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人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体

2017-10-26 37页 doc 85KB 37阅读

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人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体 第1页 人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体 (SHBG):表征在一个简单的酶联 性激素结合球蛋白(ELISA)检测血浆中的免疫吸附试验 约翰G ?刘易斯*,尼古拉斯J.朗利,彼得A. 爱尔德 类固醇及免疫学生物化学实验室,临床生化组,坎特伯雷卫生实验室,新西兰基督城 23日 1998年5月22日,1998年11月 摘要 提出了四个人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体和特点 。 四分之三个抗体 公认的SHBG不同的抗原决定簇 。 两个不同的抗体用于免疫印迹,并确认 人体血浆中46 ...
人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体
人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体 第1页 人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体 (SHBG):表征在一个简单的酶联 性激素结合球蛋白(ELISA)检测血浆中的免疫吸附试验 约翰G ?刘易斯*,尼古拉斯J.朗利,彼得A. 爱尔德 类固醇及免疫学生物化学实验室,临床生化组,坎特伯雷卫生实验室,新西兰基督城 23日 1998年5月22日,1998年11月 摘要 提出了四个人类性激素结合球蛋白的单克隆抗体和特点 。 四分之三个抗体 公认的SHBG不同的抗原决定簇 。 两个不同的抗体用于免疫印迹,并确认 人体血浆中46 kDa的次要组成部分以及主要48 kDa区。 碳水化合物的残留物不会形成抗原的一部分 这两种抗体的决定因素,尽管这些发现增加的信号,去除N -连接低聚糖。 在同一天有些 被选中的抗体在HSBG的基础上在血浆中,进行非竞争,酶联免疫吸附试验(ELISA) 。 该试剂盒采用纯化IgG2a性激素结合球蛋白单克隆抗体吸附到一个微孔板井。 在阻止任何物质进一步吸附到板上,在室温下分别加入或稀释患者样本经过5 h的潜伏期后 板被冲走,反SHBG过氧化物酶标记的IgG1单克隆抗体检测抗体绑定SHBG antimouse IgG1和 邻苯二胺底物。 与现有的2天ELISA检测相关血浆SHBG使用 多克隆抗体,并与dihydrosterone(DHT)的配体结合法相关 。 单克隆抗体为基础的ELISA显示 性能优良的特点,是增加睾丸激素或雌激素的影响 。 ? 1999爱思唯尔科技公司保留所有权利。 关键词:单克隆抗体;性激素结合球蛋白SHBG,ELISA 血浆性激素结合球蛋白(SHBG)的水平 广泛使用性激素检测,以确定 蛋白质之间的分布性类固醇激素 必然和自由的分数[1] 。 很明显,水平低 SHBG条件可能与过度的一个 氢行动2],且有在近期利益关系 性激素结合球蛋白和血浆脂蛋白之间tionship [3]。 在 此外,unliganded血浆中的作用的类固醇结合蛋白 作为一个传递机制的约束膜受体蛋白 靶细胞的类固醇备受关注[4,5] 并建立了一个功能链接到类固醇激素受体 职权范围[6]。 SHBG在细胞水平上,并在的研究 流通可以提高使用的单克隆 SHBG tibodies。 在这里,我们报告的生产和char acterization四个单克隆抗体对人类SHBG SHBG研究可能有用的工具。 在 此外,我们在同一天,简单报告其使用,并 直接酶联免疫吸附试验(ELISA) 人类血浆中SHBG。 