不同类型抗菌药物在革兰氏阴性菌感染中诱导内毒素释放的实验性

不同类型抗菌药物在革兰氏阴性菌感染中诱导内毒素释放的实验性 论 文研究生签名:觥研究生签名:高亚靶导师签章:殆,美炙二级导师签章:殆百复眨,(,,,年彳月,日,,,,年石月侈日研究生学位论文独创性声明河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺论特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验、原始数据、申报本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位，?,、:::。??,,一一?，?? 文论 文 论 文 论 文目文摘 要……………………………………………………………………,录综述抗菌药物诱导内毒素释放作用及内毒素进展………………,,个人简 历……………………………………………………………………,,材料与……………,参考文献……,致谢??…??????????…????????…???((((((…(((((((中研究论文不同类型抗茵药物在革兰氏阴性菌感染中诱导内毒素释放的英文摘要……………………………………………………………………气实验性研究附图……………………………………………………………………,,日,,舌”一””一””一””一…”””“((一((????????????????…?????结 果……………………………………………………………………,,附表??????????????……?????……????(((…(((((((((…(((结论????????…?,讨论?????…????????????…???????????????(((((((…(( ???…?????????…???((((……((((((((…((((((((……((((,……??:………………………………,,,……………………………………,—、上(—,,(,,,,,„,, 论 文论 文 论 文 论 文菌释放,,,较多，,,,和,,,，,释放,,,均较少。,,,,,,,,,,,,,,,,:以,?,、,,,和,,?,作用于鲍曼不动杆菌内毒素释放的实验性研究不同类型抗菌药物在革兰氏阴性菌感染中诱导时，,,,的释放量为:,,,,,,,,,??,,,,。各抗菌药物培养不同时间的培养液，离心取沉淀涂片，革兰氏染色后光镜,,,,，,址,,,,)检测滤液中,,,水,不同浓度抗菌药物对细菌产生,,,的影响时，,,,的释放量为:,,,,,,,,,,,,,,,,。当,种抗菌药物以,(,,，,、,,，,、,,，,和,,,，,作用于大肠杆菌,不同类型抗菌药物对细菌产生,,,的影响不同浓度,,,,,,,和,,,,作用于两种细菌时，在,(,,，,诱导细动杆菌,,的菌体形态变化。下观察菌体形态变化。扫描电镜下观察,(,,，,各抗菌药物作用于鲍曼不等量,,,;不同浓度,,,作用于大肠杆菌时，诱导细菌,,,释放量均较平，同时设不含药物的对照管及不含细菌和药物的空白管。采集,(,,，,不同浓度,,,作用于鲍曼不动杆菌时，在,(,,，,诱导细菌释放中当,种抗菌药物以,(,,，,作用于鲍曼不动杆菌时，,,,释放量为:态浊度法(,,;,,,,,,,方法:选择目前临床上,,,感染中常见的大肠杆菌(,,;,,,,;,,,别作用于两种细菌后，于,,、,,、,,、,,、,,取,,,培养液过滤，用动作为研究对象。,种抗菌药物以,(,,，,、, ,，,、,,，,和,,,，,浓度分,,,,,,,)、左氧氟沙星(,,,,,,,,,;,,，,,,,)、阿米卡星(,,,,,;,,，,,,),,;,,,,,，,,,)释放内毒素(,,,,,,,,,,;;,,,,,,， 文摘的:研究不同类型抗菌药物在不同药物浓度和不同时间下诱导革兰种不同类型的抗菌药物:头孢哌酮舒巴坦(,,,,,;,,,,,,,(;,,,)和鲍曼不动杆菌(,;,,,,,,,;,,, 论目,,,)情况，探讨,,,释放的发生机制及其与细菌形态学改变的相关性。