【doc】用ELISA进行奶牛发情检查和早孕诊断

【doc】用ELISA进行奶牛发情检查和早孕诊断 用ELISA进行奶牛发情检查和早孕诊断 10襄龙江畜牧兽医l990—2 用E.USA进行奶牛发情检查和早孕诊断 孙忠刚石放雄陈备新章开训吴兰生 (浙江农业大学技医幂) 奶牛繁殖率高是孜场获得最佳经济教盎决 定因素之一,因为产奶高峰通常是在产后2l一9O 天获得的.繁殖率低.就会降低母牛啦产犊眙散, 影响奶牛产性能的发挥.如要获得高的繁殖率 就必需了解奶牛的繁建状况,对奶牛进行发情捡 鸯,馥厦对配种{配种i还要进行早孕诊断, 便尽旱挑出空怀牛.以往』,们进行发情检查多 采用肉眼硬察,妊娠诊断多采用直脑检查的方 法.以上虽然简便男行,但盘于主观性强, 加之劳动量太,影响了观察站疑,妊娠与百也只一 8在配种后d0乡天才能楼出. 鲜奶中孕酮承平在母牛的发情明极低.以后 5—6天逐渐上升,到发情周理屿第12天选到相 当高7K平.如果母牛在前一士发情期配种受孕, 孕醑将保持在较高状态维持妊娠如果来妊. 孕酮水平在第15—16天后将急剧下降,母牛再次 进八下,个发情周第因此捌定扔中孕酮的台 量,为我们了解母牛的卵巢机能状况,提高奶牛 繁殖率提供了客观像据, 本试验采用我们自己生.的孕酮ELIsA(酶 联免疫疆附铡定)试剂盒,灞定了3O5头野牛首己 种当天聂415头配种昏20或,和21天的脱脂乳孕酮 浓度,旨在为奶牛发情捡鸯和早期妊娠诊断提供 较方便,客观的方皓. 材料和方法 1.商|H和倪嚣 孕酮EL1sA试剂盒由'新江农业_凡学提供,其 巾含孕酮挠血请,酶标孕雕,孕酮标准等制剂 仪器为GxM一2O2型酶杯光妻计. 5.由于篇幅所限,此处来刊出程 序.有对本程序感兴趣或希望利用本程序 为其岗猪生产确定适宰粥者,请直接与作 者联系,本人愿提供服务. 奎薹参考文撒 (1】中央_謇产丧(日).I?'效率的葬置;接 !.乳掉暴?及处理 嚣粜1『L州牛奶公司一牧场(杭奶I)和二牧 坊(扰扔2).浙_丧大牧场(农大),象杭县南 湖农场二收场(南湖),杭州四季青刍牧场(四 摹青)和上海第卉牧场(六牧)的305头母牛配 种当天的乳样和上进各场415头母牛配种后20或/ 和11天的乳样.每个奶样要末在0.5毫升左右, 乳样l{每分钟3000转离心lO分钟.乳样也可放在 o?』下保存待用时再离心.离心后,取下层即 为税脂乳祥, 3.工作毒液 (I)包被缓冲液tpH9.6.0.05MNaHCO~ ,:co:缓冲液,用于抗体的稀释. (2)测定缓冲液tplY7.O0.1M磷酸缓冲 液,含:南.87%N-q和0.1牛血清白蛋白,用 于酶标结台物,孕魏标准的稀释. (3)冲洗缓冲液j含有D.05TweOn20, pH7.4的磷酸缓冲{蓰,甩于酶标板的冲洗 (4)喀物液:O.1MNzHPO4,0.1M柠撵 酸一OPD,用时两者按2:1日台,后者0?以 下保存. (s1终止液l2MHxSO.. d.撮作程序 (1)徽l墒板第一列每孔加z00l包被缓冲 液,其杂各孔均船2OOl用包被缓冲浪稀释至1: 51o的孕酮抗血清,置4?下保存18小时瞄上, (2)用前取出已包被的微滴板,倒空孔内 液体}用冲洗缓冲液冲洗三.贞,在吸水纸上吸干 术》,PBl (2)齐守荣等,l984,猪的生长发育研究盔北 农学院.'中蔺主要地方猪种厦特性的研究' 臼)霍贵府.1如0.我啻几个地方措种的生长过 程的函爨分析,器龙讧謇牧瞢压,啦:3—4 (1】J.P..Doll,F.Ora~em.1975.Produ~. "n~noml0s—rlwor~,ithAPj妯I扣^, 畜禽生产1l 孔外液体. (3)微滴板备孔加lO0Ill用洲定缓冲液稀释 晌同浓度的标准孕酮(制标准曲线)或50P.I脱 脂乳,后者再加50l澜啶缓冲液,然后加IOOPt~ 用测定缓冲液稀释至1:5xlO的孕酮酶标结 台物. (4)酶标板在37?