虽然其他人已经报告 SHBG [7,8],放射免疫和酶联免疫吸附检测 也是第一份报告,使用专门的单声道的 ELISA 单克隆抗体。 1。 实验 1.1。 材料 人类性激素结合球蛋白是从斯克里普斯实验室获得, 加利福尼亚州圣迭戈,美国和Antimouse IgG1的过氧化物酶和 antimouse IgG2a北欧免疫过氧化物酶,弼 伯格,荷兰。 Antimouse免疫球蛋白过氧化物酶和isotyping 从生命科学学院,英国Amersham公司,试剂盒。 兔聚; 对人类SHBG,都完好无损,过氧化物单克隆抗体 案例分析标记,DAKO公司,卡奔塔利亚, 美国加利福尼亚州。 *通讯作者。 邮政信箱151,新西兰基督城。 电话: 64-3-364-0888传真:64-3-364-0889。 E - mail地址:johnL2@chhlth.govt.nz(JG刘易斯) 类固醇64(1999)259-265 0039-128X/99 / $ -见前面问题? 1999爱思唯尔科技公司保留所有权利。 有价证券投资收益:S0039 - 128X(98)00119-6 第2页 1.2。 免疫和细胞融合 女RBF - DN小鼠免疫10克 在完成Freunds辅助SHBG每隔4周。 一个星期后的第三次注射,脾脏切除 FOX - NY骨髓瘤细胞融合的比例脾细胞 5:1如前所述[9]。 1.3。 筛选的上清 酶标板(猎鹰3912微量三; Beckton迪克 inson,奥克斯纳德,CA)分别涂在4 ? C过夜100 L /以及兔抗- SHBG血清,稀释的磷酸 BUFF ERED等效液(PBS),29升的抗体在10毫升PBS。 磷 phate,缓冲液为0.05 M的NaH 2 宝 4 ,0.15 M氯化钠(NaCl), 5个M氢氧化钠调整pH值至7.4。 次日, 板洗涤用PBS含0.1,的四倍 吐温20(V / V)和阻止缓冲液PBS CON - 含0.1,的Tween - 20(V / V)和0.1,明胶(W / V)] 150 L / 5-10分钟,以及在20 ? C 后板被掏空, 100升稀释,汇集,人类妊娠血浆(1:1000 在缓冲液中),其中包含的SHBG水平升高( 400 nmol / L的),每孔加入孵育过夜 在4 ? C 翌日,板块再次洗净, 缓冲液和50升,每孔加入,其次 上清液50 L的2 - H进一步的潜伏期在20 ? C 板洗四次,羊antimouse 免疫球蛋白过氧化物酶(100升/以及在1:1000在检测 缓冲区)在20小时1?,分别洗净后,板, 和底物溶液加入。 基板是新鲜 编制由40毫克 邻苯二胺 60升30,的H 2 Ø 2 100毫升0.05 M娜 2 宝 4 和 0.025 M柠檬酸,pH值5.0。 颜色发展端子 提早终止100升1.25氢 2 SO 4 每口井, 在492 nm处读取吸光度。 使用一个贝林 ELISA处理器II(德国赫司特,)允许半AU - 进程tomation的。 1.4。 SHBG Dako公司酶联免疫吸附 SHBG使用Dako公司多克隆抗体的酶联免疫吸附 制造商的建议进行了 。 简而言之,包被酶标板4?,过夜 完整的兔抗SHBG血清稀释在PBS(29日升 10 毫升PBS)中,每孔100升。 翌日板 洗涤缓冲液(150升,每孔)阻塞 1小时在20 ? C 板倒置,然后清空 图 1。 (一)SDS - PAGE电泳免疫印迹人类妊娠血浆,车道 1,人类男性的血浆,2巷,探讨抗体11F11 。 车道 载有相同的样品负荷和巯基乙醇存在。 分子量标记表示。 (二)SDS - PAGE电泳免疫印迹 部分纯化的人类SHBG以下deglycosylation,泳道1和 3,探测与抗体11F11和7H9,分别。 部分纯化 非deglycosylated人类SHBG,2和4车道,探讨与抗体 11F11和7H9表示。 车道包含相同的样品负荷 巯基乙醇存在。 图 2。 相对的抗原决定簇映射 。 酶标板涂有 性激素结合球蛋白多克隆抗体和0到400 nmol / L的标准除了 多克隆抗体绑定SHBG顺序探讨用单克隆 抗体,如前所述,每个抗体之间的洗涤步骤 。 