中文摘要要氏阴性菌(,,,,,,,,,,,,,，,(,,,,,,,,,)，以及,结果:,,,,,;,,,，,,,,,,;,,，,,,,,,,,,,,,,,,,;,,, 论 文大肠杆菌:,,,,,,,组和,,,,组光镜下,,时均能观察到细菌菌体杆菌:内毒素关键词:头孢哌酮舒巴坦:左氧氟沙星:阿米卡星:鲍曼不动杆菌:大肠重要机制之一。菌，导致细菌不同形态学改变，可能是其诱导细菌释放不同水平,,,的菌明显丝状化;,,,组无论是光镜还是扫描电镜均未观察到菌体形态变浓度、作用时间及不同菌种等因素有关。菌，诱导细菌释放不同水平的,,,，其诱导力与抗菌药物种类、抗菌药物鲍曼不动杆菌:,,,,,,,组光镜下,,时形态变化不明显，扫描电镜物。疗时应在考虑抗菌效应的同时尽量选择诱导细菌释放,,,较少的抗菌药菌，,,,,,,,和,,,,比,,,诱导时释放的,,,多，因此临床抗感染治,种抗菌药物作用于鲍曼不动杆菌和大肠杆下,,时可见菌体拉长，扭曲，中间有凹陷;,,,,组光镜下,,时可见细, ,,,,,,、,,,,和,,,结论:,不同时间抗菌药物对细菌产生,,,的影响 论丝状化改变，,,,组在,,时大部分细菌菌体裂解成碎片。,(,,，,抗菌药物作用后细菌形态学变化随着抗菌药物作用时间的延长，其诱导细菌释放,,,也逐渐增加。对照组:随着培养时间的延长，两种细菌自发释放,,,的量逐渐增,不同菌种对细菌产生,,,的影响加，在,,后各时相点大肠杆菌的,,,水平均高于鲍曼不动杆菌，两者之各不相同。抗菌药物组:,种抗菌药物以各浓度作用于两种细菌，,,,释放情况间差异有显著性意义(,,,(,,)。,, ,,,,,,、,,,,和,,,少。中文摘要化。,, 文 论 文,胍(,,,,:,?,,,,,,,,,,怂?:,,,(,?,,,?,(,(,?,，,,,,,，,，,,?,，,,,,,:,,,,,,,,,,,,,怂?(,,,，,,,,;,,;、胁,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,)，,,,,,,,,,;,,(,,,,)，,,,,,,,,,,:,,,,;,,,,,,,,,,,,;,(,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,畋(,,,,,,,,(,,，,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,(,,，,，,,，,，,,,,)(,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,;,(,,,,,,，,(,,,,,,,(,,,，,,,,,;,,,,:,,,,,,,;,,(,,,),,(,,,),,,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,;,,,(;,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,,;,,,(,,,,,,,,,,,,,,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,英文摘要,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,;,,(,,,,,,,,,,,,,;,,, ,,,(,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,纾乃,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,;,,,,,,,,,, 