【word】 孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用研究

【word】 孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用研究 孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用 研究 国际检验医学杂志2011年5月第32卷第6期lntJLabMed,May2011,Vo1.里! 氧,缺血因素都应想到脑损伤可能,应积极应用各种可行的检 测方法尽早明确,对已经发生脑损伤的早产儿也应积极运用各 种检查方法评估其预后. 参考文献 [1]中华医学会儿科学分会新生儿学组.早产儿脑室周围一脑室内出 血与脑室周围白质软化的诊断建议[J].r}1华儿科杂志,2007,45 (1):3436. [2]陈惠金.美国神经学会新生儿神经影像指南[J].实用儿科临床杂 志,2008,23(2):157—160. [3]阮珊三,刘维民,马金凤,等.早产儿脑损伤225例超声诊断及高 危因素分析[J].1临床儿科杂志,2009,27(4):380—383. [4]方润婷,陈志风,李锐钦,等.33例早产儿脑白质损伤的临床及 MRI特征分析[J].当代医学,2009,15(9):3031. [5]黎小秀,张旭.早产儿脑损伤的诊断评估[J].I临床和实验医学杂 志,2007,6(7):3839. ? 综述? ? 669? [6]姚裕家.早产儿脑损伤的病因及病理生理机制研究进展[J].临床 儿科杂志,2006,24(3):163—165. [7]ChenD,MaoJ,LiJ,ela1.Clinicalandimagingfeaturesinlate preterminfantswithcerebralwhitematterdamage[J].Zhongguo DangDaiErKeZaZhi,2010,12(6):321326. [8]CerebralPalsyInternationalResearchFoundation.Injurytothe pretermbrainandcerebralpaIsy——part1:clinicalaspectsofin— jurytothepretermbrain[EB/OI]. 1821(accessed7April201O). E9]JobsisFF.Noninvasiveinfraredmonitoringofcerebralandmyo eardialoxygensufficiencyandcirculatoryparameters[J].Science, 1997,198(4323):1264—1267. [1O]周丛乐,刘云峰,张家洁,等.新生儿局部脑组织氧检测的多中心 研究EJ].中华儿科杂志,2009,47(7):517522. (收稿日期:2011-02—16) 孕妇外周血中~INJL有核红细胞分离和应用研究 肖克林,王辉林综述,熊礼宽?审校 (广东省深圳市宝安妇幼保健院中心实验室518133) 关键词:孕妇;胎儿;研究 DOI:10.3969/j.issn.16734130.2011.06.025文献标识码:A文章编号:1673—4130(2011)06066902 无创性产前实验诊断是指利用非侵人性方法获取胎儿细 胞或核酸等物质,用于诊断胎儿是否携带遗传性疾病和先天性 疾病.与传统羊水穿刺,绒毛膜取样等方法相比,该类方法最 大的优势是不会引起孕妇感染,胎儿流产等并发症,因此成为 当前研究的热点.现就从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞 (fetalnucleatedredbloodcells,FNRBC)进行产前诊断研究的 现状综述如下. 1胎儿有核红细胞的分离 1.1微流控技术微流控技术(microfluidics)是利用高度敏 感的微流控设备(包含1个微流控芯片和1个磁性装置)从孕 妇外周血中回收和纯化有核红细胞的一项技术,它利用有核红 细胞的固有特征,分离过程中无需任何抗体,并且分离效率较 高.Huang等利用此法从58例孕妇外周血中分离出FNR BC,发现其产量约为磁激活细胞分选法或SBA亲和素分离法 的1o,20倍.Daniel等?2利用微流控第3代技术回收到纯度 高达74的FNRBC. 1.2流式细胞仪分选法流式细胞仪(flowcytomerer,FCM) 又称为荧光激活细胞分选仪(fluorescenceactivatedcellsorter, FAcs),该方法是目前最常用的胎儿有核细胞分离技术之一. 目前此法多是与密度梯度离心法等方法联合使用.DSouza 等就先利用密度梯度离心法分离孕妇血液中单个核细胞,然 后再运用流式细胞仪分选法从中分选出胎儿有核细胞,最后运 用巢氏PCR技术检测珠蛋白生成障碍性贫血基因突变状 况,取得较好的结果. 1.3磁激活细胞分选法磁激活细胞分选法(magneticacti vatedcellsorter,MACS)是一种免疫磁性分离技术,它先将磁 性微粒包被单克隆抗体,然后将其与细胞上的特异抗原结合, 通讯作者,E—mail:xionglk@yahoo.COITI. 在外加磁场的作用下,将结合单克隆抗体的细胞分离出来. Kwon等利用双密度梯度离心法结合此法从母血中分离富 集FNRBc,发现其产量高于以前的一些相关报道. 