单 对性激素结合球蛋白的单克隆抗体2G11,7H9,16D5(亚型IgG1的),并 11F11(亚型IgG2a)。 单克隆抗体的结合 SHBG检测antimouse IgG1的过氧化物酶和antimouse IgG2a - 过氧化物酶(分别为IgG1的和IgG2a) 。 260 JG刘易斯等。 /类固醇64(1999)259-265 第3页 SHBG 100升的标准血浆或患者血浆(1:1000 缓冲液稀释)以上,每孔加入 晚上潜伏期在4 ? C。 SHBG标准血浆 来自池,女,孕晚期,怀孕 血浆中有400 nmol / L的SHBG水平 标准 等离子最初是在缓冲液稀释1:1000和然后 连续生成了一系列的标准,从0到 400 nmol / L的 板块再次洗净,过氧化物酶 标记的兔抗血清性激素结合球蛋白(缓冲液1:3000) 在20 ? C孵育6小时,每孔100升 “ 板终于洗净, 邻苯二胺分 strate上架。 图 3。 Dako公司酶联免疫吸附测定血浆SHBG水平,使用性激素结合球蛋白多克隆抗 体和血浆性激素结合球蛋白结合配体的比较 ELISA法测定的11F11/16D5(面板A和C)或11F11/2G11(板B和D)的组合使用性激 素结合球蛋白单克隆抗体的水平。 表1 deglycosylation血清SHBG水平的影响:去除N和O -连接寡糖 检测抗体 2G11 7H9 16D5 样品稀释 0.5 1.0 2.0 0.5 1.0 2.0 0.5 1.0 2.0 Deglycosylated 血清 48 2 90 4 184 3 81 8 134 2 259 8 69 1 120 12 250 1 对照血清 40 1 80 4 160 10 43 10 103 14 203 24 42 2 79 1 154 2 SHBG是通过检测抗体酶联免疫吸附使用11F11作为涂层抗体检测。 值(nmol / L的) quadruplicates手段 政府统计处。 261 JG刘易斯等人。 /类固醇64(1999)259-265 第4页 1.5。 SHBG ELISA法(单克隆抗体) 酶标板包被蛋白的纯化 单克隆抗体11F11稀释1:1000 6米水 盐酸胍(1.0克/毫升),100升,每孔过夜, 4 ? C。 然后冲板和缓冲液受阻 在20 ? C 1小时 板被掏空颠倒, 无论是标准或样品分别加入先前 刻划为5 h在20 ? C 板,然后洗4次, 和100升的单克隆抗体上清16D5(1:20在 缓冲液)20?时为30分钟,每孔加入 板清洗和antimouse IgG1的过氧化物酶 添加(1:1000缓冲液)为20分钟,另有30 ? C 和后续处理说明。 一个系列exper, iments测量在男性和女性血浆的性激素结合球蛋白 或者补充睾酮所载越来越多 (0.7-347 nmol / L的)或雌二醇(0.7-368 nmol / L的),以确定 有无明显的SHBG水平是受另外 这些类固醇进行。 1.6。 SHBG配约束力的检测 血浆SHBG是由配体结合检测 法[10]。 简言之,血浆或标准进行稀释 用冷PBS和400升的8倍重复等分培育 bated同为100升0.75纳克的DHT的混合物和 20 000 DPM 3 H - DHT或100吴DHT和20 000 DPM 3 PBS 10分钟的H - DHT在4 ? C。 等体积 冷,饱和硫酸铵添加,混合,和 孵育10分钟(1500 G)在4 ? C 管,离心,取上清液计算。 无线电 从第一套管积极计数更正 所使用的管和结果第二组的淬火 插上的标准曲线。 1.7。 蛋白层析 性激素结合球蛋白单克隆抗体纯化培养 TURE上清蛋白- A通过使用色谱 阿菲凝胶蛋白一个地图II试剂盒(Bio - Rad公司,大力士,CA, 美国)。 这个系统允许的净化至10毫克 鼠标从200毫升培养上清抗体。 后续 ING广泛透析对自来水的纯度 孤立鼠IgG证实了琼脂糖凝胶电 电泳在pH值8.9。 纯化的免疫球蛋白 冻干玻璃小瓶,并存储在 20?,直到重新 quired。 1.8。 