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,,,,,,,—,,,,;,,,,,,,,(,,，,英文摘要;,,,,,,(，,;,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,;,,,(，,,,,,,,;,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,(,;,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,,,,;,,,,,,,:,(,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,;,,,;,,,(,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,(;,,,:,,,,,,,,,,,,(,,,,;,,,;,,,;,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,—,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,;,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:，,,;,,,,,,,;,,,;;,,,,,,,,,,;,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,(,,,,,,,(;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,茫校冢樱拢裕椋螅粒猓幔酰恚幔睿睿椋椋簦瑁澹颍澹妫颍铮恚瑁椋纾瑁澹颍恚幔 猓澹悖铮欤椋鳎幔螅颍澹欤幔簦澹洌澹幔悖瑁椋睿悖颍澹幔螅澹洌粒簦簦穑澹螅簦椋恚澹猓铮簦瑁椋睿悖酰猓幔簦椋铮睿茫铮睿簦颍铮欤螅簦颍幔椋睿螅簦椋恚澹矗椋纾睿椋妫椋悖幔睿簦椋睿悖颍澹幔螅澹洌纾颍幔洌酰幔欤欤颍澹欤澹幔螅澹椋睿洌酰悖澹洌簦椋恚澹幔睿簦椋猓椋铮簦椋悖螅椋睿悖酰猓幔簦椋铮睿穑颍铮欤铮睿纾幔簦椋铮睿茫幔睿簦椋猓椋铮簦椋悖螅蹋校樱猓幔悖簦澹颍椋幔澹妫妫澹悖簦恚椋悖颍铮螅悖铮穑澹桑睿铮妫洌澹穑颍澹螅螅椋铮睿桑椋妫妫澹颍澹睿簦常睿悖酰猓幔簦椋铮睿鳎澹颍澹幔簦簦铮睿铮簦铮睿澹铮颍幔螅澹澹睿睿铮铮睿?论 文 论 文英文摘要,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,;,,,,,,,,;,,,;,,,,,,,,,;,,;,,,,,;,,;;,,,;,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,;,,,,,,,,,, 论 文 论 文不同类型抗菌药物在革兰氏阴性菌感染中诱导内毒素释放的实验性研究中国农业微生物菌种保藏管理中心河北省药品检验所头孢哌酮舒巴坦瑞阳制药有限公司,,,,、,,,分别作用于以上两种菌，用动态浊度法检测滤液中,,,含究主要集中在大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷白杆菌等细菌，对鲍曼不动大肠杆菌,,,,,,,有些抗菌药物在诱导细菌释放内毒素的同时会引起细菌形态改变。这些研物治疗,,,感染，在致细菌死亡的同时可引起不同程度的内毒素释放，鲍曼不动杆菌,,,,,,(,菌株,实验材料材料与方法抗菌药物作用机制之间的关系，以便更好的指导临床正确用药。量，进行,,,水平比较，并结合细菌在形态上的改变，进一步探讨其与这些细胞因子又可导致大量炎症细胞活化，进而形成“瀑布效应”，引起择了大肠杆菌和鲍曼不动杆菌，用,种不同类型的抗菌药物,,,,,,,、注度越来越高，鲍曼不动杆菌引起败血症也多有报道阳。们。因此本实验选杆菌内毒素释放情况研究尚少。近几年，,,,感染中鲍曼不动杆菌的关严重的感染,?,?引。内毒素(,,,,,,,,,,;;,,,,,,，,,,)是,,,的主要致目疗,,,感染的主要手段之一，而近年来大量研究【,?,?,?,?,】表明应用抗菌药全身性炎症反应综合征(,，,,)，最终导致器官衰竭。使用抗菌药物是治病物质，它能刺激机体产生多种促炎细胞因子，如,,,,,、，,(,和，,(,等，刖 前，,,,感染在败血症中仍占主要地位，,,,败血症是医院内最,,,,(同源于,(,药品研究论文,,,,,,,,,),,置(?上,?量 论 文 论 文,(,菌种复苏、传代与保存,实验方法封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取肉汤培养基，滴在灼热的毒，再用,,,酒精棉球擦净，放在灭菌双碟内。