Survivin在胃腺癌、异型增生组织中的表达及其与p53、bcl.doc

Survivin在胃腺癌、异型增生组织中的表达及其与p53、bcl.doc Survivin在胃腺癌、异型增生组织中的表达 及其与p53、bcl 【摘要】 目的 探讨凋亡抑制基因Survivin在胃癌、胃黏膜异型增 生组织中的表达及其与突变型p53、bcl-2的相关性。 方法 应用 免疫组织化学SP法检测50例胃腺癌组织、32例异型增生组织和20 例正常胃黏膜组织中Survivin的表达。结果 Survivin在正常胃黏膜 组织、胃癌组织及轻、中、重度异型增生组织中的阳性表达率分别 为0%、56%、9%、10%、54.5%，轻、中度异型增生组织中 Survivin的阳性表达率明显低于重度异型增生和癌组织中的表达 (P<0.01)，而在重度异型增生和癌组织间无显著性差异(P均 >0.05); Survivin的表达与胃癌的组织分化、浆膜侵犯、淋巴结 转移、临床分期呈正相关 (P<0.05)，与年龄及肿瘤大小无相关性 (P>0.05) 。结论 (1)Survivin在胃癌及异型增生组织中呈异常表 达,且该基因蛋白与胃癌的临床病理因素相关，提示Survivin在胃癌 的发生 发展 中起重要作用; (2)在胃癌及异型增生组织中， Survivin的表达与p53、 bcl-2基因蛋白存在相关性，提示3种基因 蛋白可能在胃癌的发生、发展中起协同作用，联合检测Survivin、 p53、 bcl-2的表达 ,不仅有助于了解胃癌的发病机制, 还可作为癌 前或交界性病变发展演变的监测指标。 【关键词】 胃癌 Survivin 凋亡抑制 免疫组织化学 Abstract Objective To study the expression of survivin and its relationship with the expressions of p53 and bcl-2 in gastric adenocarcinoma and dysplasia. Methods The expressions of surviving, p53 and bcl-2 were measured by streptavidin-peroxidase immunohistochemistry in 50 cases of gastric adenocarcinoma , 32 cases of dysplasia and 20 cases of normal gastric mucosa. Results The positive rates of survivin in gastric cancer, mild, moderate and severe atypical hyperplasia were 56%, 9%, 10% , 54.5%, respectively ; The positive rates of survivin in mild and moderate dysplasia were significantly lower than those in severe dysplasia and carcinoma ; No significant difference was observed in survivin expression level between severe dysplasia and carcinoma (P> 0.05) ;There was a positive relationship between survivin gene with differentiation, clinical stages and lymph node metastases, and there was no association between surviving gene and patients’ age , diameter of tumor (P>0.05) ; The positive expression of survivin in gastric cancer was related to the expressions of p53 and bcl-2 (P<0.05). Con clusion (1) Abnormal expression of survivin protEin in the gastric cancer and dysplasia and it’s correlation with clinical pathological indexes indicate that survivin may play an important role in promoting tumorgenesis and progression of gastric cancer. Moreover, it can be taken as reference marker in diagnosis, grade , clinical stages of gastric cancer . (2) Expression of survivin in gastric cancer and dysplasia is associated with expressions of p53 and bcl-2 gene. Coexpressions of three protEIns have the synergism in progression of gastric cancer. Therefore, detection of these marks will contribute to understanding pathogenesis of gastric cancer, and they can be taken as supervisory markers to reflect the development of precancerous and junction lesions. Key words Gastric cancer Survivin Apoptosis inhibitor Immunohistochemistry 胃癌发生发展过程中不仅存在细胞过度增殖，同时也存在细胞凋 亡的异常。Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子,其高表达可抑 制多种因素诱导的细胞凋亡,而在已凋亡的细胞中Survivin ,RNA 表达显著下调。Survivin主要通过直接抑制凋亡终末效应器Caspase- 3和Caspase-7的活性阻断各种刺激诱导的细胞凋亡过程,1,。 研 究 发现,,,，Survivin广泛表达于胚胎和胎儿组织,在终末分化的 成人组织(胸腺、生殖腺除外)中则不表达。这种组织分布特征有利 于胚胎与胎儿组织的内环境稳定和分化。但Survivin又广泛表达于 人类大多数恶性肿瘤组织。 有关Survivn在胃癌中是否表达以及与 p53 、 bcl-2在发挥凋亡抑制作用过程中是否产生协同作用， 目前 看法不一。本文应用免疫组化SP法检测Survivin、 bcl-2、 p53在 胃腺癌及异型增生组织中的表达，以探讨凋亡抑制基因Survivin在 抗凋亡促增殖方面对胃癌发生发展的 影响 。 1 材料与方法 1(1 组织材料 收集青海大学医学院附属 医院 病理科2003年11月,2005年4 月胃癌手术标本50例，男38例，女12例，平均54(5岁。所有病 例术前均未接受放化疗，其中高-中、低分化腺癌分别为19、31 例;肿瘤直径?5cm者32人，,5cm者18人;有淋巴转移者42 例，无淋巴转移者8例;远处转移6例，同时选择20例手术切缘处 经病 理学 证实无癌细胞的正常胃黏膜作为对照观察材料。另取32 例有异型增生组织的胃镜活检标本，根据异型程度、累及范围分为 轻、中、重三级 。 1(2 Survivin免疫组化染色方法 所有标本经福尔马林固定，石蜡包埋，制成4μm薄切片，切片贴 于经多聚赖氨酸处理过的玻片上，进行常规HE及免疫组织化学SP 法染色。一抗为兔抗人Survivin多克隆抗体(产品编号为RAB- 0536) 、鼠抗人p53单克隆抗体(产品编号为MAB-0142)、鼠抗人 bcl-2单克隆抗体(产品编号为MAB-0014)、SP试剂盒、PBS缓冲液结晶、柠檬酸修复液均为Maixin-bio公司产品。SP法实验按进行,用已知乳癌切片作为阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。 1(3 结果判断方法 在多头显微镜下共同阅片，按第四届全国胃癌学术会议确定的进行组织学分类，临床分期按1987年国际抗癌联盟公布的PTNM标准分期。阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰，细胞浆有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景者。评分根据细胞阳性百分率:无着色为(-);0,25%为弱阳性;26%,50%为阳性;51%,75%为中度阳性;>75%为强阳性。为便于统计，弱阳性和中度阳性均视为阳性(+)，强阳性为(++)。 1(4 统计学方法 采用SPSS11(5统计软件进行统计学处理，Survivin 的表达与胃癌临床病理指标的关系用Pearson χ2检验和Fisher精确概率法检验。转贴于 .com 2 结果 2(1 Survivin在胃腺癌及异型增生组织中的表达 Survivin在胃癌组织，轻、中、重度异型增生和正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为56%、9.1%、10%、54.5%、0%,轻、中度异型增生组织中Survivin的阳性表达率明显低于在重度异型增生和癌组织中的表达(P<0.01)，而在重度异型增生和癌组织间无显著性差异(P>0.05)，详细结果见表1;图1,2显示Survivin在中分化胃腺癌组织及在中度异型增生胃黏膜呈阳性表达，为胞浆型着色。 