复合多糖胶囊中原花青素含量、测定方法的研究

复合多糖胶囊中原花青素含量、测定的研究 复合多糖胶囊中原花青素含量、测定方法的 研究 现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vo1.27,No.10 复合多糖胶囊中原花青素含量 , 测定方法的研究 张晓燕,杨宜婷,刘硕 (无限极(中国)有限叭仁怀公司,广东广州510665) 摘要:对复合多糖胶囊中功效成分原花青素含量测定方法进行方法学验证.按照中 国药典》2010版第一部附录x?I中药标 准分析方法验证指导原则))中的相关规定进行验证.该方法在待测液中原花青素 含量在0~200rtg/rr~范围内线性相关,回归方程:A :0.0037X+0.0078,R2=0. 9997;重复性试验.RsD值小于2.5%;加入3.20---4.80n培原花青素标准品,回收率 100.12%;符合测定要求.3 批滋阴补肾胶囊中原花青素平均含量12.85%.本法具有准确,稳定,灵敏,操作简便 的特点,适用于复合多糖胶囊中原花青素含量 的测定. 关键词:多糖;葡萄籽提取物;原花青素;方法学 文章篇号:1673.9078(2011)1o.12881290 MethodologicalValidationofProcyanidinContentinComplex P0lvsacchar0seCapsules ZHANGXiao-yan,YANGYi-ting,LIUShuo (Infmitus(China)CompanyLtd.Guangzhou510665,China) Abstract:ThemethodologicalvalidationofProcyanidincontentinComplexPolysaccharos eCapsulesforNourishingYinand SupplementingKindneyweremadeinthispaper.Accordingtothehinesepharmacopoeia,ch pappendices,2010,themethodwaseasytocontro1. Theco.elationwasR:0.999;Thelinealrangewas0-200~g/mL;Thereproducibility(RSD)W as<2.5%:Therateofsamplerecoverywas 100.12%:AndtheaveragecontentofprocyanidinofthreeCapsulesWas12.85%.Thestudypr ovidedthebasisfortheproductionofcapsules. Keywords:polysaccharose;greepseedextract;Procyanidin;methodological 原花青素是存在于植物中的一大类双黄酮衍生物 的天然多酚化合物的总称,是由多羟基黄烷一3一醇单元 构成的低聚体或多聚体,由不同数量的儿茶素或表儿 茶素结合而成l".广泛存在于葡萄,蓝莓,李子等植物 中,其中葡萄籽是原花青素的主要来源[2].原花青素具 有极强的抗氧化性,在人体内的抗氧化和清除自由基 的能力是VE的50倍,vc的20倍,还具有保护心血管, 预防高血压,抗肿瘤,抗辐射及美容等作用13J.. 本复合多糖胶囊是由熟地黄,枸杞,黄精,党参, 香附,白芍等中药材提取出的复合多糖及天然的超级 抗氧化因子.葡萄籽提取物精制而成,具有"益肾养肝, 滋补阴虚及调和脏腑"的功效H.对女性常见的气色不 佳,面部黄褐斑等有也较好的改善疗效.本文通过对 产品中原花青素含量的方法学验证研究,为控制产品 质量提供了依据. 收稿日期:2011_06_09 作者简介:张晓燕(1980-),女,硕士,研究方向:功能性保健食品 1288 1材料与方法 1.1材料 1.1.1原料及试剂 复合多糖胶囊,原花青素标准品(天津尖峰天然 产物研究公司,95%) 甲醇(分析纯),正丁醇(分析纯),盐酸(分析 纯) 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2.12H20溶液:用浓度为2 mol/L盐酸配成2%(m/V)的溶液,原花青素标准品: 葡萄籽提取物(纯度95%) 1.1.2仪器 电子天平PL303型(梅特勒一托利多仪器(上海) 有限公司),UV-2800型紫外可见分光光度计((尤尼 柯)上海仪器有限公司),TU一1810紫外可见分光光度 计(北京普析通用仪器有限责任公司),回流装置 1.2方法 1.2.1对照品溶液的制备 现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vo1.27,No.10 取用原花青素标准品10nag,加甲醇配制浓度为 1mg/n~的标准品溶液. 1.2.2样品的处理L5 挤出20粒复合多糖胶囊物,研磨均匀.称取 50mg试样置于100mL容量瓶中,加入30mL甲醇, 超声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇 匀,离心或放置至澄清后取上清液备用. 1.2_3检测波长的确定 原花青素对照品溶液按1.2.2步显色后,用外可见 分光光度计在可见光波长范围内对样品进行扫描,测 定不同波长的吸光度,得到显色物质的光谱扫描曲线, 结果显示,在入=546am处有最大吸收. 