比色法测定低含量硫酸软骨素制剂中硫酸软骨素含量

比色法测定低含量硫酸软骨素制剂中硫酸软骨素含量 也是非常必要的。 6(3现有酶制剂产品的应用研究生物体产生的酶不仅有催化作用，某些酶同时还具有其它功能。我们长 期以来对已有酶制剂的应用研究只局限于酶对于它的最适底物的功能，对酶作为蛋白质和生物大分子的其 他功能的研究工作很少甚至空白。 6(4酶的产业化研究国际上已发现的酶中产业化生产的不到一成，我国产业化的品种就更少了。应抓紧 在研的酶产品尤其是中试产品的产业化研究。 酶制剂巨大的市场前景和社会、经济效益为世界各国所看好，酶制剂工业被认为是21世纪最有希望的 高科技产业之,。中国的酶制剂行业经历了三十五年的成长，现在正是谋求更大发展的绝佳机会。我们要 根据国情，以酶的应用研究带动新产品的开发和推广，发展适合中国特点的酶制剂工业。 比色法测定低含量硫酸软骨素制剂中硫酸软骨紊含量 杨素珍，王淑华 (山东省生物药物研究院，济南 250014) 硫酸软骨素(cs)是哺乳动物结缔组织的主要成分之一，主要分布于软骨、肌腱、韧带、肌膜和血管壁中。 硫酸软骨素能调脂，防治动脉粥样硬化、冠心病，参与保护和修复神经元，还有抗肿瘤作用，抗HIV活性，抗 炎，加速伤口愈合的作用。其制剂目前国内有片剂、滴眼液等，一般采用部颁标准 测定氨基葡萄糖的方法 和 硫酸钡沉淀法测定硫酸软骨素含量，这两种方法虽然精密度较高，但操作繁琐，时间长，且对于成分复杂、含硫酸软骨素仅千分之一的溶液制剂测定误差大。我们采用测定葡萄糖醛酸的方法控制硫酸软骨素的 含量，此法操作简便，分析时间短，重现性好。 1(略) 2方法与结果 2(1含量测定 2(1(1对照品溶液的制备精密称取经105"C干燥至恒重的葡萄糖醛酸适量，加水制成每lml中含0(1mg 的溶液，摇匀，即得。 2 1(2供试品溶液的制备精密量取日本中新滴眼液lord，置50rd量瓶中，加0(1克氯化钠溶解，摇匀。加无水 乙醇稀释至刻度，强力振摇，静置40min，过滤(孔径为2(0舯的有机微孔滤膜)，轻轻取下滤膜置小烧杯中，加水约15mi，超声处理5min，将洗脱液并入50ml量瓶中，重复处理3次，加水稀释至刻度，摇匀，即 得。 2(1(3测定法精密量取对照品溶液0(3ml，供试品溶液0(5ml，分别置具塞试管中，各加水1(0ml，摇匀。 另取具塞试管一支，加水1(0m,，作为空白对照。具塞试管置冰浴下冷至4?以下，在振摇下缓缓滴加硼砂的 硫酸溶液(0(025mol,L)5ml，置沸水浴中加热10min，冷至室温，加咔唑的乙醇溶液(1(259,L)O(2m1(置沸水 浴中加热15rain，冷至室温。照分光光度法(中国药典2000年版二部附录?A)，在以空白对照为参比， 在 530rim波长处测定吸收度，计算，即得供试品中糖醛酸的含量，乘以2(603即为硫酸软骨素的含量。 2(2阴性溶液对测定的干扰试验 取阴性溶液(按处方比例配制的不含硫酸软骨素的溶液)10ml，置50ml量 瓶中，照含量测定项下方法操 作，在400--800nm波长范围内扫描，阴性溶液在530nm处无吸收，表明阴性溶液无干 扰。 2(3回收率试验 取不含硫酸软骨素的阴性溶液，分别按处方量的80,、100,、120,加入硫酸软骨素，依法 测定，测得平 均回收率为98(58,，RSD为0(42, (n=9)。 2(4精密度试验 取日本中新滴眼液(批号020123)按含量测定项下方法重复测定6次，含量分别为 97(61,、97(96,、 97(78,、98(31,、96(90,、97(32,，平均含量为97(65,，RSD为’0(45, (n=6)。 3讨论 本法测定日本中心滴眼液中硫酸软骨素的含量，专属性强，回收率高，精密度良好，能很好的控制日 本中 573 心懑眼渡的鸯量，解决了硫酸钡渡淀法及测氨基麓楚糖法操{#繁琐，分析时间长，取撵繁大，对于低浓度瑰骥 软骨素制剂测量误差大的阅。 