1.4密度梯度离心法密度梯度离心法(densitygradient centrifugation,DGc)根据胎儿细胞与母体细胞在体积,密度, 沉降系数等方面的不同,利用分离液通过离心的方法将胎儿细 胞分离出来.根据分离时所利用的介质密度不同,分为单密 度,双密度和不连续密度梯度离心法3种.密度梯度离心法操 作简便,费用较低,所需时间较短,但获得的FNRBC数量较 少,纯度较低,直接用于产前诊断不太适合,因而一般作为分离 的第一步和其他方法结合应用. 1.5亲和素分离法亲和素分离法是利用半乳糖特异凝集素 (galactose—specificlectin)或大豆凝集素(soybeanagglutinin, sBA)选择性地黏附FNRBC,从而达到从孕妇外周血中分离 FNRBC的目的.此方法利用了FNRBC表面含有大量的半乳 糖基这一特性.Babochkina等比较了SBA亲和素分离法和 磁激活细胞分选法从孕妇外周血中分离FNRBC的效率,发现 SBA凝集素法分离的细胞数目比MACS法大约高8倍. 1.6单细胞显微操作分离法单细胞显微操作分离法(mi cromanipulation)是在显微镜下从形态学上识别FNRBC,并用 微操作器将其逐一挑取出,然后用于产前诊断.Nagy等利 用此法分离FNRBC,取得了较好的实验结果,证实了该方法的 可靠性. 2胎儿有核红细胞的临床应用 2.1胎儿性别的测定胎儿性别检测主要是根据性染色体Y 和x在基因结构上存在差异来进行检测,从而达到区别胎儿 性别的目的.Krabchi等利用双色引物原位标记(primedin ? 67O?国际检验医学杂志2011年5月第32卷第6期IntJLabMed,May2011,Vo1.32,No.6 situlabeling,PRINS)技术同时检测FNRBC的X和Y染色体, 发现能可靠和有效地检测胎儿性别,且特异性与荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术相似. 2.2胎儿血型的检测胎儿Rh血型检测对于预防因Rh血 型不合而引起的新生儿溶血病非常有意义,当Rh血型阴性的 孕妇血液中存在Rh血型抗体时,通过检测胎儿的Rh血型,可 以预知其是否会发生因Rh血型不合而引起的新生儿溶血病, 从而可以采取相应的防治措施.Simone等直接利用流式细 胞仪检测FNRBC的RhD血型,其同时利用CD71,GPA和 RhD血型3种单克隆抗体标记FNRBC,发现此方法与逆转录 PCR法有很好的相关性,并且有可能作为未来临床应用的一 个发展方向.此外,ABO血型基因变异时有发现,已逐步引起 重视,利用FNRBC也可用于该方面的研究. 2.3单基因遗传病的诊断单基因遗传病种类很多,常见的 有珠蛋白生成障碍性贫血,甲型血友病等,他们都是由某一对 (或个)等位基因存在异常而引起.利用从孕妇外周血中分离 的FNRBC,可用于诊断此类疾病.DSouza等利用FNRBC 检测B珠蛋白生成障碍性贫血,并以绒毛膜取样或脐血穿刺结 果为参照,此法的准确率为8o. 2.4胎儿染色体异常的诊断利用FNRBC检测染色体异 常,目前主要利用FISH技术,Mavrou等通过计数分离得到 的FNRBC数量来作为检测胎儿染色体异常的一个补充指标. 2.5病理产科相关的检测有关胎儿有核细胞与产科病理过 程的相关性研究是近年来的一大研究热点,FNRBC及其成分 在数量上的改变可用来预测产科的病理过程,目前常用于先兆 子痫,胎儿生长受限,囊性纤维病等方面的研究.Aali等一通 过分析孕妇外周血和脐带血中分离的FNRBC数量来研究其 与先兆子痫的关系,发现母血和脐带血中的FNRBC数量与先 兆子痫具有明显相关性,并且其数量的增高可能与胎盘供血不 足有关. 3展望 综上所述,从孕妇外周血中分离胎儿有核细胞的方法众 多,且取得了一定的进展,但这些方法尚存在,操作相对复杂, 费时费力等不足,有些方法虽然相对简便,但分离效率却不高. 因此,在今后的研究中,特别是在分离方法上,尚需寻找一些操 作简便,快捷且分离效率相对较高的方法.相信随着分子生物 学,免疫化学等技术的不断进步和更多胎儿细胞特异性抗原的 发现,将能够从孕妇外周血中有效地分离出胎儿细胞用于临床 ? 综述? 产前诊断,真正实现产前诊断的无创性. 参考文献 CKS2蛋白及其在恶性肿瘤中的研究进展 (收稿日期:2011-01—04) 王佳佳综述,张忠英?审校 (福建医科大学教学医院/厦门大学附属中山医院临床检验中心361004) 关键词:细胞周期;肿瘤;研究;CKS2蛋白 DOI:10.3969/j.issn.1673—4130.2011.06.026文献标识码:A文章编号:1673—4130(2011)06—0670—04 周期蛋白依赖性激酶亚基CKS(cyclindependentkinase subunit)家族广泛存在于真核生物,它由一组相对分子质量为 (9,18)×10.的小蛋白构成,对细胞分裂周期的调节起重要 通讯作者,E—mail:zhangzyl121@yahoo.corn.cn. 作用.人类细胞中存在两种CKS(又称CKSHS)蛋白,分别为 CKS1(cyclindependentkinasesubunit1)和CKS2(cyclinde pendentkinasesubunit2).其中CKS2已被观察到在多种恶 l234567891