表1Survivin在胃癌、异型增生组织及正常胃粘膜中的表达 2(2 Survivin表达与胃癌临床病理因素间的关系 应用 免疫组化SP法检测50例胃腺癌Survivin的表达，结果显示，Survivin表达与年龄及肿瘤直径无显著性差异(P均,0.05)，但与癌细胞分化程度、浆膜侵犯、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有显著性差异，具有统计学意义(P,0.05或P,0.01)。 2(3 胃癌中Survivin、p53、Bcl-2表达间的相关性 50例胃癌中Survivin表达阳性者28例，阴性者22例。28例Survivin阳性者中，p53阳性者18例、Bcl-2阳性者16例。22例Survivin阴性者中,p53阳性者5例、Bcl-2阳性者5例。统计学χ2检验显示，Survivin与p53和Bcl-2都有显著相关性(P,0.05)，详细结果见表2。图3显示p53在胃高分化腺癌组织中呈阳性表达，为胞核型着色;图4显示Bcl-2在胃低分化腺癌组织中呈阳性表达，为胞浆型着色。表2胃癌中Survivin与p53、Bcl-2表达的相关性 3 讨论 凋亡和增殖的平衡对于维护组织的正常分化和个体恒定至关重要,平衡的破坏为疾病尤其是肿瘤的发生 发展 提供了必要的平台。Survivin是新近克隆出的凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员,1,。由于其能作用于这一平衡的两个方面,并可特异性表达于肿瘤组织,与肿瘤的分化及预后密切相关，因而被认为在肿瘤的诊断和 治疗 中具有良好的应用前景。 Survivin 又名生存素或生存蛋白,是一种分子量为16.5KD的胞内蛋白,编码基因定位于染色体17q25。与IAP家族其他成员不同的是, Survivin仅含有单一的杆状病毒凋亡抑制蛋白重复区序列 (Baculovirus IAP repeat，BIR)功能区,而缺少羧基末端环指结构,1,。组织分布上Survivin只表达于胚胎和发育的胎儿组织,除胸腺、子宫内膜、胎盘外不见于其他终末分化的正常成人组织，但可再次表达于各种肿瘤组织中。 研究 发现，Survivin与恶性肿瘤的发生发展关系密切，Survivin不仅能直接抑制Caspase-3、Caspase-7等凋亡蛋白酶的活性，阻止多种凋亡信号诱导的细胞凋亡，而且能在细胞有丝分裂前期通过与纺锤体微管发生特异性结合反应，使肿瘤细胞逃避细胞周期G2/M期检测点的监控，抵抗因DNA损伤或突变致自身诱导的细胞凋亡，从而导致肿瘤细胞异常分裂增殖,3,。 本实验结果显示，Survivin基因在胃癌组织中的表达率为56%,轻、中、重度异型增生胃黏膜中的表达率分别为9%、10%、54.5%,在正常胃黏膜中不表达,提示Survivin基因的表达发生在胃黏膜恶性转化的早期和进展期，与胃癌的发生发展相关。这与Sarela,,,报道的随着癌前细胞向癌细胞转化，Survivin表达水平逐渐升高的结果基本一致。本实验结果还显示，Survivin阳性表达在轻、中度异型增生组织与癌间差异显著,但在重度异型增生与癌间不存在显著性差异，提示重度异型增生在基因表型上已经具有癌的某些特征, Survivin蛋白可作为胃癌早期诊断的一个有用的标志物。 研究表明，胃癌是一个多基因多阶段的复杂病变过程,,,。特征性的基因在胃癌的发生发展过程中的作用是分段、协同和累积的,在多步骤肿瘤发生的早期,各种因素导致的凋亡抑制不仅有利于细胞的继续增殖,还有利于异常基因的进一步积聚,促使细胞恶性转化,从而有助于肿瘤的发生进展。,53是近年来研究较为广泛的肿瘤抑制基因，有野生型和突变型两种，突变型P53基因及其表达产物的出现，提示胃粘膜恶化。近来发现bcl-2可抑制多种组织的细胞凋亡，是 目前 公认的凋亡基因作用。本实验结果显示， Survivin阳性者中，P53阳性者占78%(18/23例) ，提示Survivin在胃癌组织中的表达与突变型P53基因密切相关(P<0.05)，目前的证据表明,野生型 P53基因在大多数人类肿瘤中存在高频率的突变,而Survivin基因也在不同的肿瘤中高表达,这可能是由于野生型P53基因突变而丧失了对Survivin基因表达的下调作用所致。本实验结果与Lu,,,等的一致，进一步证明了野生型P53对Survivin基因的表达有负反馈调节作用。本实验结果也显示，Survivin阳性者中，Bcl-2阳性者占76%(16/21例)，提示胃癌组织中Survivin与bcl-2基因呈正相关(P<0.05)，二者协同作用发挥抗凋亡效应。Lu、Altieri,,,,,在胃肠道恶性肿瘤上也得出同样的结论,胃癌组织中Survivin与P53，bcl-2基因为正相关关系。从功能上看，二者属于不同的凋亡通路，bcl-2起着保持线粒体完整性的作用，而survivin则抑制Caspase-3,7的活性和功能，二者在肿瘤上存在相关性的表达提示，引起survivin和bcl-2过表达的诱导因子相似，或两种不同的抑凋亡途径有相互协同作用，其原因有待进一步研究。 综上所述,survivin作为一种新的凋亡抑制蛋白与胃癌的发生、发展和预后有密切关系。 【