不同地理株嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性

不同地理株嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性 不同地理株嗜人按蚊对间日疟原虫的易感 性 中国血吸虫病防治杂志2008年第2O卷第4期ChinJSchistoControl2008,Vo1.2O,No.4?265? [文章编号]1005—6661(2008)04-0265—04 不同地理株嗜人按蚊对问日疟原虫的易感性 周华云,朱国鼎,李菊林,金小林,陆凤,刘耀宝,JetsumonSattabongkot,高琪 [摘要]目的比较我国不同地理株嗜人按蚊对问日疟原虫的易感性.方法在我国问日疟流行 区采集问日疟病例血样,采用体外人工膜饲感染系统在实验室同时体外人工感染广东,辽宁,江苏3 个不同地理株的嗜人按蚊,在感染后的7,9d和14d分别解剖蚊胃和唾液腺,并检测蚊体内的卵囊 和子孢子数.结果共配对感染江苏,广东和辽宁地理株嗜人按蚊35批,感染7,9d3种按蚊卵囊 阳性率分别为68.57,6O.o0和68.57%,感染后14d子孢子阳性率分别为22.86,14.29和 22.86%,3种按蚊感染卵囊和子孢子差异无统计学意义(P>O.05).在感染后7,9d分别解剖江 苏,辽宁,广东株嗜人按蚊228,235只和228只,卵囊阳性蚊比例分别为28.O7,25.u%和 26.75%.在感染后14d分别解剖江苏,辽宁,广东株嗜人按蚊150,142只和135只,子孢子阳性蚊 比例分别为10.67,8.45%和l1.85%,三者间卵囊和子孢子阳性蚊比例差异均无统计学意义(P 均>0.05).江苏,广东,辽宁株嗜人按蚊子孢子感染度差异无统计学意义(P>0.05).结论广 东,辽宁,江苏3个不同地理株嗜人按蚊均对问日疟原虫易感. [关键词]间日疟原虫;嗜人按蚊;人工感染;江苏省;广东省;辽宁省 [中图分类号]R382.31[文献标识码]A SusceptibilityofAnophelesanthropophagus as0fChinatoPlasmodiumvivaxZh."Hua一3,,Zh"Cmo-dig,LiJ lin,JinXiao-lin,LuFeng,LiuYae-bao,JetsumonSattabongkot,GaoQ/(1JiangsuInsti— tuteofParasiticDiseases,KeyLaboratoryonTechnologyforParasiticDiseaseControlandPre— vention,MinistryofHealth,JiangsuProvincialKeyLaboratoryonMolecularBiologyofPara— sites,JiangsuProvincialKeySubjectonParasiticDiseases,Wuxi214064,China;2ArmedForces ResearchInstituteofMedicalSciences,Thailand) EAbstract]ObjectiveTocomparethesusceptibilityofAnophelesanthropophagusfromJiangsu, GuangdongandLiaoningprovincesinChinatOPlasmodiumvivax.MethodsThebloodsamplesof patientswithP.v/vaxinendemicareasofChinawerecollectedtOfeedthemosquitoesofAn.an— thropophagusfromdifferentareasbyusingtheartificialinvitromembranefeedingsysteminthelab, andthenthemosquitoesweredissectedduringthe7--9thdayandonthe14thdayafterthefeeding andtheoocystsandsporozoitesinthestomachandsalivyglandofmosquitoeswerecounted.Results ThemosquitoesfromJiangsu,GuangdongandLiaoningweresimultaneouslyfedwiththebloodof 35casesofP.vivax.TheoocystpositiveratesofAn.anthropophagusfromJiangsu,Guangdong