鹿丹通督片对大鼠实验性腰神经根炎的影响

鹿丹通督片对大鼠实验性腰神经根炎的影响 鹿丹通督片对大鼠实验性腰神经根炎的影 响 p口口,J2【多 , 庸丹通督片对大鼠实驻性攫神经桎炎的影响一沈霖(总131)?3? ? 实验研究? 鹿丹通督片对大鼠实验性腰神经根炎的影响 蝌埘附缄汉?? 2/’ /午沈霖高兰一谢晶李同生,一/’)) 提要将96只大鼠随机分为高,低剂量治疗蛆,布洛芬蛆和盐水蛆.用化学刺教击建立大鼠第5腰椎神经椎交模型,观察模鼠下 肢神经功能和局郜病理变化,井进行胫前肌运动神经传导速度和脑组织单胺类神经递质击甲肾上腺素【NE),5-羟色胺(5一HT), 5-羟吲嗥醋酸(5一HIAA)厦内啡哦(EP剖定.结采显示,虎丹通督片能减轻模鼠炎区神经椎水肿,保护神经醢鞘的蛆织鳍构; 可调节神经递质的代谢过程,使模鼠脑蛆织中NE,5一HT厦3-HIAA台量降低,EP台量升高j促进模鼠怠肢步态,触觉厦神经 电生理功能的恢复. 主题词塑墨!墨堂/宴堡苎痘适鹿丹通督片/治疗应用神经递质一电生理实验研究 中围分类号:R289.5;R745.4文献标识码:A文章编号:JO01—6015(2000)030003—03 鹿丹通督片具有通督活血之功,是名老中医李同生教授 治疗腰椎臂狭窄症所致的腰腿疼痛,问歇性跛行的有效验 方..为了进一步探讨其作用机理,本研究观察了该方对太鼠 宴验性腰神经根炎的影响现如下 1材料与方法 11实验药物鹿丹通督片药物挺膏由{胡北省中医药研究 院提供[批号980731.生药:挺膏(3.2761),丹参酮IA音 量0.065],按比例用蒸馏水配制成每毫升古生药量1g或 2的混悬藏备用腰痛宁[冀卫药准字(1995)第080197号,国 家中药保护品种,ZYB20794194河北承德中药厂,批号 980533—303折开胶囊后,配制成2g?ml_.生药的混悬寝 1.2主要试剂去甲肾上腺素(NE),5-羟色胺(5一HT)及5一 羟吲哚乙醴(5一HIAA)品为Sigma产品,内啡肚胸自第 二军医大学神经生物学教研室(批号9701023)其他试剂均 为市售分析纯 1.3动物模型的复制96其Wistar太鼠(胸自同挤医科大 学动物实验中心,动物合格证,普通一级动物),雄雌各半,体 重200,230g.参照文献.叫法复制腰神经根模型造模前,用 打孔器把定量滤纸打成直径为0.5cm的圆片,干重为1.8mg, 爱人0.5的福尔马林寝中挺泡24小时,取出湿重为5rng左 右作为致炎物备用实验鼠用5戊巴比妥钠(50mg.kg’.体 重)腹腔麻醉.麻醉后用手术剪仔细剪除术区背毛,活力碡原 藏梢毒手术区,俯卧位,以Lr—L:椎体间暾为中心,取后背正 中切121沿棘寰纵行切人1.5cm,暴露棘寰及两侧椎体,用咬骨 钳咬开L两侧横寰以上椎板,向上翻开,在第5腰神经根的 腋侧放置浸泡后的定量滤纸片,使椎板复原,逐层缝合,无苗 包扎 1.4实验分组将96只模型太鼠随机分为4组,每组24 只A组为模型对照组,于致炎术后24小时开始灌胃给服生 理盐水,每只每日3m|.B组为鹿丹通督片低剂量组,灌服鹿丹 通督片药藏15g?kg,,每日1次C组为鹿丹通督片高剂量 组,灌服通督葑液308?kg,,每日1次.D组为腰痛宁阳性对 照组,灌眼腰痛宁药渡30g?kg,,每日1次. 