菌种的衰退

菌种的衰退 4.5 遗传和变异是对立统一的一对矛盾。在这一对矛盾中，变异是绝对的，遗传性的稳定是 相对的。 生产上应用的具优良性状的菌种，医学上用于研究和制造诊断、治疗疾病用的各种制品 (抗原、菌苗、疫苗、抗毒素等)的菌种，以及监测环境污染用的菌种等，都须妥善保藏，使 其不衰退，不污染杂菌，不死亡，原优良性状不变。无论用任何手段保藏菌种，先决条件是 获得良好而健壮的培养物。 4.5.1 4.5.1.1 培养基 选择保藏菌种用的培养基，其要点是既能得到健壮的培养物，而营养 成分又不太丰富；营养太丰富，菌种易退化。 4.5.1.2 培养温度 宜采用该菌能良好生长的较低温度。 4.5.1.3 培养时间 (1) 定期移植保藏的 单细胞不生孢子的属种培养到稳定期，生孢子的属种培养到孢子成 熟后保藏。 (2) 冷冻真空干燥或液氮超低温冻结保存的 单细胞不生孢子的属种培养到对数生长期的 后期，生孢子的培养到孢子成熟后保藏。 4.5.2 4.5.2.1 控制传代次数(采用良好的菌种保藏方法，就可大大减少不必要的移种和传代次 数)。 4.5.2.2 创造良好的培养条件。 4.5.2.3 利用不同类型的细胞进行接种传代。如放线菌、霉菌用单核的孢子接种，避免 菌丝接人，可防止衰退。 4.5.2.4 采用有效的菌种保藏方法(见4.5.4)。 4.5.3 4.5.3.1 纯种分离 可归纳成两类。一类是“菌落纯”，较粗放，从种的水平来说是纯的； 另一类是“菌株纯”，较精细，从细胞水平来说是纯的。分离纯化方法见第三章三(二)。 4.5.3.2 寄生性微生物的退化菌株，通过寄主体进行复壮，可提高其毒力、杀虫率等。 4.5.3.3 淘汰已衰退的个体 例如用低温处理，使已衰退的个体死亡，在抗低温的存活 个体中，留下了未退化的健壮个体。 4.5.4 4.5.4.1 定期移植法 斜面菌种(通常保存于温度4?，相对湿度60％—70％的环境中) 一般3个月-6个月移植一次，半固体穿刺接种的，保藏于普通冰箱，可6个月—12个月移植一次。 4.5.4.2 石蜡油封藏法 在斜面或半固体穿刺培养物上加灭菌石蜡油(约1em高)，直立保存于普通冰箱中，保存期1年—2年。 4.5.4.3 砂土保藏法 河砂(60目过筛)与黄土(120目过筛)以4：1混合，装入小试管(约 1cm高)，高压蒸汽灭菌(121?，30min)2次-3次后再干热灭菌(150?—160?，2h)一次，用接种耳从斜面上刮下孢子或芽孢置于沙土管内；并混匀(或用无菌水洗下孢子，制成浓悬 浮液滴人管内)，然后放在盛有无水CaCl2的干燥器中，抽气使砂土干燥后，密封管口(用石蜡或烧熔玻璃封口)。低温保藏，可达1年—10年。 4.5.4.4 冷冻真空干燥保藏法 斜面培养后，加入灭菌脱脂牛奶0．5ml—1．5ml，将菌苔洗下制成浓菌悬液(80亿个／ml—100亿个／m1)，分装菌种管(安瓿瓶)，菌种管放在95％酒精或干冰中，冷冻，真空泵抽真空干燥，最后封口。经真空度检查合格的菌种管，在低温 (5?左右)或室温下避光保藏。 4.5.4.5 超低温冻结保藏法 培养好的菌悬液加保护剂(12％灭菌甘油或5％—10％二甲亚砜)并混匀，分装小管后置低温冰箱(-80?)或液氮罐中(-180?)保藏。 后两种方法保藏期长达数年至数十年，且可保持菌种原有生理特性稳定。