andLiaoningduringthe7,9thdayafterthefeedingwere68.57,60.O0and68.57,aswellas thesporozoitepositiveratesofthemonthe14thdayafterthefeedingwere22.86,14.29and 22.86,respectively.Onthe7thdayafterthefeeding,228,235,228mosquitoesofAn.anthro— pophagusfromJiangsu,GuangdongandLiaoningweredissected,andthepositivemosquitorates thoocystinfectionwere28.07,25.11and26.75,respectively.Onthe14thdayafterthe feeding,150,142,135mosquitoesofAn.anthropophagusfromthethreeareasweredissected,the positiverateswithsporozoiteinfectionwere10.67,8.45and11.85V00,respectively.Thenum- [基金项目] [作者单位] [作者简介] 美国政府基金(WRAIR#1126)和"十五"国家科技攻关项目(2004BA718B13) 1江苏省寄生虫病防治研究所,卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室,江苏 省寄生虫分子生 物学重点实验室,江苏省寄生虫病学重点学科(无锡 214064);2ArmedForcesResearchInstituteof MediealSciences,Thailand 周华云(1962一),女,副主任医师.研究方向:疟疾防治 ? 论着? ? 266?周华云等:不同地理株嗜人按蚊对问日疟原虫的易感性 betsofmosquitoesdissectedthinfectivegrade("+","++","+++","++++")ofsporozo— itesofAanthropophagusfromJiangsu,GuangdongandLiaoningwere4,3,2,7;2,2,3,7and 1,6,3,8,respectively.CondusionsA扎 anthropophagusfromJiangsu,GuangdongandLiaoning issusceptibletOtheparasitesofPlasmodiumvivaxandthereisnosignificantdifferenceamon gthe susceptibilitiesofAn.anthropophagusfromthethreeareastoPlasmodiumvivax. [1【ey]Plasmodiumvivax;Anophelesanthropophagus;Artificialbloodfeeding;Jiangsu Province~GuangdongProvince;LiaoningProvince 目前,中国除云南和海南的部分地区尚存在恶 性疟流行外,其他疟疾流行区均为间日疟流行[1]. 自2000年以来,我国中部的安徽,河南,湖北和江苏 4省沿淮河流域地区疟疾疫情明显回升,不断出现 小暴发点和局部暴发流行.由于间日疟分布范围 广,易复发等特点,间日疟的控制比恶性疟更为困 难].嗜人按蚊和中华按蚊是我国分布范围最广 的疟疾传播媒介,也是我国间日疟传播的主要媒介. 嗜人按蚊是中华按蚊的一个近缘种,被认为仅存在 于我国北纬33.以南地区,是我国中部及南方广大低 山丘陵区重要传疟媒介.但近年来在辽宁法库,山 东济宁发现有嗜人按蚊存在[5_引.既往报道表明,嗜 人按蚊的媒介能量为中华按蚊的2O倍;凡是嗜人按 蚊和中华按蚊共存的疟区,疟疾流行程度高于仅有 中华按蚊的地区.不同地理株的媒介按蚊由于所处 的地理环境不同,生态习性的差异等因素造成对间 日疟原虫的易感性可能有不同程度的差异[7_9].我 国在1980年代曾开展过不同地理株中华按蚊对间 日疟原虫易感性的研究,但未见有关对不同地理株 嗜人按蚊相关的研究报道.为比较我国不同地理株 嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性,我们进行了本实 验研究. 材料与方法 1材料 1.1按蚊样本嗜人按蚊广东(横琴岛),辽宁(法 库)和江苏地理株实验样本由卫生部寄生虫病预防 与控制技术重点实验室提供,选择该实验室饲养的 2,5日龄雌性成蚊进行实验室体外人工感染间日 疟原虫实验. 