所有模鼠均用鼠标准饲料(同济医科大学动物实验中心 提供)常规喂养3O天,采用I2小时光照,12小时黑暗的昼夜 循环形式,室温控制在18?,28?之间,每周3次更换底料以 保持鼠的清洁各组丹剐在术后第1,5,10,20,30天,按时观 察横鼠征象.并于术后第10,2O,30天每组随机处死8只模 鼠,分另『f进行相美指标分析. 1.5观察指标 1.5.1神经根交模鼠征象观察于致炎术后第1,5,10,2O, 30天按文献”法对模鼠的步态,触觉等进行观察,并参照 Siegal:推荐的神经功能羚断评分.评分标准如下. 1.5.1.1步志观察0分:患肢全瘫,无自主括动.1分:患肢 半瘫,有肌肉收缩及轻微美节运动.2分:患肢运动力量差,美 节运动迟缓,行走具有明显不稳定性.3分:患肢有趾问美节 运动障碍.4分:患肢慨复正常运动. 1.5.1.2触觉反射O分:用棉签轻触患肢足趾,无任何反 应.1分:患肢有轻徽屈伸反应2分:有屈或伸后肢反应,但反 应迟缓3分:患肢反应较迅速,但触觉灵敏度较健侧稍差4 分:患肢触觉灵敏虚与健侧无差异 1.5.2电生理定于术后第30天模鼠处死前对模鼠双后 肢行电生理疆I定.测试设备为丹麦产DANTECCounterpoint MK-2型电生理仪参考Fullertor方法?测定模鼠胫前肌运 动神经传导速度刺激电授和记录电授均为同心针授此电授 在针管的苏部装有细白金丝刺激电投放于坐骨切迹处,记录 电极插入小腿胫前肌每鼠均铡健,患肢以健侧作为正常对 照组.刺激条件:0.1,0.2ms方波,刺激强度JOmA,以达到鼠 的后肢出现弹动为宜刺激频率1.OHz,灵敏度每格为20f~V, 窗口打描速度每格为5m8.潜伏期(LAT),峰值(AMP)及面 积(AREA)由测试仪器自动输出 1.5.3太鼠脑组织申单胺粪神经连盾测定取实验30天各 组处死太鼠,迅建打开颅腔,取全脑,除去小脑,将大脑组织放 于硫酸纸上称重.将脑组织放人装有3ml预玲的酸性正丁醇 溶液中,追除纸重,求得脑组织净重.按1:3O比例补充酸性 正丁醇量,制备组织匀浆.将组织匀浆倒人带塞离心管中,振 凿5min,每分钟3000r离心10min,取上清液按荧光分光光度 法进行NE,5HT及5-HIAA测定.仪器使用日车岛律RF 5]0荧光分光光度计,汞灯光源,Jcm×Jem石英比色杆激发 光波长365nm,发出光波长48Ohm.结果以”g-1OOmg脑组 织示. 1.5.4脑干厦下丘脑内啡肽测定将前述脑组织中的脑 中医正骨2000年第l2卷第3期 干,下丘脑在沸生理盐水中煮5min,以灭括醇,保持神经肽的 稳定.组织称重后,分别置于玻璃匀浆管内,加 NHcl? mI,,充分匀浆后倒于塑料指形管中,在室温中放置30min, 使生物活性肚充分溶解在酸中再加 NNaOH中和酸,每 分钟4000r,离心10min,取上清,放低温(一27?)保存特测.按 神经肽放免药盒使用说明书进行.仪器使用上海日环NX一695 型计数器. 1.5.5病理姐织学观察取术后第10,20,30天娃死的模 鼠,L.,S段脊髓及神经石蜡切片,HE染色.光镜下进行病 理观察. 2结果 2.1麂丹通督片对神经根炎模鼠症象的影响 2.1.1步态木后第1天,4组患肢全瘫模鼠占83.3, 91.7之问.