我们参照欧溯药典及生化制药学中透明质酸的测定方法，成功的借鉴了通过测定葡萄糖醛酸推算双糖 含薰酶方法(每1tool硫酸软骨索中禽lmol葡萄糖醛酸)。在测定过程中，采霈醇沉法傻硫酸软骨素沉淀完 全+溷收率裹，且避免了漓眼渡中其它复杂成分的于扰。(参考文献略) 护肝胶囊对入和小鼠体内乙醇脱氢酶活性的影响 苑隆毽，牵恕，王晓挥<北裳生转医药辑宛辑，抱零 100091) 酗洒会S}起身体的不遗，更重要的是长期的大量酒精摄入会造成人体多器官损害，尤其是对肝脏的损 害。目前还没有好的方法来解决如何醒酒，减轻酒后反应醣及对肝脏的损害间题。护肝胶囊是我们在研究 了吉今务释解滔，防醉护翳药方姆基础上，根据试验反复箨选总结出来约护群配方，由沙辣，牡蛎等中药糖 提，并糍以多种维生素加工测成。医学研究证明，乙醇在人体内幽消化道吸收，主要由胖脏代谢，在生理条件 下缀乙醇脱氯酶(ADH)代谢为己醛，进而转化为乙酸，进入体循环，最终排出体外。此外，肝脏中还存在微 粒体乙醇氧化酶系(MEOS)等代谢系统，MEOS的米氏常数(Kin=86mmol,L)眈ADH(2mmol,I()大数 要在摄取高粥量己醇辩发撵作臻。乙醇在代瓣过程中诱发鑫壶基静产生，对萎手驻等多个器富造成损倍，主 此可见，乙醇代谢的过程中两个关键酶就是体内乙醇脱氢酶积乙醛脱氮酶。=者总活力的赢低害。鑫 代谢的速度。为了研究护肝胶囊是否可以诱导乙醇脱氢酶和乙醛脱氟酶的活性，加快乙醇的分解代了乙醇 降低乙醇对人体的损害，我们测定了护肝胶囊对乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活(睫的诱导作用。 谢。从而 1护翳较囊辩对、酝俸肉乙醇脱氢酶活性彰晌的磷究 动物对乙醇戳受性，主要取决于翳驶中乙醇脱氢酶靼乙 醛戏氢酶的含量，邋过小鼠暇题护翳胶囊后测定 小鼠肝内乙醇脱氮酶活性变化，可以考察出护肝胶囊对小鼠体内乙醇脱氧酶活性的影响，从而研究护肝胶囊 护肝作朋机制。 1(1试验楮辩(略) 1(2斌验方法 选取小鼠30只(雌雄各半)，预养3天后，随机分成3组，每组10只。其中设对照组1组，给 药组高、低 量组各1组。对照组先给水0(4ml，半小时后再给38。白酒0(3ml;给药高齐4量组先给含护肝胶囊溶液 0(4ml (浓度为6(Omg,m1)，半小时盾再给38。自酒O(3ml;给药骶帮量缀先给含护秆胶囊溶液0(4ml(浓度 为 2(0mg,翻)，半小孵基荐给38。黩滔0(3ml。务组绘溪半小对后脱颈处死，解妻|取脬脏，做翳细照匀浆。 乙醇脱鬣酶活性测定: A，试剂:?缓冲液:称取焦磷酸钠16(69，盐酸联胺4(og，甘氨酸0(89，溶 解在450ml升蒸馏水中，用 2mol,I。氢氧化钠调节PH至8(7，然詹加蒸馏水500rrd，冰箱保存。?4(5mmol,L辅酶l溶液:称取30mg辅 酶{，女#蒸馏承至10ml;珠籍保存。?O。2moVL乙醇溶液:吸取4。7ml纛承乙醇，鸯珏蒸据衣400ml。 剂:lOrtmoVL琉腮溶液:称取80mg硫脲，加蒸馏水至40rnl。?肝匀浆的制备:小鼠断颈处死，迅速?抑翱 出肝脏，用蒸馏水冲洗干净。然后定量称取0(59左右肝脏，剪成糊状，加入lml生理盐水，捣匀，将辩剖，取 匀浆低温 离心，除掉上层液，取中、下层匀浆液稀释备雨。 B(操作:取试管若干支，1支绍空自譬，余下作测定管，各热0(1ml爨匀浆，再掬辘薅I溶液0。lml，缓{孛 渡3ml，撂匀，置37?水浴中预热5min，取出，测定管中加入乙醇溶渡0(4ml，空囱管中加入蒸馏水0，4ml。 摇匀，置37?水浴中作用lOmin，立剡取出各加入抑制剂0(1ml，随即在紫外分光光度计340nm波 样晶测定值计为AI，空白测定值计为A2，乙阵脱氮酶活性以?A计，AA=(AI—A2)×100。 长测定。 1(3试验结论 80,d、熬;鼹擐护翳胶囊后，高低荆爨组?A镶明显增加，数理统计差异显著性寓。嵩剂量组较低荆量组 更为明姓。说明小鼠服用护肝胶囊后，确有增加肝内乙醇脱氨酶活性的作用。 574