1.2间日疟原虫血样本在我国中部间日疟流行 区医院,选择年龄?18岁,非孕妇,体温?39?,镜 检确诊为间日疟病例,且同意签署知情同意书并捐 献少量血标本用于本研究的志愿者为间日疟原虫血 样捐献者,每位志愿者捐献1,2rIll血液作为本研 究所需的间日疟原虫血样. 2仪器设备及试剂 恒温水浴体外循环系统(JulaboM5型,德 国);饲血杯(MuangthaiVisionandSupply,泰国); 饲血膜(JosephLongIne.,USA);人AB血清(Pro— mocellGmbh,Heidelberg,德国). 3方法 3.1血样采集测量志愿者体温后,每例采集肝 素抗凝血1,2ml,37?保温送实验室. 3.2体外人工感染间日疟原虫每笼分别装100 只嗜人按蚊,并饥饿8h以上;将饲血膜,饲血器和 恒温水浴体外循环系统连接,组成恒温体外按蚊饲 血系统,调试温度保持在37?,并置于嗜人按蚊蚊 笼表面;将抗凝血按每管5001分装后,5000 r/rain离心5rain,吸除上清,每管加人300l的人 AB血清,混匀后加入饲血器进行体外人工饲血3O , 60min.饲血结束后,吸除未饱血按蚊并冷冻处 死,饱血按蚊在温度(27?2)?,湿度(70?lo)的 条件下饲养. 3.3按蚊解剖在感染后7,9d和14d,分别解 剖江苏,广东,辽宁地理株嗜人按蚊的胃及两侧唾液 腺,观察蚊胃的卵囊和唾液腺的子孢子感染情况. 光学显微镜下观察并胃阳性蚊数,唾液腺阳性 蚊数和唾液腺感染度(+:1,1O个子孢子,++: 11~100个子孢子,+++:101,500个子孢子, ++++:?501个子孢子). 结果 1间日疟原虫对不同地理株嗜人按蚊的感染率 共配对感染江苏,广东和辽宁地理株嗜人按蚊 35批,江苏,广东和辽宁株嗜人按蚊卵囊阳性批次 分别为24,21批次和24批次,其卵囊阳性率分别为 68.57,6O.00和68.57,三者问差异无统计学 意义(.一0.76,P)0.05).江苏,广东和辽宁地理 株嗜人按蚊的子孢子阳性批次分别为8,5批次和8 批次,子孢子阳性率分别为22.86,14.29和 22.86,三者间差异无统计学意义(.一1.O7,P> 0.05). 2问日疟原虫感染不同地理株嗜人按蚊的卵囊和 子孢子阳性蚊比例 感染后7,9d分别解剖江苏,辽宁和广东嗜人 中国血吸虫病防治杂志2008年第2O卷第4期 ChinJSchistoControl2008,Vo1.20,No.4.267' 按蚊228,235只和228只,卵囊阳性蚊数分另4为64, 59只和61只,卵囊阳性蚊比例分别为28.07, 25.11和26.75,三者间差异无统计学意义(.一 0.52,P>O.05).感染后14d分别解剖江苏,辽宁 和广东嗜人按蚊150,142只和135只,子孢子阳性 蚊数分别为16,12只和16只,子孢子阳性蚊比例分 别为l0.67,8.45,11.85,三者间差异无统计 学意义(Y一0.90,P>0.05). 3问日疟原虫感染不同地理株嗜人按蚊的子孢子 感染度 感染后14d解剖不同地理株嗜人按蚊发现,江 苏株嗜人按蚊子孢子感染度从"+","++++"的 蚊数分别为4,3,2只和7只,广东株嗜人按蚊分别 为2,2,3只和7只,辽宁株嗜人按蚊分别为1,6,3 只和9只,3种嗜人按蚊的子孢子感染度差异无统 计学意义(P>O.05). 讨论 不同地区的疟疾传播媒介对疟原虫易感性的研 究,对于分析和比较不同地区的疟疾流行特点,制定 不同地区的疟疾控制策略和措施具有重要意义.我 国于1980年代在不同实验室曾有采用实验室体外 人工感染方式进行按蚊对疟原虫易感性研究的报 道,但不仅不同实验室的实验结果有所不同,就是在 同一实验室研究的不同批次之间,实验结果也常存 在很大差异.导致实验结果差异的主要原因包括两 个方面,一是当时所用的简易膜饲血装置不能保证 实验条件的稳定,特别是膜饲感染血温度的恒 定_7_1oJ.有研究发现,当血液温度<36?时,疟原虫 小配子体可开始发育,鞭毛突出[1.因此,采用实 验室体外人工感染方式进行按蚊对疟原虫易感性研 究时,饲血温度的不稳定不仅可导致配子体活力的 改变,而且可导致各批次实验间的感染差异[11-12]. 二是感染血样本身的问题,目前已发现在反复感染 者体内存在的抗体对按蚊体内原虫的发育有一定的 抑制作用[1a-15]. 在本次研究中,我们针对上述两个问题进行了 改进.一是在采血后立即将感染血保存在37?条 件下,同时采用具有自动恒温水浴体外循环装置的 恒温膜饲血系统,确保在进行实验室体外人工感染 时,按蚊体外膜饲血的温度恒定在37?,从而保持 配子体的活力,减少因饲血温度差异导致的各实验 批次间的感染差异.