点燃酒精灯，将菌种管的用砂轮将冻干菌种瓶颈部挫出刻痕，将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消,(,(,菌种复苏,,,型低温离心机购买的鲍曼不动杆菌为冻干菌种，需要先进行复苏，经传,代即可应北京西城区医疗器械厂北京医用离心机厂北京医用天平厂山东新华医疗器械股份有限公司海尔集团公司日本三洋上海市跃进医疗器械一厂武汉汇诚生物科技有限公司天津药典仪器厂上海跃进医疗器械有限公司江苏海门县实验仪器厂法国梅里埃公司天津市天大天发科技有限公司(,,?和,。,冰箱厦门市鲎试剂实验厂有限公司中国药品生物制品检定所齐鲁制药有限公司左氧氟沙星扬子江药业集团有限公司阿米卡星电热恒温水温箱鲎试剂细菌内毒素工作标准品架盘药物天平立式灭菌器细菌内毒素工作品低温冰箱((,,?)电热恒温培养 箱,,(,)培养基,,,(,(,,(，，电热恒温鼓风干燥箱,,,(,电热鼓风干燥箱细菌内毒素检查用水,:,主要实验仪器,,(,)培养基,(,主要试剂用。比浊仪,,,,,,细菌内毒素测定仪,,一,自动旋涡混合器,,,(,,恒温摇床研究论文,,,,,,,,,,,, 论 文 论 文按照,,,，标准中琼脂稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(?,)。,(,药物最低抑菌浓度(?,)测定将,种抗菌药物配成,,,,,,,,的标准储备液，(,,?冰箱冻存，每次,,,,,，,,?孵育过夜，然后将菌悬液用生理取一支使用。将配制好的储备液稀释成,,,,,,,,、,,,,,,,、,,,,,,,、汤培养基中，于恒温摇床上,,,肉,(,(,抗菌药物配制挑取平板上菌落性状相似的,”,?,个实验菌菌落，接种于,,,,(,(,菌悬液制备盐水稀释，用比浊仪调至,(,,(约含,,,,,,,,,)。 文塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由底向上，将接种环轻贴斜面株,。,保存，一个月转种一次。种完毕的细菌管置,,?培养,,，,一,,,。菌种经过转种,代后应用，工作菌养基管棉塞塞上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。将已接的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。取出接种棒，在火焰旁将培,(,(,菌种传代与保存塞上棉塞，左手将菌种管放下，取琼脂斜面,支，照上述操作打开棉至火焰旁。稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移部夹住棉塞，拔开棉塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，往返通过,次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌棒后端，将接种环烧红,,,，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种新鲜制备斜面培养基，标签上写明菌名及接种日期。琼脂斜面及,，,，肉汤(,,(,)培养基)内，置,,?培养,,”,,,,,,。接杆菌。细菌培养,,”,,,,,,后，送检验科做菌种鉴定，结果,,(,,为鲍曼不动种完毕后将滴管及菌种管投入消毒液内。 论至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至打开，放入灭菌双碟内，另取,支灭菌滴管，在火焰旁吸取肉汤少许，加菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口,,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,、,,,,,，,(,,,,,，,，,,,,,,，研究论文 论 文在配置含药培养基时按,:,(配置的药物溶液:琼脂培养基)加入平皿(见用蒸馏水冲洗数遍，清洗干净后在,,,双氧水中浸泡,,，再用无热,(,(,塑料用品锡纸包好，放入烤箱，,,,?烘烤,,。