of separable effect， reproducibility and sensitivity( ,Key words, Polygalae tenuifolia Willd;polygalacic acid;HPLC