二是在按蚊体外膜饲血前,对 感染血样本进行预处理,用正常人的AB血清替换 病人血清后再进行按蚊体外膜饲血,以排除反复感 染者体内存在的抗体对按蚊体内原虫发育的影响. 相关的实验技术改进,对实验室按蚊体外人工膜饲 感染问日疟实验操作的标准化和规范化方面有很大 提高,为我国不同实验室间疟疾传播媒介对疟原虫 易感性实验研究数据的相互比较和实验结果的比较 分析打下了基础. 在我国中部地区,通过多年长期有效的杀虫剂 室内滞留喷洒等防蚊措施,嗜人按蚊密度已大幅度 下降,成功消除了恶性疟在当地的流行,很多地区已 经很难发现嗜人按蚊.但最新的媒介调查发现,在 我国北方和南方的海岛新发现有嗜人按蚊存在,且 部分地区的嗜人按蚊比例还很高.在这些新发现的 嗜人按蚊分布区,无疟疾病例或疟疾发病率很低,这 与我国中部原有嗜人按蚊分布区存在明显的差异. 目前尚不清楚这些差异是由于不同地区的嗜人按蚊 对间日疟原虫的易感性差异造成,还是与不同地区 的其他疟疾流行因素如地理环境,气候条件,按蚊生 态习性和传染源等差异有关. 本次研究以我国中部原嗜人按蚊分布区的嗜人 按蚊为对照(嗜人按蚊江苏实验株),采用配对实验 方法,研究我国北方(辽宁)和南方的海岛(广东横琴 岛)新发现的嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性.研 究发现,辽宁和广东横琴岛新发现的嗜人按蚊均能 成功感染问日疟原虫,其感染率及阳性蚊比例以及 子孢子感染度与嗜人按蚊江苏实验株均无统计学差 异,显示3个不同地理株的嗜人按蚊均对问日疟原 虫易感,且3个不同地区的嗜人按蚊对问日疟原虫 的易感性并无显着性差异.研究结果提示,辽宁和 广东横琴岛新发现的嗜人按蚊与我国中部地区的嗜 人按蚊一样,均为高效的疟疾传播媒介.目前,在我 国北方和南方的海岛新发现嗜人按蚊分布区,无疟 疾病例或疟疾发病率很低,可能与当地其他疟疾流 行因素如地理环境,气候条件,按蚊生态习性和传染 源等差异有关.由于全球气候变暖和人员流动性增 强等有可能会出现当地疟疾传播或流行. [参考文献] E1]MendisKI,SinaBJ,MarchesiniPA.Theneglectedburdenof PlasmodiumvivaxmalariaI-J].AmJTropMedHyg,2001,64 (1/2):97—106. [2]周水森,王漪,汤林华.2005年全国疟疾形势[J].中国寄生虫学 与寄生虫病杂志,2006,24(6):401—403. [3-IHaySI,GuerraCA,TatemAJ,eta1.Theglobaldistribution andpopulationatriskofmalaria:past,present,andfuture[J]. LancetInfectDis,2004,4(6):327—336. [4]SattabongkotJ,TsuboiT,ZollnerGE,eta1.Plasmodium vivaxtransmission:chancesforcontrol[J].TrendsParasitol, ? 268-中国血吸虫病防治杂志2008年第20卷第4期 ChinJSchistoControl2008,Vo1.2O,No.4 2004?20(4):192—198.estimatetheinfectiousnessofPlasmodiumvivaxgametocyte [5]陆宝麟.我国蚊媒研究最近进展[J].中国媒介生物学及控制杂 carrierstOmosquitoes口].AmJTropMedHyg,2003,69(5) 志,2001,12(2):81—84.:529—535. [63RuedaLM,ZhaoTY,MaYJ,eta1.Updateddistributionre-[12]BonnetS,GouagnaC,SafeukuiI,eta1.Comparisonofartifi— cordsoftheAnopheles(Anopheles)hyrcanusspecies-group(Dip-cialmembranefeedingwithdirectskinfeedingtoestimate tera:Culicide)inChina[J].Zc~3taxa,2007,1407:43-55.theinfectiousnessofPlasmodiumfalciparumgametocytecarri一 [7]柳朝藩,钱会霖,顾政诚,等.当前嗜人按蚊和中华按蚊传疟作 erstOmosquitoes[J].TransRSocTrapMedHyg,2000,94 用的比较研究[J].中华流行病学杂志,1990,11(6):360—364.