用硫酸洗液浸泡过夜，用清水洗净，再用蒸馏水冲洗，,,”,烤干，用,(,(,玻璃器材为了避免实验结果受干扰，对所用实验用具进行除热原处理。,,,,,,。稀释菌液于,,,,,内接种完毕，且接种时浓度按照从低浓度到民共和国药典标准进行操作。本实验选择动态浊度法测定样品中内毒素值，根据,,,,年版中华人好的菌液(,,山)点种到各浓度的含药培养基上，使最终每点菌数为,,,,将制好的,(,,(,,,,,,,,,)菌悬液稀释,,倍成,,,,,,,,,，将稀释将平板置于暗色、无反光表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的药,,,,、,(,,,,,,、,(,,,,,,,的药物工作液。 文,(,(,含药培养基制备,, ,,,,。对于大肠杆菌的,，,分别为:高浓度的顺序接种，,,?孵育,,,,,,观察结果。以不含抗菌药物的培养按,,(,)培养基配制说明配制琼脂培养基，高压灭菌(, ,,?、,,,,,)三种抗菌药物对于鲍曼不动杆菌的,，,分别为:,,,,,,,后,,。,水浴，将己稀释好的抗菌药物工作液加入到培养基中加热溶解，物稀释度为终点浓度。基为生长对照。,(,(,细菌接种充分混和倾入平皿，琼脂厚度为,,,,,，使培养基最终浓度为,,,,,,,、,(,内毒素检测方法研究论文,(,除热原处理,(,,,,,,，,,,,(,(,结果判断,(,,,,,,，,,,,)。,,,,、,(,,,,,,,、,(,,,,,,,,。 论,,,,,，,,,,,，,,,,,，,,,,,，,,,,,，,(,,,,,，,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,,,(,,,,,,、,(,,,,,,,、,(,,,,,,、,(,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,(,,,,,,，,,,,,(,,,,,、,(,,,,,,。 论 文——,,(,,,,,,——一,(,,原水冲洗，,,?烤干备用。,(,(,生成标准曲线待最后一个浓度点的反应曲线超过,,,(,,限值后，停止数据采集，检测。在加完样后立即用封口膜封口，放入,,,,,,细菌内毒素测定仪中，开始加入到装有鲎试剂的小试管中，取,个平行管，做阴性对照。每个浓度点液,,,，每个浓度点更换加样头。打开一支新的内毒素检查用水，取,(,,,到装有鲎试剂的小试管中，每个点取,个平行管。在加样前混旋内毒素溶的内毒素四个浓度点,,,,,,,、,,,,,,、,(,,,,，，,,、,(,,,,,,,分别加,(,,,把每个试管的内容(试剂名称、内毒素含量)输入计算机，取稀释好,(,(,制备标准曲线意不要产生气泡)。,(,(,(,取仪器专用试管,,支定量专用小试管，分别加入,(,,,鲎试剂(注释成,,，,，,(,，,(,,,,,,,四个浓度，每稀释一步前充分振荡,,,，然后吸取(此水重新开瓶)，静置,”,,,,,,,，待其充分溶解后，将它们混合在一支,(,(,(,取,支鲎试剂(,(,,,,支)，分别加入,(,,,细菌内毒素检查用水,(,(,制备鲎试剂溶液内轻轻摇匀、待用。,(,绘制标准曲线,(,(,稀释内毒素工作标准品,(,,,水,(,,,水,(,(,(,取效价为,,,,,的内毒素工作标准品,支，开启后加入,(,,,内毒素检查用水溶解，然后用封口膜封闭瓶口，在混旋器上混合,,,,,，混,,,,,,,,———?,,,,,,,————?, 论旋后得到,,,,,,,,的内毒素工作标准品溶液。,(,(,(,按,,倍稀释法制备内毒素工作标准品浓度梯度，把工作标准品稀液体加到下一梯度试管中。,(,,,水,(,,,水,(,,,水研究论文,(,,,,,,,,?,(,,,,,,,,,————?,,(,,,,(,,, 文 论 文?肉汤培养基的无菌三角瓶中，配成,,,,,,浓度，即为制备,(,,(,,,,,,,,,)的菌悬液，用生理盐水稀释,,倍成,,,,,,,,,，,,,诱导试验酮舒巴坦浓度。,,，,头孢哌酮舒巴坦药物浓度配制杆菌和大肠杆菌,,,,，,、,,,，,、,,,，,、,(,,,，,的含药肉汤培养基。其它药物依据上述操作步骤进行配制，最后得各药物作用于鲍曼不动舒巴坦浓度。