在第5,10天各组模鼠患肢活动功能均在进步, 以c组进步最快在第2O天C组有4只模鼠步态恢复正常, B,D两组各有2只,而A组无1只恢复正常在第30天,C组 有13只模鼠恢复正常,3只模鼠仅有趾问关节运动障碍,而A 组仍无1只恢复正常,其中有4只仍处半瘫状态,B,D两组分 别有8只,7只模鼠恢复正常.见表1. 2.1.2触觉各组触觉在1,5天差异不大,第10天C组患 侧后肢触觉灵敏度明显优于A组(尸<0.05);第20,30天与 A组差异更大<0..1).B,D组在第20,3O天与A组比较 也有显着差异均<0.05),见附图. 2.2各组胫前肌运动传导速度(NCV)谢定四组模鼠在术 后30天时无1例出现完全神经传导阻滞.但A组胫前肌运动 传导速度的潜伏期,峰值及面积发生极其显着的异常tB,D两 组峰值明显高于A组(尸<0.05).C组潜伏期虽较健侧稍延 长,峰值稍下降,面积仍明显低于健恻,但与A组比较差异明 显[尸<005).见表2 2.3各组脑组纲中单胺神经递质谢定B,c两组NE,5一 HT,5-HIAA测值均显着低于A组(尸均<0.05),D组NE虽 然较A组低,但无统计学差异均>0.05).见表3 2.4各组内啡肽测定结果B,c,D三组组各脑区EP 古量均显着高于A组(,J<0.05).见表4. 表L各组神经根炎模鼠步奄观察评分z~s 袅3各组脑组纲中5-HT,5一HIAA,NE测定结果士,ng?100mg脑重 测定指标A组一8)B组(n一8)C组0:8)D组”=8) :16 . 788?2.53613.138?1459’83ooJko.283’15.463?2?179 HIAA13375士1.4599.163~_06287563~0.329’97ooi0?941’ 注与A组比较*尸<0.05 2.5病理组纲学观察结果随着术后时间的推移,病理变化 由充血水肿,炎症细胞反应,异物肉芽肿,逐渐向瘟痕化过菠. 各实验组病理变化的共同点如下:?术后10天,致炎物周围 的脊髓膜,神经外膜上的小血管扩张充血,神经纤维及白髓问 质水肿,淋巴细胞浸漓,袖突变性或消失,髓鞘串珠状空泡变 性.?术后20天,异物肉芽肿形成,其外周为纤维组织构成柏 鞘壁包绕,其内是多校巨细胞,钎堆母细胞及细奸维抻经奸 维和白髓内仍可见不同程度的变性和淋巴细胞(下转第6页) ?6?(总134)想的. 表1临床理襄疗效统计表 3结论 动物实验的红外光谱分析结果与white实验比较说明虽 非屙种动物,仍可看出断端应力能够促进骨折端禽台而功能 锻炼可使骨折端获得应力刺激.所以,具有我国自身特点的中 医和中西医结合骨折疗法,在治疗过程中强调功能锻炼,确能 加快骨折愈合速度,提高盘合质量,雅短疗程.临床观察也验证 了实验结果的可靠性. 4参考文献 1剖亨远#振福,顾志华.骨折加压过程中有机质转化成无机质的红 外光谱.河北师范尢学1986;增刊:175 2颇志华,高瑞亭.骨怕生物力学基础.王肆:夭律大学出版社1990 255 3尚天裕,孟和,顾志华,尊.肌内内在动力对中西医结合希疔股骨骨 折的帆理探讨.中医杂志198223(B):6s (1999一l._24收稿2000—0l—l6修回) (上接第4页)授润@术后30天,异物肉芽肿内胶原纤维增 多,向瘢痕化方向发展.各实验组病变差异如下:?术后1O 天,A组的血管克血,组织水肿最明显,并伴有大量淋巴细胞 浸滑.轴突和髓鞘变性严重,部分轴突消失.c组的神经组织 充血水肿,淋巴细胞程润及轴突髓鞘变性,在各组中最轻.B, D两组的病变开于以上二者之间,其中D组较差?