(1):103—106. [8]李克清,黄瑞芝,曹昌志,等.中华按蚊和雷氏按蚊对问日疟原 [13]KaslowDC.Transmission-blockingimmunityagainstmalaria 虫敏感性的比较实验[J].四川动 物,1982(4):4-6.andothervector-bornediseases[J].CurtOpinImmunol, [93李菊林,周华云,沈宝祥.中华按蚊和嗜人按蚊对间日疟原虫的1993,5(4):557— 565. 易感性观察口].中国血吸虫病防治杂 志,1996,8(4):250.[14]HisaedaH,YasutomoK.DevelopmentofmMafiavaccinesthat [103杨柏林,王文俊,汪文仁,等.对间日疟原虫配子体活力周期 blocktransmissionofparasitesbymosquitovectors[J].JMed 性的实验研究[刀.寄生虫学与寄生虫病杂 志,1984,2(4):238-Invest,2002,49(314):118—123. 242.[15]KaslowDeTransmlssion-blockingvaccines[J].ChemImmu一 [11]SattabongkotJN,ManeechaiNJ,PhunkitcharVT,eta1.Com-nol,2002,80:287-307. parisonofartificialmembranefeedingwithdirectskinfeedingto[收稿日期]2008-05— 23[编辑]沈怡平 i;{i{ttttitjtt{tii;{};;;;;;;;;{t#{;;i;i;;;;;;;;;=ii;;;;;{;;;;;;;;;;;;t{{;;;;;;;;;i;i{;?{t;;i;;;;;{,?? E{t [文章缩号]1oo5661(2o08)04-o268_01?岁芮例等幔道? 恙虫病合并慢性血吸虫病误诊为急性血吸虫病1例 Tsutsugamushidiseasecombinedwithchronicschistosomiasis misdiagnosedillsacuteschistosomiasis:onecasereport 李文 [中圈分类号]R532.21[文献标识码]D 1病例资料 患者,男性,36岁,傈僳族,农民,家住云南省永胜县血吸 虫病重度流行区光华乡水井村.于2006-O7—18不明原因出 现不规律发热,咳嗽,头痛,腹痛,全身酸痛等症状,在当地村 卫生室经抗生素对症治疗7d,病情无好转.于7月25日转 镇中心卫生院,诊断为上呼吸道感染,经抗生素对症,支持治 疗3d,病情仍无好转,高热持续不退,体温最高达41?,主 管医师以疑似急性血吸虫病上报永胜县血吸虫病防治站(血 防站),血防站于7月28日派出血防专业技术人员到院进行 会诊.患者发病前在家务农,有疫水接触史.体检:T38?, Pi00次/rain,R28次/rain,Bp90/60mmHg.心,肺正常, 腹软,无压痛,肝剑突下3.0cm,肋下2.0cm,脾肋下1.0 cm.B超提示血吸虫性肝损伤,肝,脾肿大.实验室检查:血 红蛋白120g/L,红细胞4.2×10/L,白细胞13.9×10"/L, 中性粒细胞0.64,淋巴细胞0.32,单核细胞0.02,嗜酸性粒 细胞0.5,肥达氏反应(一),疟原虫抗体(一),血吸虫IHA (+),ELIsA(+),尼龙绢集卵孵化查获毛蚴.诊断为急性 血吸虫病.嘱患者到本站进行抗血吸虫治疗.但患者坚持 [作者单位]云南省永胜县血吸虫病防治站(永胜674200) 到永胜县人民医院就诊,经检查发现患者右侧腋窝外有一黑 色焦痂,无痒痛,且焦痂附近的局部淋巴结肿大,蚕豆大小, 压痛,可移动,结合本村有恙虫病流行史,初步诊断为恙虫 病.给予静脉滴注氯霉素,菌必治,肝安,口服四环素等进行 抗恙虫及对症治疗,病情逐渐好转,3d后体温降至正常,第4 天治愈出院.出院诊断:恙虫病合并慢性血吸虫病. 2讨论 恙虫病是由恙虫病立克次体引起的急性传染病,是一种 自然疫源性疾病,啮齿类动物为主要传染源.人类因被感染 的恙螨幼虫叮咬而感染,临床特征主要有高热,毒血症,皮 疹,焦痂和淋巴结肿大.急性血吸虫病是由一次性感染大量 血吸虫尾蚴引起的急性传染病,以发热,肝脏肿大及周围血 液嗜酸性粒细胞增多为主要特征.本例患者除具备恙虫病 的临床特征外,还伴有急性血吸虫病的临床特征.在体格检 查过程中因忽视了恙虫病的典型特征焦痂及局部淋巴结肿 大,故误诊为急性血吸虫病.提示在诊断急性血吸虫病时, 要在流行病学调查的基础上进行全面细致的体格检查,排除 其他发热性疾病,再结合病原学检查,做出临床确诊. [收稿日期]2008-02—26[编辑]杭盘字