肉汤培养基的无菌三角瓶中，配成,,,,,浓度，即为,(,,,，,头孢哌酮无菌试管中混匀，配成,,,,,,浓度。再取,,,加入到装有,,,,的,,取,,,,,的头孢哌酮舒巴坦稀释液,,,，加入到盛有,,,生理盐水的,(,(,作用于鲍曼不动杆菌的,(,,,肉汤培养基的无菌三角瓶中，配成,,,,,浓度，即为,,,，,头孢哌水的无菌试管中混匀，配成,,,,,,浓 度。再取,,,加入到装有,,,,的,,,,,,的头孢哌酮舒巴坦稀释液,,,，加入到盛有,(,,,生理盐,(,(,作用于鲍曼不动杆菌的,,×,，,头孢哌酮舒巴坦药物浓度配制,(,(,作用于鲍曼不动杆菌的,,,，,头孢哌酮舒巴坦药物浓度配制,,,诱导试验中抗菌药物配制的无菌试管中混匀，配成,,,,,,,浓度。再取,,,加入到装有,,,,的取,,,,,,,的头孢哌酮舒巴坦稀释液,,,，加入到盛有,,,生理盐水取,,,,,,,,的头孢哌酮舒巴坦储备液,,,，加入到盛有,(,,,生理,,,,,,，变异系数,,,(,,,,)，标准曲线为,,,,,(,,,,(,(,,,,,,,，孢哌酮舒巴坦浓度。的,,肉汤培养基的无菌三角瓶中，配成,,,,,,浓度，即为,,,,，,头盐水的无菌试管中混匀，配成,,,,,,,浓度。再取,,,加入到装有,,,,做三条标准曲线，然后进行数据合并，将三条标准曲线拟合成为一条产(,(,,,,(,,，,,(,,)，标准曲线符合要求,?。 文生成标准曲线。,个浓度反应时间在,,,,?,,,,,,，而阴性对照管反应时间标准曲线，拟合后的标准曲线为:,,,一,(,,,,(,(,,,,,,,，,(,(,,,,(,,,,(,(,作用于鲍曼不动杆菌的,取,研究论文,,(,,)。,(,,(,„ 论 论 文叫,叫,,,倍叫,,,,倍原液叫,倍,倍一,,倍一,,,,,,,的工作品,,(,,,含内毒素工作品,(,,,,,,的,,,,倍供试品,,,倍供试品，,(,,,,含内毒素,,,,倍稀释供试品阳性管:取,(,,,,,,,,,,的工作品,,(,,,含内毒素工作品,(,,,,,,的,,,倍供试品实验结果分析:阴性对照时间小于标准曲线最小点,(,,所用反应时间，,,倍供试品，,(,,,,含内毒素,,,倍稀释供试品阳性管:取,(,,,,,倍供试品,,,,,,的工作品,,(,,,含内毒素工作品,(,,,,,,的,,倍供试品，,(,,,,含内毒素,,倍稀释供试品阳性管:取,(,,,,品,,(,,,含内毒素工作品,(,,,,,,的原液供试品 文?因为不知道样品具体不干扰稀释倍数，需要做干扰实验来确定其稀释,(,动态浊度法测定内毒素分别向每瓶已配好的含不同浓度抗菌药物的肉汤培养基中加,(,,,稀释好的菌液，摇匀，使每瓶内细菌终浓度为, 论,,,,,,,,，置恒温摇床,,。,、原液供试品阳性管:取,(,,,,原液，,(,,,,含内毒素,,,,,,的工作器过滤，收集到的滤液立即放到(,,?冰箱，直至检测时取出。该实验同时毒素浓度为,(,,,,,,。,,肉汤培养基干扰实验,,,,,,振荡培养。分别于,,、,,、,,、,,、,,取,,,用,(,,,(,,微孔滤,(,(,供试品干扰试验品溶液不存在干扰作用。倍数。当内毒素回收率在,,,,,,?,,,,之间，则认为在此实验条件下供试将,,肉汤培养基稀释,,、,,,、,,,,倍，做其干扰实验。外加内设不含抗茵药物的对照管及不含抗茵药物和细菌的空白管。,(,,,水,(,,,水,(,,,水,(,,,水研究论文,,倍,(,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,,,,,,————,?,,,,,,,————?,(,,,,,,,(,,,,(,(,(, 论 文,,,,,,,以,(,,,作用于鲍曼不动杆菌,,时样品内毒素含量测在,(,,，,各抗菌药物培养不同时间的细菌肉汤中，取,,,加到,,离心,,,,,。离心完毕，弃去上清，取沉淀涂片。待样品干燥后，进行革管中，放入低温离心机中，,。,，,,,,,,,，离心,,,,,。离心 完毕，取出,(,细菌形态学观察使其内毒素值控制在,(,,,,,,,,,,范围内，然后进行检测。,(,(,光镜,,管，弃去上清，加,(,,,生理盐水清洗，再入低温离心机，,。