术后20 天,A组的异物肉芽肿壁略厚于其他各组,充血较明显,淋巴 细胞较多,肉芽肿内纤维母细胞较多,教步量腔原纤维分隔, 轴突和髓鞘变性基本同术后10天.C组神经纤维中仅有淋巴 细胞,变性明显减轻,轴突部基本恢复正常.B,D组的神经纤 维变性及淋巴细胞授润的减轻及恢复程度不如C组良好.特 别是D组的髓鞲变性仍较田显,授润的琳巴细胞仍较多.?术 后3O天,A组肉芽肿范围仍较大,结缔组织增多t胶原纤维粗 大.神经纤维仍有散在的空泡变性.胶质细胞增多和步量炎症 细胞.C组肉芽肿内胶质纤维稍细,大部分神经纤维恢复正 常.B,D两组肉芽肿内胶质纤维稍多.神经纤维尚有空泡. 3 5 营! 基 J 【) f__,,r_ \. f一 l烂:.. 附图各组神经根炎模鼠触觉比较 注与A组比较:*P<O05;*P<001 3讨论 本实验结果显示,鹿丹通督片对模拟大鼠神经根炎有良 好的治疗作用.在鹿丹通督片作用下,模鼠患肢在治疗后10 天,步态和触觉就明显优于盐水对照组j治疗20,30天,鼠息 肢运动和感觉基本恢复正常,与盐水组比较差异显着.从电生 理测定结果分析,在治疗3.天后,鹿丹通督片高剂量组的胫 前肌运动神经传导速度与健侧比较元明显差异,而盐水组患 肢电生理仍呈波形分化不佳,波幅下降,潜伏期延长. 单胺类神经递质包括去甲肾上腺索(NE),5一羟色胺怕一 HT)等,在大脑许多功船的控制和谴节中起重要作用.5一羟吲 噪醋酸(5HIAA)是5一羟色胺主要代谢产物.测定脑内单胺递 质及其代谢产物,可了解这类递质在脑内的释放,转化,是探 索有关药物作用机制的重要手段一般认为,内啡肽是一类神 经递质和调节物质,其脑组织中内啡肽古量高低,与机体艚阐 有关从本实验结果显示,模拟神经根炎大鼠脑组织5一HT,5一 HIAA和NE古量显着升高,而EP古量明显降低.用鹿丹 通督片治疗后,单跛类神经递质及其产物吉量下降,}EP古 量增加.说明该药可谓节脑组织中上述神经递质的代谢过程, 从而实现镇痛作用,调节病态机体和康复. 从病理组粤{学分析显示,鹿丹通督片2个帮量组均可减 轻模鼠局部炎症的水肿,充血,炎性细胞浸润,使神经髓鞘的 变性减轻,结缔组织增生减少.有利于神经根炎的康复. 4参考文献 1李同生.中医希疗腰椎管获窄症.瑚北中医杂志i983;5:30 2蒋位庄,范明,周卫等.疆瘫1号方治疗模拟神经根炎.中西医结 舍杂击i968}8(特集)lZ4 9蒋位庄.范明,陈燕平,等.活血化密财椎间盘谭性疆腿痛的临床和 宴验研究.中国骨伤1991;4(i)}8 4苗燕玲,捌恩.疆痛i号方治疗实验性神经根炎的病理学观察.中 国骨伤i9936(1):1 5S[egalT.S[egalTI.ShapbaY}eta1.1ndomethaclnanddexam etImsontreatment】nexpeNmentalap[nalcordeompregsionNeu— rosurgery1988;22I328 BFullertonPM.Chronicperipheralneuropathyproducedbylead poLsomng”gume~plgsJNeuropath?….1996}25{214 7李倥亳.王钍茂中药药理实验方}击学.上海?上海科学技术出版 杜1991;182~189 (1999—09r02收稿1999一儿一l7恪回)