SDS - PAGE电泳,Western印迹 垂直十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS - PAGE)进行了10,聚 丙烯酰胺凝胶[11]与人类相同的负荷 血浆和使用Bio - Rad公司的迷你Protean的系统 。 横贯 FER至硝酸纤维素核实使用Bio - Rad公司 万花筒预染色标记。 抗体染色, 硝化棉最初封锁潜伏期在三 缓冲生理盐水(TBS)(0.015 0.15 M氯化钠(NaCl),中号三,pH值7.4) 含0.1,吐温- 20(V / V)和1,牛血清 白蛋白(BSA)(W / V)20 ? C时为1小时 硝酸纤维素 当时含0.1,的TBS洗(三次) Tween - 20与文化稀释上清孵育 1点20含有超过0.1,的Tween - 20和1,BSA的TBS 夜间在20 ? C。 硝化棉是洗(三次) 孵育antimouse免疫球蛋白过氧化物酶(1:10 000 TBS的含0.1,Tween - 20与1,BSA)1 h后 20 ? C。 最后,硝化棉是洗涤和免疫 增强化学发光法通过可视化的结合物 (Amersham公司)。 1.9。 相对的抗原决定簇的映射 进行了实验,以确定是否 性激素结合球蛋白,单克隆抗体11F11(亚型IgG2a) recog nized从这些不同SHBG行列式超 上清2G11,7H9,或16D5(所有同型IgG1的)。 酶联免疫吸附 涂板Dako公司的多克隆抗体,阻断, SHBG标准如前所述。 “ 表2 纯化的SHBG水平的deglycosylation影响:N的去除和 O型挂钩低聚糖 检测抗体 2G11 7H9 16D5 Deglycosylated SHBG 114 11 145 14 218 16 控制SHBG 110 10 113 11 106 11 SHGB测定涂层抗体酶联免疫吸附使用11F11和 检测抗体的指示 。 值(nmol / L的)是指dupli 盖茨的SD。 表3(a) O型挂钩低聚糖清除血清SHBG水平的影响 检测抗体 7H9 16D5 样品稀释 0.5 1.0 0.5 1.0 酶处理 血清 68 6 153 15 48 5 100 10 对照血清 74 5 179 16 46 6 105 9 表3(b) 随后的N -连接寡糖去除血清SHBG的影响 各级 检测抗体 7H9 16D5 样品稀释 0.5 1.0 0.5 1.0 酶处理血清 45 4 98 7 60 6 114 9 对照血清 35 4 81 7 46 5 82 8 SHGB测定涂层抗体酶联免疫吸附使用11F11和 检测抗体的指示 。 值(nmol / L的)是指dupli 盖茨的SD 262 JG刘易斯等人。 /类固醇64(1999)259-265 第5页 翌日,竞争实验,以确定 无论是IgG1的性激素结合球蛋白抗体上清(2G11,7H9 , 16D5)能阻断11F11随后约束力 上清(同型IgG2a),反之亦然进行了 加上适当的控制。 这些实验 开展使用每30分钟连续孵化 在室温彼此之间的洗涤步骤 tibody孵化。 约束的单克隆SHBG抗体 终于发现与antimouse IgG1的过氧化物酶 和/或antimouse IgG2a过氧化物酶(缓冲液1:1000) 与先前所描述的类似的条件。 1.10。 Deglycosylation的SHBG SHBG从孕晚期,人力,怀孕血浆 通过亲和层析纯化使用Pro 蛋白质纯化的11F11抗体共价连接到CNBR 活化琼脂糖- 4B。 部分纯化的SHBG分 jected酶低聚糖释放前SDS PAGE和Western印迹法来确定,如果任何 抗体识别的是N或O型连锁oligosaccha 加载上SHBG。 一个血浆样本还受到 deglycosylation,连同SHBG准备, 使用单克隆抗体的ELISA检测 11F11涂层钢板和2G11,7H9,或DE - 16D5 tection抗体antimouse IgG1的过氧化物酶 如上所述。 结果与对照组相比, 样品用去离子相同的对待 DIS 蒸馏水代替酶。 接下来的n -和O - 挂钩低聚糖的释放,血浆样品 赛义德在三个不同稀释度一式四份, 部分纯化的SHBG一稀释法测定 重复。 寡糖的酶法释放车 里德,来自Bio - Rad使用deglycosylation套件 实验室。 