波长/IIITI 图1原花青素光谱扫描曲线 Fig.1TheabsorbancecurveofProcyanidin 2结果与讨论 2.1线性关系的考察 精密吸取0,0.1,O.25,0.50,1.00,1.50,2.00mL 置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,配成浓度为0, 10,25,50,100,150,200~tg/mL的待测溶液,取1 mL检测. 待测液中原花青素含量/(p.g/mL) 图2原花青素含量与吸光度之间的关系 Fig.2TheStandardCurveofProcyanidinreference 将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后,取出6mL 置于具塞锥瓶中,再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1mL 标准品溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min 后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546am 波长处平行测定待测溶液的吸光度.以"待测液中原花 青素含量"为横坐标,以"吸光值"为纵坐标绘制标准曲 线,得回归方程:A=0.0037X+0.0078,R2=0.9997. 待测液中原花青素含量在0~200范围内与吸光 度呈现良好线性关系.结果见图2. 2.2精密度试验 2.2.1重复性试验 取复合多糖胶囊(批号20100707),平行进行6 次测定,计算其RSD值.结果见表1. 表1重复性试验结果 Table1Theresultofrepeatabilityexamination 本重复性试验RSD值小于2.O%,仪器重复性良 好. 2.2.2精密度试验 取批号为20100707的复合多糖胶囊,由2名操作 人员分别在3d内用不同的仪器进行测定,实验操作 按重复性试验步骤进行,结果见表2. 表2精密度试验结果 Table2TheprecisionexaminationofUV ... 平行测定结果平均值 日期仪器操作者''''''.RSD/% /(10.g/g)/(10.g/g) NO.112.5O12.81 第1d N0-2l1.8912-21 NO.112.1412_36 第2dUv_280012.352.16 NO.212.7312.55 第2dTU.1810NO?112?5112,12 .341.16 NO-212-3912.44 第3dNO?112?3812?27 Q:三三:竺!: 结果表明,精密度试验RSD值在5%以内,重复 性良好. 2-3准确度试验[刀 取已知浓度为12.60g/100g的复合多糖胶囊(批 号20100707)约25mg,共9份.进行高中低三个水 1289 92—95O3—23 — 1O—l824—31, 12-12 OO—OO NN—NN d,d 3—1 第一第 现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vo1.27,No.10 平浓度的加标,各水平浓度平行3次,按照重复性实 验确定的样品平均值含量与实际取样体积换算得出 "待测液中原花青素含量"和"对照品加入量"及实际测 定值来计算其回收率.测定时做平行样,结果见表3. 表3样品加样回收试验 Table3Theresultofrecoveryexamination 样品供试品中原花对照品加测定值回收平均回RSD 重/mg青素的-~r/mg入量/rag/rag率/o/0收率/%值/0/0 2.4稳定性实验J 按照方法对复合多糖胶囊进行显色稳定性试验. 样品显色后,分别在放置omin,10min,20min,30 min,40min,50min,60min测定吸光度,与显色后 首次测定值进行比较,计算相对相差值.实验结果见 表4. 表4样品测定结果的稳定性 1290 见表5. 表5样品平行测定结果 Table5Thecontentdeterminationofsamples 批号测果结值相对相差 /% /(1Og/g)/(1Og/g) 12.58 2010050712.803.1 l3.02 13.08 20100511l3.o01.7 12.92 12_39 2010070712.602_4 12.81 上述实验数据结果的相对相差值均小于5%,样 品测定结果稳定. 3结论 本研究参照《中国药典2010版第一部附录xvIII中 药标准分析方法验证指导原则》进行,建立了紫外分 光光度法测定复合多糖胶囊中原花青素检测方法,并 对该测定方法进行了方法学验证.方法学考察结果表 明,该法线性关系良好,回收率,精密度高,重复性 良好,具有准确,灵敏的特点,能有效控制该产品的 产品质量,可作为原花青素质量控制与评价的方法. 参考文献 鲍俊竹'陈月坤,徐桂花.测定葡萄籽提取物中原花青素含量 的方法[J].农业科学研究,2005,2(61):43 赵平,宋学娟,张月萍,等.葡萄籽原花青素含量测定[J].河北 化工,2007,30(1):46-47 马庆一,宋彦显,赵松涛.葡萄籽原花青素的分离纯化及其自 由基淬灭活I生的研究【J].现代食品科技,2007,23(5):4—7 张晓燕,从仁怀,杨宜婷.滋阴补肾复合多糖胶囊成型性工 艺研究【J】.现代食品科技,2010,26(10):1139 王光亚.保健食品检验与评价[M】.2003版.北京: 中华人民共和国卫生部,2003 赵益,黄宇玫,杨彦平,等.葡萄原花青素含量测定方法的研 究进展[J].甘肃中医学院,2006,23(6):43-45 国家药典委员会.中国药典二部[M].2010版E京:中国医 药科技出版社,2010:附录194 ?