植物蛋白质提取方法总汇

植物蛋白质提取方法总汇 植物蛋白质提取方法质质 一、植物质质蛋白质提取方法 　　、根据质品重量;质品加入提取液～可根据材料不同适加入,～准质提取液放在上。当冰11g3.5ml 　　、把质品放在质中用液磨～磨后加入提取液中在上置;研氮研研冰静小质,。23-4　　、用心机心离离?或?38000rpm40min411100rpm20min4　　、提取上液～质品制质完成。清4 　　蛋白质提取液,300ml 　　、;, 11Mtris-HClPH845ml 　　、甘油;,2Glycerol75ml 　　、聚乙质质质;吡咯,3Polyvinylpolypyrrordone6g 　　质质方法质质～垂直板质泳,SDS-PAGE 　　 　　二、植物质质蛋白质提取方法 　　质醋酸丙质淀法—沉 　　、在液中磨片氮研叶1 　　、加入质品质体倍的提取液在?的件下质夜～然后心;条离?以上小质,上。弃清23-2048000rpm1　　、加入等质的浴丙质;含体冰的质基乙醇,～质后心;匀离?以上小质,～然后空真30.07%β-48000rpm1干燥淀～质用。沉 　　、上质前加入裂解液～室放置温分质～使蛋白充分溶于裂解液中～然后心;离?以上小430158000rpm1 质或更质质质以有淀质质准,～可质质保存在没沉?待用。4 　　、用法定量蛋白～然后可分放入装?质用。5Brandford-80 　　质品,提取液,含和的质基乙醇的丙质。裂解液,尿素溶于质菌的10%TCA0.07%β-2.7g0.2gCHAPS3ml 去子水中;质质质离体,～使用前再加入的。5ml1MDTT65ul/ml　　质质方法质质向质泳～质质少～子质度小的特点,然质向质泳也同质适用～只是质泳的质质质少,双离当条会减 　　 　　三、质质,质膜 黏 　　目的,质质凋亡相质蛋白的表达WESTERN BLOT 　　质用提取蛋白质步质,TRIPURE 　　含蛋白质上液中加入丙醇,;清异每用量,1.5ml1mlTRIPURE 　　倒质混～置室匀温10min 　　心,离～～度～上弃清12000 g10min4 　　加入质酸胍,乙醇,;每用量,0.3M/952ml1mlTRIPURE 　　振质～置室温20min 　　心, 离～～度～上弃清7500g5 min4 　　重质质酸胍,乙醇步次0.3M/952 　　淀中加入沉,乙醇 1002ml 　　充分振质混～置室匀温20 min 　　心, 离～～度～上吹干淀弃清沉7500g5min4 　　,溶解淀沉1SDS 　　心,离～～度10000g10min4 　　取上清度保存;或可直接用于,-20WESTERN BLOT 　　存在的质质,加入,后淀不溶解～质是大的一质～沉很度心后又多了白色定～离沉质晶,质质度～1SDS4SDS含量才左右。1mg/ml 　　解,提蛋白质质盒～外质质大小适中～要碎～立加决另即～然后煮,分质～效果好的。很2X BUFFER510　　 　　四、植物材料,水稻苗～～根叶鞘 　　、毫克质品置于上磨碎冰1200 　　、加～心～离～度～取上清2lysis buffer10000rpm45min 　　、重质心离35min 　　,lysis bufferurea np-40 ampholine 2-me pvp-40　　 　　五、蛋白质质品制质 　　秧苗蛋白质质品的提取按等;,的方法质行。Davermal1986 　　材料剪碎后加入聚乙质质质吡咯及少量石英砂～用液磨成粉～加入氮研100mg10mgPVP-40()1.5 ml 10% 三质乙酸;丙质配制～含即质基乙醇,～混～匀?淀沉小质～?～离心10mM0.07%β--201415000 r/min15 ～上～淀质溶于弃清沉冷丙质含质基乙醇～再于?淀沉小质～同上心上～;有离弃清min1.5ml(10 mMβ-)-201必要再用,丙质含质基乙醇所得淀低冷质空抽干。沉温真80(10 mMβ- 　　按每干粉加入;可质, 液尿素～碳酸质～～二硫质糖醇～mg20μlUKS[9.5 M5mM1.25%SDS0.5%DTT() ～～～?育温～期质质质几2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech IncpH3.5-10)6% Triton X-100]3730min 次～度 ;度低～高质度的尿素质溶液质,温会冰离心～心力越大质质质一点越好,上离清2816000 r/min15 min即可上质质泳。或者度保存-70 　　 　　六、植物根中蛋白质的抽取 　　液磨氮研(1) sample, 　　装用(2) 1.5 ml centrifuge tube 　　加 (3) 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul　　度(4) 12000 rpm, 4, 10-15minite 　　取上质液～蛋白质就在里面 (5)