用试剂盒提供的牛 胎球蛋白控制,这是一个效率的检查 deglycosylation。 1.11。 正常范围等离子体 从访问正常范围内的血浆 基督城Endolab参考范围收集CON - senting的选民登记册上的成年人 。 绝经前 女性年龄范围为23-43年,而男性的年龄范围 是30-70岁。 妊娠血浆样品 在孕晚期妇女。 2。 结果与讨论 融合协议,连同筛选和subse quent recloning,确定了4个杂交瘤细胞株的秘密 ING以性激素结合球蛋白的抗体 。 (2G11,7H9,其中三个 16D5)IgG1的亚型;第四,11F11,IgG2a。 两个抗体(11F11和7H9)是有用的 SDS - PAGE电泳,Western印迹,确定一个主要的48K SPE CIES和未成年人血浆中的46K组件[12 ] 在人类怀孕等离子体增强的信号相比, 正常成年男性血浆[图。 1A]。 当部分纯化 人类SHBG遭到N和O型挂钩低聚糖 charide释放SDS - PAGE和Western印迹 婷,这些抗体表明迁移的转变并没有损失 相比,未经处理的控制SHBG的信号。 这表明分子量的损失 碳水化合物的去除和碳水化合物的组成部分 SHBG不直接构成的抗原决定簇 11F11或7H9抗体[图。 1B]。 事实上,抗体7H9 呈增加的信号以下deglycosylation , 这是与抗原的概念一致阻止 minant是在SHBG的糖基化位点靠近 和碳水化合物的去除允许抗体7H9 IM 证明其结合位点的访问 。 效率degly cosylation证实了并行处理的牛 胎球蛋白,这显示了类似的迁移转变的SDS - 页(数据未显示)。 相对的抗原决定簇映射实验 表明11F11的单克隆抗体(IgG2a亚型 ) 不与任何三个IgG1的共享抗原决定 单克隆抗体(2G11,7H9,或16D5)(图2)。 在上游面板图进行比较 。 2,对于 抗体2G11,表明产生的剂量-反应曲线 ated时Dako公司抗体绑定SHBG探测与 11F11和抗体2G11终于antimouse IgG2a过氧化物酶是相同的,11F11其次 表4 从3例(样品1,2,3)血浆样品线性测定SHBG在不同的血浆稀释,使用11F11/2G11和 11F11/16D5 抗体组合 样品 抗体结合 11F11/2G11 抗体结合 11F11/16D5 1 2 3 1 2 3 稀释 1:1000 5 2 64 5 192 20 10 2 62 5 242 21 1:2000 4 2 28 3 72 6 7 2 27 4 135 10 1:4000 一 14 2 33 4 一 13 2 74 6 1:8000 一 7 2 16 2 一 5 1 33 4 值(nmol / L的)是重复的SD。 一 未确定。 263 JG刘易斯等人。 /类固醇64(1999)259-265 第6页 antimouse IgG2a过氧化物酶,提示无干扰 抗体2G11。 这是确认身份 曲线11F11和抗抗体2G11 鼠IgG1过氧化物酶和抗体其次2G11 antimouse IgG1的过氧化物酶。 另外值得一提的是缺乏 响应使用antimouse其次的抗体 11F11 作为控制亚型特异性IgG1的过氧化物酶。 西米, larly抗体,2G1,7H9,16D5,其次 antimouse IgG2a过氧化物酶显示没有响应(数据未 所示)。 Dako公司多克隆SHBG ELISA相比, 单克隆抗体为基础的SHBG ELISA 11F11 / 16D5组合和11F11/2G11结合 如图。 分别为3A和B , 这些已被取消 通过使用各种组合的一个,纯化蛋白- termined fied性激素结合球蛋白单克隆抗体,并表示,OPTI - 正常结果获得11F11涂层 抗体和16D5或SHBG第二现场的 2G11 antibodie。 后来,第二个系列实验使用不同 ferent病人样本显示一个比较单 单克隆抗体为基础的SHBG酶联免疫吸附与配体绑定 ING方法,图。 3C和D. deglycosylated血浆和SHBG测定 控制见表1。 