免疫球蛋白E作业指导书

免疫球蛋白E作业指导书 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 1第 页，共 页 3乙 检验科免疫室 版本:A/0 免疫球蛋白E 项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。? 第1步:10μl标本、生物素化的抗IgE单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗IgE单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 ? 第2步:加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 ? 第3步:反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ?检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 2. 标本要求 血清:按标准常规方法采集。 血浆:肝素锂、钠，EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。用枸橼酸钠抗凝的血浆，测定结果需+10%。用氟化钠/草酸钾抗凝血浆，结果比血清低18%。标本在2,8度可稳定7天，-20度可稳定6个月。可冻融5次。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡;放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需 采用罗氏原装配套试剂。 试剂: M:链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖)，1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力 470ng生物素/ml粒子。含防腐剂。 R1:生物素标记的抗IgE单克隆抗体(灰盖)，1瓶，10ml。浓度2.4mg/l，磷酸缓冲液0.085mol/l，pH6.5。含防腐剂。 R2:Ru(bpy)3 2+标记的抗IgE单克隆抗体(黑盖)，1瓶，10ml。浓度4.8mg/l，磷酸缓冲液0.085mol/l，pH6.5。含防腐剂。 校准品:ElecsysIgE定标液(CalSet)货号11930427 质控品:Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)货号11731416 其他所需材料: ? Elecsys通用稀释液 货号11732277 ? Elecsys1010、2010分析仪或E170分析仪 Elecsys1010/2010分析仪需要 ? Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号11662988 ? Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号11662970 ? Elecsys 添加剂液(SysWash)货号11930346 ? Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean) )货号11933159 4. 仪器和校准 使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准: 每批IgE试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用IgECalSet定标液定标。 定标频率: 每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定即根据下列要求: Elecsys2010或E170: 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 2第 页，共 页 3 检验科免疫室 版本:A/0 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 ? 一个月(同一批号试剂) ? 7天(放置仪器上的同一试剂盒) Elecsys1010: ? 每一试剂盒做一次 ? 7天(室温20,25 度) ? 3天(室温25,32 度) 各种分析仪均适用的情况: ?根据要求进行标定:如质控结果超出范围时。 5. 操作方法 按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。 Elecsys2010和E170: 将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。 Elecsys1010: 将冷藏试剂预温到20,25 度后放置于仪器的样品/试剂盘上(室温20,25度)，避免产生泡沫。使用前手工打开试剂瓶盖，使用后手工关闭试剂瓶盖。 6. 质量控制 Elecsys通用质控品(PreciControl Universal)1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 7. 计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算结果，单位是IU/ml或ng/ml。换算方法是 ng/ml×0.42=IU/ml或IU /ml×2.40=ng/ml 8. 参考范围 9. 分析性能 检测范围:0.100-2500IU /ml或0.240-6000 ng/ml 10. 干扰因素 该方法不受黄疸(胆红素<37mg/dl)、溶血(血红蛋白<1.1g/dl)、脂血(脂质<2200mg/dl)和生物素<100ng/ml干扰。溶血会产生干扰。接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰(6000U/ml)。36种常用药物经试验对本测定无干扰作用。IgE浓度高到50000IU /ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗钌抗体的干扰。IgE测定结果应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。 11. 结果解释 12. 临床意义 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 3第 页，共 页 3 检验科免疫室 版本:A/0 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 免疫球蛋白E(IgE)在抗寄生虫感染和变态反应(I型变态反应)中起重要作用。I型变态反应的特征在肌体接触变应原后即刻产生过敏反应。变应原与致敏肥大细胞或嗜硷细胞结合后可与细胞膜上的IgE交叉结合。进而导致细胞脱颗粒，释放活性因子(如组胺)，产生典型的I型变态反应症状。正常情况下血清IgE的含量很低(低于血清免疫球蛋白总量量的0.001%)。IgE浓度与年龄有关，新生儿含量最低，以后逐渐增高，5-7岁达到稳定水平。但特定年龄段的人群，IgE含量变化还是较大。婴幼儿近期的呼吸道感染，检测IgE有诊断参考价值。因为IgE在变态反应中有重要意义，其含量升高还可见于枯草热、过敏性支气管炎和皮炎。IgE含量正常不能排除过敏性疾病。因此，在临床鉴别诊断过敏性和非过 敏性疾病时，定量测定人血清或血浆中定量测定人血清或血浆中IgE的含量只有与其它临床检查联合应用才有实际意义。 非变态反应性疾病血清IgE含量也可升高，见于支气管肺曲霉病、威-奥综合征、高IgE综合征、IgE骨髓瘤和寄生虫感染。 Elecsys IgE试验采用了人IgE特异的单克隆抗体。 13(参考文献 编写: 审核: 批准: 批准日期: 年 月 日