,，,,,,,,,，原液内毒素含量。,(,(,(,(,待各管(阴性对照管除外)的,,值超过,(,,，终止实验，读取一浓度平行测定,管。按照上述操作步骤将,,,诱导实验中收集到的样品稀释,,,,,,,倍，,(,(,(,(,将阴性对照、阳性对照、供试品溶液及供试品阳性溶液分别加入充分溶解后混合在一起。取仪器专用试管，分别加入,(,,,鲎试剂。,(,(,(,(,取鲎试剂，加入,(,,,细菌内毒素检查用水，静置,，,,，,分钟，漩涡振荡,,,)到装有,(,,,鲎试剂溶液的小管中，置入,,,,,,细菌内毒素测定仪，每验的步骤将细菌内毒素工作品稀释到,,,,,,、,(,素检查用水，得到,,,,,,,内毒素工作品，漩涡振荡,,,,,。参照干扰试,(,(,(,(,取出一支细菌内毒素工作品(,,,,)，开启，加入,,,细菌内毒液。扰试验中供试品阳性溶液的配制方法，配制,,,,倍稀释的供试品阳性溶品，室温融化，漩涡振荡,,,，将样品稀释到,,,倍和,,,,倍，参照干,(,(,(,(,取出,,,,,,,以,(,,，,作用于鲍曼不动杆菌,,时收集到的样,,,,,，备用。(使用前依据上述,,肉汤培养基干扰实验的测定方法，测得含药,,肉汤,(,(,样品内毒素含量测定,(,(,(,含药,,肉汤培养基干扰实验 论培养基在,,,,倍时回收率为,,,,，最接近,,,,。 文稀释,,,,倍时回收率为,,,,，最接近,,,,。定研究论文所以进行内毒素样品测定时最少把样品稀释,,,,倍。,(,(,(, 论 文,,,,,,,,,,,,,,,,:以,?,、,,,和,,,，,作用于鲍曼不动杆菌,(,(,扫描电镜随着抗菌药物作用时间的延长，其诱导细菌释放,,,也逐渐增加。,不同时间抗菌药物对细菌产生,,,的影响当,种抗菌药物以,(,,，,作用于鲍曼不动杆菌时，,,,释放量为:少。(,,,(,，,,,,,等量,,,;不同浓度,,,作用于大肠杆菌时，诱导细菌,,,释放量均较,不同类型抗菌药物对细菌产生,,,的影响不同浓度,,,作用于鲍曼不动杆菌时，在,(,,，,诱导细菌释放中菌释放,,,较多，,,，,和,,,，,释放,,,均较少。不同浓度,,,,,,,和,,,,作用于两种细菌时，在,(,,，,诱导细,不同浓度抗菌药物对细菌产生,,,的影响兰氏染色，光镜下观察细菌形态变化。 论时，,,,的释放量为:,,,,,,,,,,,,,,,,。(,,,(,,,，,,,,,当,种抗菌药物以,(,,，,、,,，,、,,，,和,,,，,作用于大肠杆菌时，,,,的释放量为:,,,,,,,,,、厂,,,,,,。,,肉汤培养基中诤阄乱〈采希保担埃颍穑恚常贰娣跤梗缓蠼海蹋校佑盏际笛橐约埃蹋校蛹觳庵馗矗炒危茫樱校樱樱欤常敖型臣蒲恚羧?桨迳暇湫宰聪嗨频模场保蹈霰欢司洌又钟冢担恚煊蒙硌嗡?停帽茸且堑髦粒希担停ㄔ己保埃福茫疲眨恚保?椭粒保埃肥菀裕皇浚蟊硎荆缓笮蟹讲罘治觯校迹希埃涤型臣蒲б庖濉,茫疲眨恚欤。保埃酰斓阒值蕉哉占埃希担停桑酶骱?嘌希常贰娣跤福琛,鸺锻阉担埃ァ?罚埃ァ?福埃ァ?梗埃ァ?保埃埃ィ?鳎担恚椋睿缓笤儆茫欤铮铮ネ阉担颍幔椋睢,婵崭稍铮平穑缓笥蒙璧缱酉晕?倒鄄欤ǎ樱常担埃埃危毡荆缓笕〔模保ノ於?潭ǎ丁保罚恚椋睿羲 逑戳酱危看危担恚椋睿掖迹场保埃?幔保保保叮玻保巴臣蒲碚障唷,芯柯畚模ǎ裕幔猓欤澹场保埃?文 论 文对照组:随着培养时间的延长，两种细菌自发释放,,,的量逐渐增丝状化改变，,,,组在,,时大部分细菌菌体裂解成碎片。(,,,(,)大肠杆菌:,,,,,,,组和,,,,组光镜下,,时均能观察到细菌菌体, (,,，,抗菌药物作用后细菌形态学变化 论菌明显丝状化;,,,组无论是光镜还是扫描电镜均未观察到菌体形态变下,,时可见菌体拉长，扭曲，中间有凹陷;,,,,组光镜下,,时可见细鲍曼不动杆菌:,,,,,,,组光镜下„,,时形态变化不明显，扫描电镜,不同菌种对细菌产生,,,的影响,抗菌药物组:,种抗菌药物以各浓度作用于两种细菌，,,,释放情况加，在,,后各时相点大肠杆菌的,,,水平均高于鲍曼不动杆菌，两者之化。(,,,(,”,,,?,),,,,)各不相同。(,,,(,，,,,,,,(,研究论文间差异有显著性意义(尸,,(,,)。 文论 文 论 文.