SHBG测定上 部分纯化和deglycosylated SHBG相比 控制表2所示。 它们共同提供分 stantial有关的其它信息的性质 SHBG的各种抗体的结合位点 。 他们 确认的11F11的抗原决定不 共同与其他单克隆抗体,就像 2G11,相对碳水化合物去除的影响 。 关于抗体7H9的结果呈现出显着 cantly升高SHBG水平以下碳水化合物重新 去除率都与免疫印迹数据一致 建议增强约束力以下的碳水化合物去除 。 这也是与抗体16D5的情况下,甚至更高 明显的SHBG水平测定碳 水合物去除。 因此,它似乎在SHBG 7H9和16D5识别位点是在接近 N或O型挂钩低聚糖和他们重新 去除率允许提高抗体访问。 当另一SE - 糖酒会样品是O型挂钩低聚糖重新 去除率,其中包括desialylation步骤,和检测 使用固定11F11和7H9或作为16D5 检测抗体,之间有没有差异 酶处理和对照样品,每个抗体, SUG gesting,性激素结合球蛋白抗体7H9的识别位点 和16D5不位于靠近O型挂钩 糖基化位点[表3A]。 类似的结果,其中 使用多克隆免疫法确定的SHBG水平 抗体sialylidase治疗后的影响,有 得到最近报道[13]。 O型挂钩degly cosylation,包括desialylation步骤,N -连接寡糖 进行了pH值调整和糖类释放 此外,作为详细的试剂盒说明书,PNGase F 样品reassayed SHBG。 结果 表3b所示。 两者合计,抗体11F11, 2G11,和16D5/7H9认识到不同的网站上 SHBG 11F11和2G11独立的碳水化合物MOI eties,和16D5/7H9认识到,在接近一个网站(S) N -连接糖基团等,他们的去除 增强的抗体结合 。 据了解,两个N - 上SHBG挂钩的糖链在天冬酰胺 残留的351和367,这 是非常接近的C端 的蛋白质,这些残基之间的半胱氨酸 361 形成二硫键的半胱氨酸333 [14]。 因此, 似乎Western印迹数据的基础上 , 这种债券由巯基乙醇裂解,随后 承认抗体7H9,是针对 SHBG,而不是更高的结构的主要结构 元素。 仍有待确定是否16D5识别 nises 7H9 SHBG相同的网站。 感兴趣的 观察,至少有一个N -连接的存在公开进修学院 gosaccharide是重要和高效的生产 分泌性激素结合球蛋白和他们不参与 类固醇性激素结合球蛋白[14]结合的特点。 在非 碳水化合物类固醇具有约束力的残留 volvement 符合我们的研究测量血浆中SHBG 样品中的存在和补充睾酮的情况下 或雌激素。 当样品,进行了分析immunore 通过使用单克隆抗体系统积极SHBG 涂层抗体,要么与11F11描述 2G11或作为检测抗体16D5,并无 样本之间的差异显著分析在AB - 添加类固醇,或者347 nmol / L的或368的感 nmol / L的补充睾酮和雌二醇,分别 (数据未显示)。 是否检测血浆正常范围相似 Dako公司的方法,DHT的配体结合,或11F11 / 16D5或11F11/2G11组合。 成年雄性范围 (9-40 nmol / L的平均20 10),成年女性的范围(23 - 加入100 nmol / L;平均48 20),和怀孕的范围(250 - 500 nmol / L的平均380 78)按照与其他 工人[7,10,15]。 Dako公司的方法和酶联免疫吸附 11F11/16D5或11F11/2G11组合显示林 earity上连续稀释的血浆样品(见表4) 。 在 traassay和测定间变异系数分别为 由每五个重复测定 4个质量控制等离子池 。 这些泳池范围 7日至150 nmol / L的SHBG。 抗体结合 11F11/2G11返回为批内,12,的变化 所有4个游泳池和测定间变异为18 , 其余三池池和低14,。 安 tibody结合11F11/16D5生产批内 三个包含37个游泳池,60 12,的变化, 和130 nmol / L的性激素结合球蛋白和20,为低的变化 interas,类似的不精确值SHBG池 说变化。 最低检测SHBG水平是3 nmol /升两种抗体组合。 