下反应1小时. (5)僦空擞滴板,冼三次. (6)每孔加20O?1OPD底物,37?显色l小 }l'}. (7)每孔加501zl终止液. t8)酶标仪读取备孔光密度=492nm). 结果与讨论 1.爱情鉴定肌305头配种当天测脱脂乳 孕酮浓度的母牛来善,其中配种后受孕的.有170 击,配种当天脱脂乳孕酮浓度为O.65士O.57ng/ ml.配后来孕的有135头.配种当无脱脂乳孕酮 浓度1.55士3.08ns/ml配种受孕牛配种当 天脱脂l乳孕酮浓度的平均教加一十标准差t1.2) ng/m1)作为基准,则配种当天脱脂乳孕酮浓度 大于1.2ng,m1的配种牛有5l头.配种受孕率为 n.76(8/51),而配种当天脱g旨乳孕酮浓度低 于1.2ng/ml的有254头,配种受孕率为64.56 (16454),两组相差悬殊.可见,应该避免在 脱脂乳孕酮浓度大于1.2ng/ml的情配下输精a 同时满足下列条件者为发情鉴定失误牛 (1)配种当天脱脂乳孕酮浓度大于1.2ng/ml{(2) 配种后2O和21天脱脂乳孕酮浓度小于1.2ns/ml. (8)临床观察到母牛转发情日期短于或长于正 常发情向期,(4)配种后,:15~60天直肠检查空怀. 本试验共有37头牛是在这种情况下输的 精,其配种当天脱脂乳孕酮浓度为3.91? 5.1lng/m1,极显着地高于配种成功牛(P< 0.01),而其余配种失败牛配种当天脱脂乳孕酮 浓度为O.72-4-0.9~ng/ml,与配种成功牛无明显 差异(P>O.05).亦即,各牧场平均气发情鉴 定失误率为12.13(3:/305),由此所致的配种 失误率占空怀牛的比率为27.6l%(37/195).统 计结果证明,袅情鉴定失误率与空怀率之间呈显 蓍的芷槽关(r#o.795,P<0.05).因此,发情 鉴定失误是人工授精失败的一十主要撅因.提高 临康发情鉴定的准确串,就有助于提高奶牛的受 精率 '2?罩螗根据试剂盘确定的标准.配 种后20或2l天脱脂乳孕酮含量小于1.Ons/ml的 母牛为空,大于1.2ng/ml者为妊娠,介于两 者之间为可疑牛.以此为标准,在杭州市牛奶公 司一牧场和二牧场,杭州四季青各牛场,浙农大 牧场.余沆县南湖农场二收场,上海第六牧场等地 1测定母牛配种后2O或/和21的脱脂乳孕酮浓度. 进行早期妊娠诊断.共检查了4l5头牛,诊断为 妊娠的有284头,空怀的127头,可疑的4.头.妊 螺和空怀的确诊率分别为86.2蜡{钌92;91,可 疑率为O.92%,总确诊率为87.47%(363/415)o 各牧场核实的结果见下. 各牧场早孕诊断的结果 营诊确确谚确确 牧场断断谤审}谚 总妊诊盘空诊章. 撮敷癌体鼓菇敦 致数 JJ 杭奶1的l0359T.50l3啦92.3t 杭扔2954B日.D0d3T5.D0 在太97T10O.肋221肿.9D 西湖61'n9口0,T?2429?..| 四季青B26949B1.6T2a—哺.n 六牧l95129I11B6.05Bl&l髓.S1 台计l豳r 245明.2Ti2Tn8蛇.?l *均一娠妊?一头空怀 j^表2可见,根据脱脂乳的孕酮旅度进行早 勰妊娠诊断的准确率相当高,但总还有误差.根 据我们的研究,其误差的主要来源是旺胎早期死 亡和临床发情鉴定失误. 从本试验的结果看,用ELIsA潞定脱脂乳孕 睛浓度进行奶牛的发情鉴定租早期妊娠诊断是简 便可行的,它能够为奶牛的发情鉴定和早期妊娠 诊断提供客观的依据. 本法谢试迅速(2小时可得出结果)l怍 较简便,可在牧场实地操作,一旦发现连续瓣夹 乳汁孕酮浓度显着降低时,郾为发情牛.章法知 能大面积照甩于生产,势必畚对提高奶牛的繁殖 率及牧场的经济效益有所贡献(o03)