虽然其他有报道单克隆抗体 SHBG [12,16],抗体的特性重新 这里移植和ELISA检测后使用 264 JG刘易斯等人。 /类固醇64(1999)259-265 第7页 在血浆中SHBG表明这些单克隆抗体 SHBG可能证明是有用的的分析工具以及潜在 tially有用的附加 生物探针的研究 SHBG。 至少有一个,7H9,这些抗体能识别 网站包括表位比接近C -末端 氨基酸136-138单克隆抗体确认 小号 1 乙 5 [17],因此,可以增加单面板 SHBG的结构研究的单克隆抗体 。 此外,该抗体可以研究利息 翻译后修饰的SHBG的地方比较 SHBG水平的儿子在并行使用抗体检测 11F11/2G11和11F11/16D5可以提供信息 性激素结合球蛋白糖基化的程度 。 这些抗体COM - binations似乎是首选,因为比较 isons循环水平和推断成熟SHBG显示 极好的协议(图4) 。 然而,这些抗体的 COM binations不会有用的调查临床 ICAL实用desialylated SHBG差检测 半乳糖的具体要求asialo - SHBG检测 探针[13]。 尽管这个限制,初始绑定 SHBG仍可以通过使用抗体 11F11本文所述。 参考文献 [1] Carlström钾,Gershagen S,Rannevik G.游离睾酮及工商业污水附加费 tosterone /粗毛妇女SHBG指数:诊断比较 准确性。 妇科Obstet投资1987; 24:256-61。 Guéchot [2] Loric S,J,毒龙楼Giboudeau奥贝尔磷,J.测定 血清睾酮不受性激素结合球蛋白: 粗毛妇女的诊断价值 。 1988年临床化学; 34:1826-9 。 [3] Pugeat红磨坊P,P表哥,Fimbel小号,萨科氢,渴望赛马会, 勒琼阁下性激素结合球蛋白之间的相互关系 (SHBG)血浆脂蛋白和心血管疾病的风险。 J类固醇生物 化学与分子生物学1995; 58:567-72。 [4]罗斯纳W.皮质类固醇结合球蛋白和性别的职能 。 激素结合球蛋白的最新进展。 Endocr REV 1990; 11: 80-91。 [5]波尔图CS,Lazari MFM,阿布雷乌立法会,连续Bardin,Gunsalus GL。 重 雄激素结合蛋白受体:内化和intracellu LAR信号。 J类固醇生物化学与分子生物学1995年; 53:561-5。 [6] Nakhla上午,吉普赛人娜,罗斯纳W.雌二醇激活前列腺 雄激素受体 和前列腺特异抗原,通过中间体 diacy的性激素结合球蛋白。 J]; 1997; 272:6838 - 41。 [7] Heubner粗鲁小号,Juchem中号,烤肉HJ,Pollow K.酶 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类性别激素结合 ING球蛋白。 J类固醇生物化学与分子生物学1987年; 28:647-52。 [8]考克斯Caulier彗星,阿维兰热摹,穆尼耶JC,壬子答:两个网站 确定使用单克隆抗体放射免疫检测 中断可以确定人体血清性激素结合球蛋白。 J免疫; 检测1992年; 13:355-73。 [9]刘易斯JG,克利福JK长老PA。 怀孕期间的单克隆抗体 nanediol - 3 -葡萄糖醛酸的应用程序直接酶联免疫 nosorbent检测尿。 类固醇1990年; 55:314-18。 法塔赫DI,甜菜T.简体性激素的测量方法[10 ] 结合球蛋白。 临床化学1981; 27:1277-79。 [11] Laemmli英国。 集会期间的结构蛋白裂解 T4噬菌体的头部 。 自然1970; 227:680-85。 [12]汗MS,埃利希P,Birken小号,罗斯纳的W.大小同分异构体testoster 一雌二醇结合球蛋白存在于个别男性plama 和妇女。 类固醇1985; 45:463-72。 [13] Vaysee J,Beaugrand中号,Pontet的M.测量总desia - 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